許瑞娜，華建江，劉和錄，陳 望，徐志康，李紅萍，丁 華，李 嫻

細(xì)菌性陰道炎臨界值室內(nèi)質(zhì)控物的研制及評(píng)價(jià)

許瑞娜，華建江，劉和錄，陳 望，徐志康，李紅萍，丁 華，李 嫻

目的：研制細(xì)菌性陰道炎（BV）臨界值室內(nèi)質(zhì)控物并建立相應(yīng)的質(zhì)控程序。方法：用生理鹽水將唾液酸酶原液稀釋至濃度為7 U/mL，加入復(fù)合酶穩(wěn)定劑和疊氮鈉防腐劑，分裝于用1%小牛血清白蛋白封閉過(guò)的離心管，制備出BV臨界值室內(nèi)質(zhì)控物；在南方惠僑檢驗(yàn)信息系統(tǒng)上建立BV的室內(nèi)質(zhì)控程序及半定量質(zhì)控圖，以評(píng)價(jià)其檢測(cè)效能和應(yīng)用效果。結(jié)果：BV臨界值室內(nèi)質(zhì)控物濃度處于試驗(yàn)方法的臨界值水平，其穩(wěn)定性較好，在室溫、4℃、-20℃的保存條件下，分別可穩(wěn)定220、310、365 d；建立的BV室內(nèi)質(zhì)控程序及半定量質(zhì)控圖可直觀、有效地監(jiān)測(cè)、檢驗(yàn)試劑的靈敏度和可靠性。結(jié)論：BV臨界值室內(nèi)質(zhì)控物與建立相應(yīng)的質(zhì)控程序,可作為BV質(zhì)控物商品化之前的一個(gè)補(bǔ)充，具有一定的臨床應(yīng)用價(jià)值。

細(xì)菌性陰道炎；臨界室內(nèi)質(zhì)控物；研制

0 引言

診斷細(xì)菌性陰道炎的傳統(tǒng)方法是Amsel法[1]，此法操作繁瑣、費(fèi)時(shí)費(fèi)力且易受多種因素的干擾，目前已被唾液酸酶法所取代。由于各生產(chǎn)廠家的試劑質(zhì)量參差不齊，甚至同一廠家不同批號(hào)之間試劑的穩(wěn)定性也有差異，因此，必須采取嚴(yán)格的質(zhì)控措施才能保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。然而，目前市面上尚無(wú)商品化的BV質(zhì)控物，故筆者研制出BV臨界值室內(nèi)質(zhì)控物并建立了相應(yīng)的質(zhì)控程序，經(jīng)1 a的實(shí)際應(yīng)用，效果較好，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器

AT-1600型全自動(dòng)細(xì)菌性陰道病檢測(cè)儀，由廣州江元醫(yī)療科技有限公司生產(chǎn)。

1.1.2 試劑

廣州江元醫(yī)療科技有限公司生產(chǎn)的細(xì)菌性陰道病檢測(cè)試劑盒（唾液酸酶法），均在有效期內(nèi)使用。

1.1.3 質(zhì)控物配方材料

唾液酸酶原液、復(fù)合酶穩(wěn)定劑、小牛血清白蛋白、疊氮鈉均為美國(guó)SIGMA公司生產(chǎn)；分裝容器為一次性塑料離心管，由江蘇康健醫(yī)療用品有限公司生產(chǎn)，規(guī)格為0.5 mL。

1.2 方法

1.2.1 質(zhì)控物容器封閉方法

將0.5 mL規(guī)格的一次性塑料離心管用1%小牛血清白蛋白加至滿(mǎn)管，置于4℃冰箱中封閉24 h后，棄掉管內(nèi)液體，置生物安全柜內(nèi)自然晾干待用。

1.2.2 質(zhì)控物制備方法及分裝

用生理鹽水將唾液酸酶原液稀釋并加入若干濃

度的復(fù)合酶穩(wěn)定劑和防腐劑疊氮鈉，稀釋至唾液酸酶濃度為7 U/mL并分裝于封閉過(guò)的離心管中。

1.2.3 質(zhì)控物保存方法

將分裝好的自配BV臨界值質(zhì)控物分成3組，每組各365管，分別保存于室溫、4℃、-20℃下備用。

1.2.4 質(zhì)控物的檢測(cè)

每日取各保存溫度下的臨界質(zhì)控物各1管作為樣本，同時(shí)取生理鹽水作為陰性對(duì)照，與日常標(biāo)本一同上機(jī)檢測(cè)，連續(xù)測(cè)定365 d。嚴(yán)格按照儀器操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，儀器自動(dòng)判斷結(jié)果。

