姚亞洲 鄭引索 陳峰云 陳 濤 田昱平 李小妮 楊彩霞 張 玲

（寶雞市中心醫(yī)院血液風(fēng)濕科，陜西 寶雞 721008）

175例急性白血病流式細(xì)胞術(shù)免疫分型的研究

姚亞洲 鄭引索 陳峰云 陳 濤 田昱平 李小妮 楊彩霞 張 玲

（寶雞市中心醫(yī)院血液風(fēng)濕科，陜西 寶雞 721008）

目的 探討急性白血病流式細(xì)胞術(shù)免疫分型的意義以及與FAB分型的對(duì)照。方法 采用流式細(xì)胞術(shù)三色熒光標(biāo)記技術(shù)和CD45/SC雙參數(shù)散點(diǎn)圖設(shè)門，檢測(cè)175例急性白血病的免疫表型，對(duì)抗原表達(dá)情況進(jìn)行分析。結(jié)果 FAB分型和免疫分型的相符率90.28%（158/175），175例急性白血病檢出B-ALL44例，占25.14%，其主要表達(dá)的抗原陽(yáng)性率從高到低依次為CD19、CD22、CD79a；T-ALL19例，占10.86%，其主要表達(dá)的抗原陽(yáng)性率從高到低依次為HLA-DR、CD34、CD5、CD7、cCD3、CD8、CD38；非M3 AML103例，占58.86%，其主要表達(dá)的抗原陽(yáng)性率從高到低依次為CD33、CD117、CD38、CD13、HLA-DR、MPO、CD34、CD123、CD15、CD64；共檢出AML-M3患者6例，占0.34%，其主要表達(dá)的抗原陽(yáng)性為MPO、CD13、CD33、CD117、CD123、CD64。結(jié)論 流式細(xì)胞術(shù)免疫分型在白血病分型中起重要作用，是FAB分型的補(bǔ)充和修正,提高了急性白血病診斷的準(zhǔn)確率，有必要進(jìn)一步加強(qiáng)流式細(xì)胞術(shù)免疫分型的規(guī)范化和標(biāo)準(zhǔn)化工作。

急性白血??；流式細(xì)胞術(shù)

急性白血病是一類造血干細(xì)胞的惡性克隆性疾病，因白血病細(xì)胞自我更新增強(qiáng)、增殖失控、分化障礙、凋亡受阻，而停滯在細(xì)胞發(fā)育的不同階段。我國(guó)各類白血病的發(fā)病率為3～4/10萬(wàn)人，在惡性腫瘤所致的病死率中，白血病居第6位（男性）和第7位（女性），在兒童和35歲以下的人群中則居第1位[1]。準(zhǔn)確地為白血病的進(jìn)行分型對(duì)于白血病的診斷、治療方案的確定、預(yù)后判斷、療效觀察都有著非常重要的意義。鑒于染色體分析技術(shù)以及分子生物學(xué)檢查技術(shù)短期難于大范圍普及，作為MICM分型的重要組成部分，流式免疫分型能精確地反映白血病細(xì)胞的來(lái)源和分化程度，是急性白血病的診斷、治療及預(yù)后判斷的重要依據(jù)，流式細(xì)胞術(shù)免疫分型的開(kāi)展促進(jìn)了急性白血病診斷治療水平的進(jìn)展。我們通過(guò)對(duì)我科收治的175例初診急性白血病患者采用流式細(xì)胞免疫分型和骨髓形態(tài)學(xué)檢查的結(jié)果進(jìn)行總結(jié)和分析，報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 對(duì)象：2008年10月至2014年5月在本院血液科送檢的免疫分型病例共175例，均為初診病例，男97例，女78例，年齡6～83歲。

1.2 方法

1.2.1 骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查：患者局麻下行骨髓穿刺涂片，常規(guī)瑞氏加吉姆薩染色，細(xì)胞化學(xué)檢查檢測(cè)MPO，PAS，NSE，油鏡下分類計(jì)數(shù)200個(gè)有核細(xì)胞，個(gè)別患者計(jì)數(shù)500個(gè)細(xì)胞，按法美英（FAB）白血病分型標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分型[2]。

表1 109例AML中不同抗原表達(dá)

1.2.2 流式細(xì)胞術(shù)免疫表型分析：采集骨髓標(biāo)本1～2 mL，使用EDTA抗凝。外周血原始細(xì)胞＞30%且白細(xì)胞計(jì)數(shù)＞20×109的部分患者采用外周血標(biāo)本，24 h內(nèi)送至中心實(shí)驗(yàn)室，按實(shí)驗(yàn)室常規(guī)標(biāo)記熒光抗體，包括T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗體CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、cCD3；B淋巴細(xì)胞相關(guān)抗體CD10、CD19、CD20、CD22、CD79a、sIgM；髓系細(xì)胞相關(guān)抗體CD13、CD14、CD15、CD33、CD64、CD61、MPO、CD42b、Gly；以及HLA-DR、CD34、CD45、CD38、TdT等通用抗體。采用美國(guó)BD公司生產(chǎn)的四色流式細(xì)胞儀采集10000個(gè)細(xì)胞，用SystemⅡ軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行自動(dòng)分析。

