宋興超，徐超，陳秀敏，岳志剛，魏海軍，李光玉，楊福合

(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所吉林省特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)物分子生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，長(zhǎng)春130112)

水貂(Mustelavison)是一種經(jīng)濟(jì)價(jià)值較高的鼬科(Mustelidae)鼬屬(Mustela)小型珍貴毛皮動(dòng)物[1]。水貂的生殖系統(tǒng)及生理機(jī)能均隨季節(jié)發(fā)生規(guī)律性變化，非繁殖季節(jié)性腺萎縮，繁殖期睪丸重量和體積均增大[2]。睪丸是雄性動(dòng)物生殖系統(tǒng)的主要器官之一，為精子產(chǎn)生的場(chǎng)所，其實(shí)質(zhì)的正常組織結(jié)構(gòu)主要包括曲細(xì)精管和間質(zhì)組織[3]。近年來(lái)，有關(guān)水貂繁殖的研究主要集中在營(yíng)養(yǎng)水平對(duì)繁殖性能的影響[4～6]、胚胎滯育[7，8]以及水貂生殖生理特點(diǎn)[9]等方面，而對(duì)睪丸季節(jié)性形態(tài)發(fā)育特征及組織學(xué)結(jié)構(gòu)的研究資料較少[10，11]。本研究對(duì)取皮期和配種期雄性短毛黑水貂睪丸的形態(tài)參數(shù)進(jìn)行了測(cè)定，并比較了不同生理時(shí)期水貂睪丸及附睪的組織學(xué)結(jié)構(gòu)特征，旨在探討水貂生殖器官的季節(jié)性發(fā)育規(guī)律，豐富鼬屬動(dòng)物性腺組織學(xué)資料，為進(jìn)一步研究雄性水貂睪丸及性激素水平的年周期變化規(guī)律奠定理論基礎(chǔ)，同時(shí)也為水貂精子形成、精液品質(zhì)等后續(xù)研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

2011年12月(取皮期)和2012年4月(配種期)，在中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所毛皮動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基地隨機(jī)選取短毛黑水貂15只～20只作為供試動(dòng)物，均為性成熟公貂，自由采食和飲水，個(gè)體健康，體重1 885.47g±146.74g，差異不顯著(P>0.05)。

1.2 睪丸采集及形態(tài)參數(shù)測(cè)量

取皮期和配種期水貂處死后，立即摘取雙側(cè)睪丸，剔除多余脂肪，拍照、稱重后，利用游標(biāo)卡尺測(cè)量長(zhǎng)徑、短徑及厚徑，睪丸體積按橢球體積公式[11]計(jì)算：V=(4/3)×π×L/2×W/2×T/2，式中，V為睪丸體積，L為睪丸長(zhǎng)徑，W為睪丸短徑，T為睪丸厚徑，π為圓周率。測(cè)量結(jié)束后將睪丸連同附睪一起置于10%中性福爾馬林溶液中固定。

1.3 石蠟切片制作與組織結(jié)構(gòu)觀察

將固定好的睪丸和附睪組織進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋、切片(6μm)、H.E染色、顯微鏡觀察、拍照。選擇取皮期和配種期水貂睪丸切片各10張，每張切片取15個(gè)生精小管的正圓形橫切面，在高倍鏡(400×)下，利用HMIAS圖像分析系統(tǒng)(LECIA)，采用“十字”法測(cè)量橫斷面的直徑，計(jì)算平均值。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

采用SAS 9.0統(tǒng)計(jì)軟件One-way Anova方法對(duì)測(cè)量數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，P<0.05為差異顯著，P<0.01表示差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 水貂睪丸形態(tài)學(xué)特征

水貂的左、右兩側(cè)睪丸均分別位于陰囊內(nèi)，成對(duì)存在；顏色粉白，略有彈性；睪丸表面被一層較厚的致密結(jié)締組織包裹，即白膜。取皮期水貂睪丸呈長(zhǎng)卵圓形，配種期呈短卵圓形，體積明顯較取皮期大且表面分布著相對(duì)明顯的血管(圖1)。進(jìn)一步觀察對(duì)比發(fā)現(xiàn)，水貂附睪發(fā)達(dá)，位于睪丸的上端外緣，分附睪頭和附睪尾2部分，頭部膨大呈鈍圓形，與生精小管相連，尾部變細(xì)，由附睪管和輸出小管組成，與輸精管相連。

箭頭所指為附睪尾 The arrows show the epididymal caudae.

2.2 取皮期和配種期水貂睪丸形態(tài)參數(shù)

取皮期與配種期水貂的睪丸形態(tài)參數(shù)見(jiàn)表1。從表1可見(jiàn)，取皮期水貂睪丸平均重量為1.032 3g±0.263 3g，長(zhǎng)徑、短徑和厚徑分別為16.88mm±1.52mm、10.90mm±0.85mm和10.28mm±1.03mm，體積達(dá)到1.05cm3±0.23cm3。配種期睪丸各項(xiàng)形態(tài)參數(shù)均極顯著高于取皮期(P<0.01)。

表1水貂取皮期和配種期睪丸形態(tài)參數(shù)

Table 1 Morphological parameters of mink testis between taking skin and mating period

注：同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05)，不同大寫(xiě)字母表示差異極顯著(P<0.01)，下表同。

Note:In the same column,bold values with different small letter superscripts mean significant difference(P<0.05),and with different capital letter superscripts mean significant difference(P<0.01).