1.2.5 室內(nèi)質(zhì)控程序

在南方惠僑檢驗(yàn)信息系統(tǒng)上建立BV的室內(nèi)質(zhì)控程序及半定量質(zhì)控圖。（1）質(zhì)控頻率與濃度水平：每天1次，9：00前完成；每次做臨界值和陰性對(duì)照2個(gè)水平，陰性對(duì)照為無(wú)菌生理鹽水。（2）質(zhì)控結(jié)果轉(zhuǎn)換規(guī)則：檢測(cè)結(jié)果為“陰性”，在檢驗(yàn)信息系統(tǒng)中輸入“0”；檢測(cè)結(jié)果為“弱陽(yáng)性”，在檢驗(yàn)信息系統(tǒng)中輸入“1”；檢測(cè)結(jié)果為“陽(yáng)性”，在檢驗(yàn)信息系統(tǒng)中輸入“2”；檢測(cè)結(jié)果為“強(qiáng)陽(yáng)性”，在檢驗(yàn)信息系統(tǒng)中輸入“3”。（3）質(zhì)控控制限設(shè)立：臨界陽(yáng)性質(zhì)控的上失控線(xiàn)設(shè)為1.5，下失控線(xiàn)設(shè)為0.5；陰性對(duì)照的上失控線(xiàn)設(shè)為0.5，下失控線(xiàn)設(shè)為-0.5。（4）失控判斷規(guī)則：超過(guò)上下失控線(xiàn)者均判為失控。

2 結(jié)果

2.1 質(zhì)控物效能檢測(cè)

用儀器配套檢測(cè)試劑檢驗(yàn)BV臨界值質(zhì)控物，結(jié)果均為弱陽(yáng)性，可監(jiān)測(cè)相應(yīng)試劑的靈敏度；陰性對(duì)照結(jié)果全部為陰性，可監(jiān)測(cè)相應(yīng)試劑的特異性。與預(yù)期效應(yīng)一致。

2.2 質(zhì)控物穩(wěn)定性檢測(cè)結(jié)果

在室溫、4℃、-20℃ 3種條件下各保存365 d后，質(zhì)控物外觀均清亮、無(wú)沉淀、未發(fā)生混濁，說(shuō)明其防腐效果良好。3種保存條件下的質(zhì)控物連續(xù)測(cè)定365 d，監(jiān)測(cè)過(guò)程中若出現(xiàn)失控，經(jīng)失控原因分析判定為該保存溫度下質(zhì)控物變質(zhì)失效，則不再繼續(xù)監(jiān)測(cè)此保存溫度的質(zhì)控物。在室溫、4℃、-20℃保存條件下，分別可穩(wěn)定220、310、365 d。結(jié)果顯示，BV臨界值質(zhì)控物在各溫度條件下有較好的穩(wěn)定性，特別是在-20℃保存，其穩(wěn)定期可達(dá)1 a。

2.3 質(zhì)控物實(shí)際應(yīng)用結(jié)果

應(yīng)用廣州江元醫(yī)療科技有限公司生產(chǎn)的BV試劑，在AT-1600型全自動(dòng)細(xì)菌性陰道病檢測(cè)儀上檢驗(yàn)BV臨界值質(zhì)控物，檢測(cè)結(jié)果根據(jù)質(zhì)控轉(zhuǎn)換規(guī)則輸入南方檢驗(yàn)信息系統(tǒng)的“質(zhì)量控制圖表”中，系統(tǒng)自動(dòng)形成半定量BV質(zhì)控圖，以監(jiān)測(cè)自配BV臨界值質(zhì)控物的失控與在控情況。應(yīng)用1 a來(lái)，BV陰性對(duì)照未出現(xiàn)失控記錄（如圖1所示），BV臨界值質(zhì)控物在各溫度下均失控2次（如圖2所示），根據(jù)失控程序分析其原因是同一批號(hào)試劑靈敏度下降引起，更換不同批號(hào)試劑結(jié)果均在控。由此可見(jiàn)，BV臨界值質(zhì)控物可起到監(jiān)測(cè)相應(yīng)試劑靈敏度及特異性的作用。

圖1 BV陰性對(duì)照?qǐng)D

圖2 -20℃保存BV臨界值質(zhì)控物質(zhì)控圖

3 討論

細(xì)菌性陰道炎（BV）是育齡婦女最常見(jiàn)的下生殖道感染性疾病，且易復(fù)發(fā)[2]，其與早產(chǎn)、輸卵管炎等多種婦產(chǎn)科疾病密切相關(guān)[3]。因此，BV的檢查對(duì)婦產(chǎn)科疾病的防治具有重要意義。唾液酸酶[4]是BV致病菌所產(chǎn)生的特異性酶之一，其活性與病原菌數(shù)量呈正比，檢測(cè)唾液酸酶活性可了解病原體定居和繁殖的情況，是近年來(lái)診斷細(xì)菌性陰道病的新方法。根據(jù)衛(wèi)生部《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法》規(guī)定，醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)對(duì)開(kāi)展的臨床檢驗(yàn)項(xiàng)目進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)量控制，繪制質(zhì)量控制圖。然而，目前多數(shù)體液定性檢測(cè)項(xiàng)目（如BV、HCG等）尚無(wú)商品化質(zhì)控物，無(wú)法滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的需求[5]。故筆者研制出BV臨界值質(zhì)控物并建立相應(yīng)的質(zhì)控程序。