1.2.3 流式細(xì)胞儀和所有試劑均購(gòu)自美國(guó)BD公司。以胞質(zhì)抗原≥10%、膜表面抗原≥20%定義為陽(yáng)性；若髓系和一個(gè)淋系積分均＞2，參照白血病免疫學(xué)積分系統(tǒng)（EGIL，1998）[3]診斷為急性混合細(xì)胞白血病。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：應(yīng)用Microsoft Excel2007軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以陽(yáng)性百分比表示。

2 結(jié) 果

2.1 骨髓形態(tài)學(xué)結(jié)果：本組175例急性白血病患者經(jīng)骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查，初診時(shí)按FAB分類，急性髓細(xì)胞白血病（AML）106例，急性淋巴細(xì)胞白血?。ˋLL）61例，形態(tài)學(xué)不典型無(wú)法判斷者8例。

2.2 免疫分型結(jié)果：本研究中175例急性白血病經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)免疫分型結(jié)果，原始細(xì)胞占骨髓有核細(xì)胞的比例為最低24.5%，最高達(dá)99%，中位數(shù)為80.57%，流式細(xì)胞術(shù)免疫分型結(jié)果，ALL 63例，AML 109例，混合細(xì)胞白血病（MLL）3例。4例形態(tài)分型經(jīng)過(guò)免疫分型得以修正，2例ALL-L3修改為T/M，2例AML-Ml修改為T-ALL；8例骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)難以確診的患者為1例為B-ALL，1例為T-ALL，1例為B/M，其余5例均為AML，F(xiàn)AB分型和流式細(xì)胞免疫分型的相符率為90.28%。

2.3 B-ALL抗原表達(dá)情況：本研究中175例急性白血病檢出B-ALL44例，占25.14%，其主要表達(dá)的抗原陽(yáng)性率從高到低依次為HLA-DR、CD38、CD34、CD19、CD22、CD33、CD79a、CD123。

2.4 T-ALL抗原表達(dá)情況：本研究中175例急性白血病檢出T-ALL19例，占10.86%，其主要表達(dá)的抗原陽(yáng)性率從高到低依次為HLA-DR、CD34、CD5、CD7、cCD3、CD8、CD38。

2.5 AML抗原表達(dá)情況：本研究中175例急性白血病檢出非M3AML103例，占58.86%，其主要表達(dá)的抗原陽(yáng)性率從高到低依次為CD33、CD117、CD38、CD13、HLA-DR、MPO、CD34、CD123、CD15、CD64。175例急性白血病共檢出AML-M3患者6例，占0.34%，其主要表達(dá)的抗原陽(yáng)性為MPO、CD13、CD33、CD117、CD123、CD64。見(jiàn)表1。

