張士振， 季添英， 馮小妹， 朱晨曦， 尹華寶， 黃訓(xùn)端， 尤碩愚

(安徽大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院， 安徽 合肥 230601)

地木耳(NostoccommuneVauch.)是藍藻門藍藻綱念珠藻科(nostocaceae)念珠藻屬植物，平時所見的片狀藻體是地木耳的原植體(thallus)[1]。地木耳富含人體必需的氨基酸、多種微量元素和維生素等，還含有一定的粗脂肪和粗纖維，是典型的綠色食品[2]。地木耳也可入藥，在《本草綱目》和《中國藥典》中均有記載，有清熱明目，收斂益氣之功效。過去對地木耳的研究多集中于其生態(tài)分布、生理生化、營養(yǎng)成分和人工培養(yǎng)等方面[3]，近年來對地木耳多糖的提取及活性研究較多，特別是對其細胞外多糖的研究更為深入[4]。國外也有對地木耳細胞形態(tài)學(xué)、分子遺傳學(xué)和化學(xué)分類學(xué)特征的研究[5]，但目前國內(nèi)外對地木耳的化學(xué)成分及其生物活性研究仍處于起步階段[6]。

植物次生代謝產(chǎn)物(plant secondary metabolites，PSMs)是指植物體中一大類并非生長發(fā)育所必需的小分子有機化合物[7]。近年來對地木耳次生代謝產(chǎn)物很少有研究，只有針對地木耳中單一種類次生代謝產(chǎn)物的報道，沒有一個較為全面的研究[8]。為此，本研究對地木耳中總酚、總黃酮、總生物堿和縮合單寧這幾類次生代謝產(chǎn)物作了初步的測定與分析，并與黑木耳、銀耳、紫菜、海帶這4種日常食用的菌藻進行了比較與分析，為地木耳中活性成分及生物活性的深入研究提供一定的參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

野生地木耳樣品分別來自安徽合肥、湖北十堰、山西朔州。選新鮮、質(zhì)感好的地木耳，除凈雜草和附著物，洗凈，自然晾干，將晾干的野生地木耳用粉碎機打碎，干燥保存?zhèn)溆谩：谀径?、銀耳、紫菜、海帶均購于農(nóng)副產(chǎn)品批發(fā)市場，處理方法同上。

香草醛(分析純)、兒茶素(純度97.2%)、沒食子酸(純度90.1%)、蘆丁(純度92.5%，UV測定)、鹽酸小檗堿(純度86.8%)均購自中國食品藥品檢定研究院。

1.2 儀器與設(shè)備

L-2000型高效液相色譜儀(HITACHI)、紫外分光光度計(UNICO7200)、KQ5200B超聲波清洗器、電子分析天平(精度：0.1 mg)、KDC-40低速離心機、DK-S42型電熱恒溫水浴鍋、Eppendorf 5424型高速離心機。

1.3 次生代謝產(chǎn)物含量測定方法

采用分光光度法測定野生地木耳及幾種菌藻中的總酚、總黃酮和縮合單寧含量；采用HPLC法測定總生物堿含量。

總酚測定方法參照李巨秀等[9]，標(biāo)準(zhǔn)品為沒食子酸，回歸方程：y= 0.4001x+0.0001，R2= 0.9991。式中y為吸光度，x為沒食子酸濃度(mg/mL)，R為相關(guān)系數(shù)，線性范圍為：0～1.08 mg/mL。

總黃酮測定方法參照厲榮玉等[10]，標(biāo)準(zhǔn)品為蘆丁，回歸方程：y=0.2176x+0.0005，R2= 0.9998。式中y為吸光度，x為蘆丁濃度(mg/mL)，R為相關(guān)系數(shù)，線性范圍為：0～0.46 mg/mL。

縮合單寧測定方法為“香草醛-鹽酸”法[11]，標(biāo)準(zhǔn)品為兒茶素，回歸方程：y=0.5082x-0.0009，R2=0.9991。式中y為吸光度，x為兒茶素濃度(mg/mL)，R為相關(guān)系數(shù)，線性范圍為：0～0.68 mg/mL。

生物堿測定方法參考秦彥杰等[12]，樣品以63%乙醇為溶劑，在41℃條件下超聲提取64 min，使用日立L-2000型高效液相色譜儀(HPLC)測定，標(biāo)準(zhǔn)品為鹽酸小檗堿。檢測條件：色譜柱為HITACHI LaChrom C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液(60∶40)，流速：0.5 mL/min，進樣量10 μL，檢測波長為345 nm，柱溫：30 ℃。

回歸方程：y= 1E-07x+ 0.037，R2= 0.9995。式中y為吸光度，x為鹽酸小檗堿濃度(mg/mL)，R為相關(guān)系數(shù)，線性范圍為：0～0.52 mg/mL。

1.4 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果與分析

2.1 野生地木耳中次生代謝產(chǎn)物含量

我們對3個不同產(chǎn)地的野生地木耳樣品中的次生代謝產(chǎn)物含量進行了測定，數(shù)據(jù)經(jīng)方差分析檢驗，結(jié)果顯示，3個產(chǎn)地的野生地木耳中的4種次生代謝產(chǎn)物的含量無顯著性差異(總酚：F=1.640，P=0.270>0.05；總黃酮：F=0.361，P=0.711>0.05；總生物堿：F=0.380，P=0.699>0.05；縮合單寧：F=0.161，P=0.855>0.05)(表1)。從表1中的含量均值可看出，野生地木耳中總酚含量最為豐富，是野生地木耳次生代謝產(chǎn)物中的主要物質(zhì)，其次是總黃酮，以及微量的總生物堿與縮合單寧。

