陳人萍，張英華，劉衛(wèi)，王琳

(1．吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院，長(zhǎng)春 130012； 2．長(zhǎng)春醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，長(zhǎng)春 130031)

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是一種病因尚未明了的慢性全身性炎癥性疾病，以慢性、對(duì)稱性、多滑膜關(guān)節(jié)炎和關(guān)節(jié)外病變?yōu)橹饕R床表現(xiàn)，急性活動(dòng)期常伴有劇烈的晨僵、疼痛、腫脹等。許多細(xì)胞因子在RA發(fā)病過(guò)程中起著重要的作用[1，2]。白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的骨侵蝕和軟骨破壞中發(fā)揮重要作用；白細(xì)胞介素-6(IL-6)在炎癥細(xì)胞因子和免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)中具有關(guān)鍵性的作用[3]；腫瘤壞死因子(TNF-α)能刺激滑膜細(xì)胞和軟骨細(xì)胞合成并釋放前列腺素E2(PGE2)和膠原酶，引起骨和軟骨的吸收破壞[4]。因此，降低血清中此類細(xì)胞因子的水平也是治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的途徑之一。

牛尾菜為百合科植物牛尾菜(Smilax.riparia.A.DC.)的根及根莖，異名金剛豆藤、馬尾伸根等，在全國(guó)分布較廣，民間常用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎[5]，但鮮見(jiàn)其藥理作用的研究報(bào)道。為進(jìn)一步證實(shí)牛尾菜抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎作用，本試驗(yàn)采用佐劑性關(guān)節(jié)炎模型[6]研究其乙醇提取物的抗炎作用及其對(duì)炎性細(xì)胞因子的影響；采用醋酸扭體和福爾馬林模型[7]研究其鎮(zhèn)痛作用。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 藥品與試劑

牛尾菜乙醇提取物(吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院植物化學(xué)研究所提供)；阿司匹林腸溶片(石家莊康力藥業(yè)有限公司)；雷公藤多苷片(浙江得恩德制藥有限公司)；弗氏完全佐劑(美國(guó)sigma公司)；IL-6、IL-1β和TNF-α ELISA試劑盒(上海森雄科技實(shí)業(yè)有限公司)。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

Wistar大鼠(98只，雌、雄各半，體重150g～200g，中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院試驗(yàn)動(dòng)物研究所提供)；昆明種小鼠(50只，雌、雄各半，體重20g～24g，吉林大學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物中心提供)。

1.3 試驗(yàn)儀器

680型全自動(dòng)酶標(biāo)儀(美國(guó)BIO-RAD公司)；DH-360型電熱恒溫培養(yǎng)箱(北京中興偉業(yè)儀器有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 牛尾菜乙醇提取物抗炎作用研究

2.1.1牛尾菜乙醇提取物對(duì)佐劑關(guān)節(jié)炎大鼠足腫脹的影響取大鼠48只，雌、雄各半，隨機(jī)分為6組，每組8只。第1組為空白對(duì)照組，第2組為模型對(duì)照組，第3組為陽(yáng)性對(duì)照組(雷公藤多苷組，給藥劑量為0.025g/kg)，第4組、第5組、第6組分別為牛尾菜乙醇提取物的高劑量組、中劑量組、低劑量組(給藥劑量分別為0.6g/kg、0.3g/kg、0.15g/kg)，空白對(duì)照組大鼠右后足跖皮下注射0.1mL液體石蠟，其他組注射弗氏完全佐劑0.1mL致炎。致炎后第10天開(kāi)始每天灌胃給藥1次，對(duì)照組給予同體積蒸餾水，共給藥12d。預(yù)先測(cè)量大鼠的正常右后足跖部周徑，再分別于致炎后第13天、第17天和第21天測(cè)量大鼠右后足跖部周徑，并以其與正常值的差作為足跖腫脹度，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1牛尾菜乙醇提取物對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠足腫脹的影響

Table1EffectsofethanolextractfromS.ripariaonadjuvant-inducedpawswellinginrats

注：與模型對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01Note： Compared with the model control group,*P<0.05,**P<0.01

結(jié)果表明，牛尾菜乙醇提取物0.6g/kg劑量組、0.3g/kg劑量組能夠顯著抑制大鼠的佐劑性關(guān)節(jié)炎繼發(fā)性炎癥。

2.1.2牛尾菜乙醇提取物對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠炎性細(xì)胞因子的影響致炎后第21天，從大鼠腹腔主動(dòng)脈采血，3000r/min離心5min，采用ELISA法測(cè)定IL-6、IL-1β和TNF-α含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2牛尾菜乙醇提取物對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠血清IL-6、IL-1β和TNF-α的影響

Table2EffectsofethanolextractfromS.ripariaonIL-6，IL-1β，andTNF-αintheserumofadjuvant-inducedarthritisrats