3 討 論

急性白血病是一組造血干細(xì)胞的惡性克隆性疾病，是造血細(xì)胞在某一分化階段的大量積累，具有高度的異質(zhì)性，通過(guò)對(duì)這一階段細(xì)胞的形態(tài)、免疫、遺傳學(xué)以及分子生物學(xué)檢驗(yàn)分析對(duì)白血病進(jìn)行正確分型，對(duì)指導(dǎo)臨床治療與判斷預(yù)后均有著十分重要的意義。隨著現(xiàn)代免疫學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)、分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，結(jié)合白血病形態(tài)學(xué)特征，世界衛(wèi)生組織于1999年正式公布造血和淋巴組織腫瘤分類框架，并在2001年詳細(xì)介紹了造血和淋巴腫瘤的分類和診斷并提出MICM分型，近年來(lái)已經(jīng)普遍應(yīng)用于臨床。FAB形態(tài)學(xué)分型是應(yīng)用范圍最廣泛和使用時(shí)間最長(zhǎng)的白血病分型及診斷方法，然而顯微鏡下的細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察和細(xì)胞化學(xué)方法對(duì)細(xì)胞識(shí)別受檢驗(yàn)者的經(jīng)驗(yàn)影響，主觀性明顯，加上白血病細(xì)胞自身的多態(tài)性和異質(zhì)性，23%～36%左右的急性白血病難以得到準(zhǔn)確診斷，而流式免疫分型是根據(jù)白血病細(xì)胞表達(dá)的系列抗原，來(lái)確定白血病細(xì)胞的來(lái)源以及分化程度，提高了白血病診斷的準(zhǔn)確性、客觀性和可重復(fù)性[4]。本組175例急性白血病中有4例FAB分型與流式細(xì)胞免疫分型不符，與國(guó)內(nèi)報(bào)道相似；對(duì)8例骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)不典型的患者進(jìn)行了分型。由此多數(shù)學(xué)者為流式細(xì)胞術(shù)免疫分型可以彌補(bǔ)FAB細(xì)胞形態(tài)學(xué)分型的不足，使其準(zhǔn)確性提高10%～20%[5]，為急性白血病確診后治療方案的選擇以及對(duì)白血病預(yù)后的判斷提供了重要依據(jù)。本組共檢測(cè)出急性淋巴細(xì)胞白血病63例，其中B-ALL44例，T-ALL19例。44例B-ALL中，CD19、CD22、CD79a、CD123是B系急性淋巴細(xì)胞白血病的敏感標(biāo)志，其中尤以CD79a的表達(dá)較之胞質(zhì)免疫球蛋白重鏈的表達(dá)更早，持續(xù)至B細(xì)胞的漿細(xì)胞階段仍有表達(dá)，被認(rèn)為是B細(xì)胞最特異的標(biāo)志之一[6]。19例T-ALL中CD5、CD7、cCD3的表達(dá)率最高（100%），表明CD5、CD7、cCD3的敏感性高，其中cCD3是T-ALL的特異標(biāo)志之一[3]。本研究共檢出AML109例，其中非M3AML103例，主要表達(dá)CD33、CD117、CD38、CD13、HLA-DR，MPO其中MPO是髓系白血病的標(biāo)志性特征。AML-M3患者6例，主要表達(dá)MPO、CD13、CD33、CD117、CD123，CD64，與國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道一致[7]。由于AML-M3的白血病細(xì)胞起源于祖細(xì)胞，分化相對(duì)較成熟，較少表達(dá)CD34和HLA-DR，本組CD34和HLA-DR在AML-M3中的表達(dá)率分別為15.15%和0。針對(duì)高度異質(zhì)性和形態(tài)多樣性的急性白血病，在遺傳學(xué)和分子生物學(xué)還不能很好普及的當(dāng)前，流式細(xì)胞術(shù)免疫分型診斷是對(duì)傳統(tǒng)FAB形態(tài)學(xué)分型診斷的重要補(bǔ)充和修正，尤其是可以確診一些特殊類型的急性白血病，提高了急性白血病的分型準(zhǔn)確性，有利于判斷預(yù)后及治療方案的選擇。在目前的現(xiàn)狀下，我們建議：①在進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)免疫分型時(shí)，按照WHO提出MICM分型的要求，需要結(jié)合FAB分型、細(xì)胞遺傳學(xué)、基因檢測(cè)和臨床相關(guān)信息，為急性白血病提供更精確的診斷；②在掌握已有的相關(guān)信息基礎(chǔ)上，盡量全面地檢測(cè)單克隆抗體，以便于疾病的準(zhǔn)確診斷、預(yù)后判斷；③就目前而言，急需加強(qiáng)流式細(xì)胞術(shù)免疫分型的規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化工作，在有條件的地區(qū)，相關(guān)實(shí)驗(yàn)室可以實(shí)行局部規(guī)范化和標(biāo)準(zhǔn)化不具備條件的單位，盡可能選擇區(qū)域中心的實(shí)驗(yàn)室完善流式細(xì)胞免疫分型檢測(cè)來(lái)提高診斷準(zhǔn)確性。

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Immunophenotyping of 175 Case with Acute Leukemia by Flow Cytometry

YAO Ya-zhou, ZHENG Yin-suo, CHEN Feng-yun, CHEN Tao, TIAN Yu-ping, LI Xiao-ni, YANG Cai-xia, ZHANG Ling
(Department of Blood Rheumatology, Baoji Central Hospital, Baoji 721008, China)

Obiective To investigate the significance of immunophenotype in acute leukemia via flow cytometry, and study the relationship of immunophenotype and FAB phenotype. Methods Immunophenotypes were detected by three-color flow cytometry(FCM )and CD45/SSC gating in 175 cases of acute leukemia(AL)and antigentic expressions were analysed. Results FAB classification and immunophenotype consistent rate of 90.28% (158/175), 175 cases of acute leukemia detected in B-ALL44 cases, accounting for 25.14%, antigen positive rate of its main expression in the order of CD19, CD22, CD79a; T-ALL19 cases, accounting for 10.86%, the positive rate of antigen expression and its main descending order of HLA-DR, CD34, CD5, CD7, cCD3, CD8, CD38; non M3 AML103 cases, accounting for 58.86%, its the positive rate of antigen expression in the order of major CD33, CD117, CD38, CD13, HLA-DR, MPO, CD34, CD123, CD15, CD64; were found in AML-M3 6 patients, accounting for 0.34%, and its main antigen expression of MPO, CD13, CD33, CD117, CD123, CD64.Conclusion Immunophenotype Plays an important role in the classification of acute leukemia and is a supplementary and correction of FAB phenotype. It can enhance the exactness of diagnosis and needs to be standardized.

Acute leukemia; Flow cytometry

R733.71

：B

：1671-8194（2014）31-0033-02