表1 不同產(chǎn)地野生地木耳中次生代謝產(chǎn)物含量

2.2 野生地木耳與4種常見食用菌藻中次生代謝產(chǎn)物含量比較分析

野生地木耳作為一種營養(yǎng)價值較高的食用藻類，在與日常食用的藻類-紫菜和海帶營養(yǎng)價值的比較研究中，其蛋白質(zhì)和氨基酸含量高，礦質(zhì)元素種類豐富。對其次生代謝產(chǎn)物方面，本研究對野生地木耳與4種常見食用菌藻類(黑木耳、銀耳、紫菜、海帶)做了相關(guān)比較研究。野生地木耳與4中常見食用菌藻中次生代謝產(chǎn)物含量均值差見表2。

表2 野生地木耳與4種常見食用菌藻中次生代謝產(chǎn)物含量均值差

注：表中負值表示地木耳中某類次生代謝產(chǎn)物含量低于常見食用菌藻；*：P<0.05。

由表2可知，野生地木耳總酚與樣品中其他4種常見食用菌藻均有顯著性差異(P<0.05)，實驗測得野生地木耳中總酚含量均高于黑木耳、銀耳和紫菜，低于海帶中總酚含量；野生地木耳黃酮與樣品中其它4種常見食用菌藻均有顯著性差異(P<0.05)，實驗測得野生地木耳中黃酮含量高于黑木耳和銀耳，約為黑木耳的7倍，銀耳的3倍，略低于紫菜中的黃酮含量；野生地木耳生物堿與樣品中其他菌藻類均有顯著性差異(P<0.05)，實驗測得野生地木耳中總生物堿含量略高于黑木耳、銀耳和海帶，遠低于紫菜；野生地木耳縮合單寧與黑木耳的縮合單寧含量無顯著性差異(P>0.05)，與銀耳、紫菜、海帶差異顯著(P<0.05)，實驗測得銀耳、紫菜、海帶的單寧含量均是野生地木耳的2倍以上。

3 結(jié)論與討論

1)野生地木耳中總酚含量為24.255 mg/g±1.631 mg/g，與其它植物果實相比，其含量明顯高于獼猴桃果肉(約3.19 mg/g)和新疆洛浦縣沙棗果肉(6.16 mg/g)[13-14]。由此可見野生地木耳中總酚含量豐富，酚類物質(zhì)具有高效的降血壓、降血脂、防治心血管疾病、抗菌消炎等功效，因此野生地木耳具有很高的食用和保健價值。

2)野生地木耳中總黃酮含量為5.741 mg/g±0.239 mg/g，與其它植物相比，約為生姜(12.50 mg/g)中含量的一半，高于山楂果(0.933 mg/g)中的含量[15, 16]。可見野生地木耳中總黃酮含量比較豐富，食用野生地木耳對人體有很好的保健作用，有研究發(fā)現(xiàn)黃酮類化合物對治療糖尿病具有一定的作用[17]。

3)野生地木耳中總生物堿的含量為0.768 mg/g±0.073 mg/g，與一些中藥材相比，遠低于中藥材半夏(4.006 mg/g)中的含量，略高于云南省人工栽培的鐵皮石斛總生物堿含量(0.190 mg/g～0.430 mg/g)[18]。野生地木耳中所含生物堿種類尚不明確，但其含量較少，對于野生地木耳的食用和藥用價值幾乎不會產(chǎn)生影響。

4)縮合單寧廣泛存在于植物和日常的食物中，食物中縮合單寧過量會產(chǎn)生一些抗?fàn)I養(yǎng)作用，影響人體對蛋白質(zhì)、維生素和礦物質(zhì)的吸收利用，并且對人體健康也有一定的危害。例如人若攝食超過1.5 mg/g縮合單寧的蠶豆，就會顯著降低鐵的吸收；遠東地區(qū)的檳榔含縮合單寧達110 mg/g～260 mg/g，導(dǎo)致嗜食檳榔者的食管癌、口腔癌患病率高發(fā)[19]。過量的縮合單寧往往也給食品帶來較重的澀味。野生地木耳本身蛋白質(zhì)、維生素和礦物質(zhì)含量豐富，本實驗結(jié)果顯示，野生地木耳中含有極微量的縮合單寧，僅為0.069 mg/g±0.009 mg/g，幾乎不會影響其自身的營養(yǎng)價值和口感，也不會對其它食物中蛋白質(zhì)、維生素和礦物質(zhì)的吸收產(chǎn)生影響。

本文綜合比較野生地木耳與4種日常食用菌藻，野生地木耳的總酚和總黃酮的含量處于較高水平，且總酚是野生地木耳中的主要次生代謝產(chǎn)物，野生地木耳中的單寧與總生物堿含量均低于樣品中其它菌藻或與個別菌藻含量相差不多?？偡雍涂傸S酮類物質(zhì)中，有許多是對人體有益的物質(zhì)，如茶多酚、類黃酮、異黃酮等。因此，野生地木耳中對人體有益的的天然活性物質(zhì)的含量高于這些日常食用的菌藻，具有較高的食用和保健價值，對野生地木耳中總酚和總黃酮類物質(zhì)也有一定的開發(fā)利用前景。

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