本實(shí)驗(yàn)采用BV臨界值質(zhì)控品來(lái)評(píng)價(jià)檢測(cè)試劑的敏感度，用陰性質(zhì)控品評(píng)價(jià)試劑的特異性。根據(jù)試劑廠家提供的靈敏度分析，唾液酸酶活性＞7 U/ mL的試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)為陽(yáng)性，唾液酸酶活性＜7 U/mL的試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)為陰性。筆者配制的BV臨界值質(zhì)控物中唾液酸酶濃度為7 U/mL，處于試驗(yàn)方法的臨界值水平，

（????）（????）可驗(yàn)證檢測(cè)試劑的靈敏度。臨界值質(zhì)控物配制的關(guān)鍵技術(shù)在于保證其穩(wěn)定性，可根據(jù)酶的特性加入復(fù)合酶穩(wěn)定劑及疊氮鈉防腐劑。由于酶的含量較低，特預(yù)先將塑料離心管進(jìn)行封閉處理，以防止質(zhì)控物在保存過(guò)程中降解和被塑料離心管壁吸附[6]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在室溫、4℃、-20℃保存條件下，筆者研制的BV臨界值質(zhì)控物分別可穩(wěn)定220、310、365 d，說(shuō)明容器的預(yù)封閉處理對(duì)BV臨界值質(zhì)控物的穩(wěn)定性起到了理想效果。在實(shí)際臨床應(yīng)用中，監(jiān)測(cè)到BV臨界值質(zhì)控物在各溫度下均失控2次（如圖2所示）。據(jù)分析，失控原因是由于同一批號(hào)的試劑接近失效期致使其靈敏度下降所引起的，經(jīng)更換新批號(hào)試劑重測(cè)，其結(jié)果均在控。由此可見(jiàn)，BV臨界值質(zhì)控物和陰性質(zhì)控物聯(lián)合應(yīng)用可起到監(jiān)測(cè)相應(yīng)試劑的靈敏度和特異性的作用。

本研究顯示，BV臨界值質(zhì)控物分別在室溫和4℃保存條件下于第221天和第311天監(jiān)測(cè)時(shí)，結(jié)果均為陰性，而在-20℃保存條件下結(jié)果仍為弱陽(yáng)性。這可能是由于在-20℃下唾液酸酶的濃度可長(zhǎng)時(shí)間保持穩(wěn)定，而在室溫和4℃下其濃度引起緩慢下降所致?？梢?jiàn)，不同保存溫度可對(duì)BV臨界值質(zhì)控物的穩(wěn)定性產(chǎn)生不同影響。通過(guò)較長(zhǎng)時(shí)間的應(yīng)用與觀察，自制BV臨界值質(zhì)控物在-20℃保存條件下其穩(wěn)定性最佳，用此質(zhì)控物與建立的相應(yīng)質(zhì)控程序作為BV質(zhì)控物商品化之前的一個(gè)補(bǔ)充，既符合室內(nèi)質(zhì)控工作的要求又具有經(jīng)濟(jì)效益，有一定的臨床應(yīng)用價(jià)值。

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（收稿：2013-03-04 修回：2013-05-06）

Development and Evaluation of Indoor Quality Control Substance for Critical Value of Bacterial Vaginitis

XU Rui-na,HUA Jian-jiang,LIU He-lu,CHEN Wang,XU Zhi-kang,LI Hong-ping,DING Hua,LI Xian
(Department of Clinical Laboratory,Shenzhen Shajing Affliated Hospital of Guangzhou Medical University, Shenzhen 518104,Guangdong Province,China)

ObjectiveTo develop a piece of indoor quality control substance for the critical value of bacterial vaginitis(BV) and the corresponding quality control procedure.MethodsThe sialidase stock solution was diluted until the concentration came to 7 U/mL,the compound enzyme stabilizer and sodium azide preservative were added into the solution,the solution was put into the centrifuge tube sealed with calf serum albumin,then the indoor quality control substance for the critical value of BC came into being.The indoor quality control procedure and semi-quantitative quality control diagram were established based on NFHB-Lab Information System in order to evaluate the efficacy.ResultsThe indoor quality control substance for the critical value of BV was stable,and had a service life of 220,310 or 365 d respectively when the ambient temperature was room temperature,4℃ or-20℃.The quality control procedure and semi-quantitative quality control diagram could be used for monitoring the sensitivity and reliability of the agent.ConclusionThe indoor quality control substance for the critical value of BV and the corresponding quality control procedure are of significance for clinical application.[Chinese Medical Equipment Journal，2014，35（1）：40-41，53]

bacterial vaginisis;threshold level of indoor quality control substance;development

R318；R711．31

A

1003-8868（2014）01-0040-03

10.7687/J.ISSN1003-8868.2014.01.040

2012年深圳市寶安區(qū)科技計(jì)劃項(xiàng)目（2012159）

許瑞娜（1982—），女，檢驗(yàn)技師，主要從事臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)方面的研究工作，E-mail：449214582@qq.com。

518104廣東深圳，廣州醫(yī)學(xué)院附屬深圳沙井醫(yī)院檢驗(yàn)科（許瑞娜，華建江，劉和錄，陳 望，徐志康，李紅萍，丁 華，李 嫻）