2.3 水貂睪丸及附睪組織學(xué)結(jié)構(gòu)

由圖2-1和圖2-2可見(jiàn)，水貂睪丸實(shí)質(zhì)主要由生精小管和睪丸間質(zhì)2部分組成。生精小管管壁由外向內(nèi)依次為：基膜、基底細(xì)胞和生精上皮，生精上皮由復(fù)層排列的各級(jí)生精細(xì)胞和支持細(xì)胞組成，睪丸間質(zhì)中存在成群分布的間質(zhì)細(xì)胞，又稱Leydig細(xì)胞，呈圓形或卵圓形，體積相對(duì)較大。由于切片部位不同，生精小管形狀存在差異，但界限較明顯，由圖2-1可見(jiàn)，取皮期水貂生精小管內(nèi)細(xì)胞較為疏松，僅存在少量精原細(xì)胞和支持細(xì)胞；配種期(圖2-2)生精小管直徑較大，并且細(xì)胞層數(shù)較多，約為4～5層，包括支持細(xì)胞、精原細(xì)胞、初級(jí)精母細(xì)胞、精子細(xì)胞和精子，靠近基膜的生精細(xì)胞核較大，染色淺，靠近管腔的細(xì)胞核致密，染色較深。

由圖2-3和圖2-4可見(jiàn)，水貂附睪管腔內(nèi)由主細(xì)胞和基細(xì)胞組成假?gòu)?fù)層柱狀上皮，其中，主細(xì)胞數(shù)目較多，呈高柱狀，核位于細(xì)胞基側(cè)，呈卵圓形，染色較淺?；?xì)胞位于主細(xì)胞基部之間，呈圓形或橢圓形，核呈卵圓形，染色較深。附睪管周圍有平滑肌細(xì)胞，內(nèi)側(cè)存在大量靜纖毛。與取皮期相比，配種期水貂附睪管直徑較大，附睪管腔內(nèi)存在大量精子。

2.4 取皮期和配種期水貂睪丸生精小管直徑比較

由表2可見(jiàn)，配種期水貂睪丸生精小管直徑極顯著高于取皮期(P<0.01)。

表2取皮期和配種期水貂生精小管直徑比較

Table 2 Comparison of seminiferous tube between taking skin and mating period (μm)

3 討論

3.1 睪丸的功能

睪丸具有2個(gè)基本功能：通過(guò)精子發(fā)生過(guò)程產(chǎn)生精子及通過(guò)類固醇過(guò)程分泌睪酮和其它激素，這2種功能分別在曲細(xì)精管和間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行[12]。睪丸產(chǎn)生精子的能力和內(nèi)分泌功能是雄性動(dòng)物繁殖性能最重要的基礎(chǔ)[13]。水貂睪丸重量及體積在不同生理時(shí)期具有明顯的規(guī)律性變化，是導(dǎo)致其繁殖能力出現(xiàn)季節(jié)性變化的重要外部因素。

圖2取皮期與配種期水貂睪丸生精小管和附睪管組織學(xué)結(jié)構(gòu)(標(biāo)尺=100μm，H.E染色，400×)

Fig.2HistologicalstructureoftheseminiferoustubuleandepididymalductoftestisinMustelavisonbetweentakingskinandmatingperiod(Bar=100μm,H.E staining,400×)

3.2 取皮期和配種期水貂睪丸形態(tài)參數(shù)和組織學(xué)結(jié)構(gòu)分析

水貂是一種受光照調(diào)節(jié)的季節(jié)性繁殖毛皮動(dòng)物[14]。本研究表明，在非繁殖季節(jié)，性腺基本處于靜止?fàn)顟B(tài)，生殖機(jī)能減弱，睪丸體積縮小、重量下降、間質(zhì)細(xì)胞層變厚、曲細(xì)精管管徑變小，取皮期睪丸曲細(xì)精管直徑約為340.71μm±31.66μm，管腔中無(wú)精子，管壁中生精細(xì)胞數(shù)量也較少。在繁殖季節(jié)，睪丸體積增大，重量、長(zhǎng)徑、短徑及厚徑均顯著高于取皮期，且睪丸表面血管分布明顯。本研究中，取皮期睪丸生精上皮內(nèi)各級(jí)細(xì)胞較少，附睪管的假?gòu)?fù)層柱狀上皮細(xì)胞疏松；配種期睪丸生精小管和附睪管直徑均顯著高于取皮期，生精上皮分布的細(xì)胞種類和層數(shù)較多，包括精原細(xì)胞、初級(jí)精母細(xì)胞、次級(jí)精母細(xì)胞和精子細(xì)胞，且生精小管和附睪管腔內(nèi)存在大量精子，這與Kostron等[15]研究水貂、王建禮等[16]報(bào)道的棕色田鼠以及袁改霞等[17]分析大雁生殖系統(tǒng)的研究結(jié)果基本一致。

3.3 進(jìn)一步研究方向

睪丸是雄性動(dòng)物重要的生殖腺，可以產(chǎn)生精子和雄性激素，對(duì)雄性生殖系統(tǒng)的發(fā)育起著重要作用[18]。因此，對(duì)其基礎(chǔ)形態(tài)參數(shù)與組織學(xué)水平進(jìn)行連續(xù)、系統(tǒng)研究可全面反映其結(jié)構(gòu)與功能的變化規(guī)律。水貂生殖器官存在比較典型的季節(jié)性變化特點(diǎn)，采集一個(gè)完整生理時(shí)期水貂的睪丸及血液，進(jìn)行促黃體素(LH)、促卵泡素(FSH)和睪酮等相關(guān)生殖激素指標(biāo)的測(cè)定，探明水貂睪丸形態(tài)和組織學(xué)結(jié)構(gòu)特征及生殖激素的年周期變化規(guī)律，為研究水貂季節(jié)性繁殖規(guī)律奠定形態(tài)、組織學(xué)及血液學(xué)理論基礎(chǔ)。

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