組 別Group劑量(g/kg)DoseIL-6IL-1βTNF-α(pg/mL，X±SD)空白對(duì)照組Blankcontrol—506±363470±064327±034模型對(duì)照組Modelcontrol—664±452#592±445#346±047#陽(yáng)性對(duì)照組Positivecontrol0025520±281?473±081?325±049??牛尾菜乙醇提取物EthanolextractfromSmilaxriparia06485±218??470±088?326±058?03574±730488±094?329±063?015654±344501±092331±054

注：與模型對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01；與空白對(duì)照組比較，#P<0.05

Note:Compared with the model control group,*P<0.05，**P<0.01;compared with the blank group,#P<0.05

結(jié)果表明，與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠血清中IL-6、IL-1β和TNF-α含量顯著升高；與模型對(duì)照組比較，牛尾菜乙醇提取物0.6g/kg和0.3g/kg劑量組大鼠血清中IL-6、IL-1β和TNF-α含量顯著降低，并且與陽(yáng)性對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異。

2.2 牛尾菜乙醇提取物鎮(zhèn)痛作用研究

2.2.1牛尾菜乙醇提取物對(duì)醋酸所致小鼠疼痛反應(yīng)的影響取小鼠50只，雌、雄各半，隨機(jī)分為5組，每組10只。第1組為模型對(duì)照組，第2組為陽(yáng)性對(duì)照組(阿司匹林組，給藥劑量0.1g/kg)，第3組、第4組、第5組分別為牛尾菜乙醇提取物的高劑量組、中劑量組、低劑量組(給藥劑量分別為0.8g/kg、0.4g/kg、0.2g/kg)，連續(xù)灌胃6d，每天給藥1次，對(duì)照組給予同體積蒸餾水。于末次給藥后1h，腹腔注射0.8%醋酸溶液0.2mL，記錄15min內(nèi)小鼠的扭體次數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表3。

結(jié)果表明，牛尾菜乙醇提取物0.8g/kg劑量組和0.4g/kg劑量組能顯著抑制醋酸所致小鼠疼痛反應(yīng)，和陽(yáng)性對(duì)照組比較，無(wú)顯著性差異，并且0.8g/kg劑量組作用強(qiáng)于0.1g/kg陽(yáng)性對(duì)照組。

2.2.2牛尾菜乙醇提取物對(duì)福爾馬林所致大鼠疼痛反應(yīng)的影響取大鼠50只，雌、雄各半，隨機(jī)分為5組，每組10只。第1組為模型對(duì)照組，第2組為陽(yáng)性對(duì)照組(阿司匹林組，給藥劑量0.1g/kg)，第3組、第4組、第5組分別為牛尾菜乙醇提取物的高劑量組、中劑量組、低劑量組(給藥劑量分別為0.6g/kg、0.3g/kg、0.15g/kg)。連續(xù)灌胃6d，每天給藥1次，對(duì)照組給予同體積蒸餾水。于末次給藥后1h，右側(cè)后跖皮下注射2.0%的福爾馬林溶液0.1mL，記錄注射后0min～5min(第1時(shí)相)和15min～30min(第2時(shí)相)大鼠舔致炎足(即疼痛反應(yīng))的累積時(shí)間，結(jié)果見(jiàn)表4。

表3牛尾菜乙醇提取物對(duì)醋酸所致小鼠疼痛反應(yīng)的影響

Table3EffectsofethanolextractfromS.ripariaonaceticacid-inducedwrithingreactioninmice

組 別Group劑量(g/kg)Dose扭體次數(shù)Writhingtimes(X±SD)模型對(duì)照組Modelcontrol—171±132陽(yáng)性對(duì)照組Positivecontrol01103±139??牛尾菜乙醇提取物EthanolextractfromSmilax．riparia0881±104??04119±184?02137±161

注：與模型對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01。下表同。

Note:Compared with the model control group,*P<0.05，**P<0.01.The same as in the following table.

表4牛尾菜乙醇提取物對(duì)福爾馬林所致大鼠疼痛反應(yīng)的影響

Table4EffectsofethanolextractfromS.ripariaonFormalin-inducedpainreactioninrats

組 別Group劑量(g/kg)Dose疼痛反應(yīng)持續(xù)時(shí)間 Durationofpainreaction(s，X±SD)第1時(shí)相Firstphase(0min～5min)第2時(shí)相Secondphase(15min～30min)模型對(duì)照組Modelcontrol—626±6412515±1559陽(yáng)性對(duì)照組Positivecontrol01430±481?1998±1427?牛尾菜乙醇提取物EthanolextractfromSmilax．riparia06331±389??1633±980??03370±561??1995±1419?015387±650?1948±1587?

結(jié)果表明，牛尾菜乙醇提取物0.6g/kg、0.3g/kg和0.15g/kg劑量組均能顯著抑制福爾馬林所致大鼠疼痛反應(yīng)，且對(duì)疼痛的2個(gè)時(shí)相均有顯著的抑制作用。

3 結(jié)論

在牛尾菜乙醇提取物抗炎作用研究試驗(yàn)中，牛尾菜乙醇提取物0.6g/kg劑量組、0.3g/kg劑量組能夠顯著抑制大鼠的佐劑性關(guān)節(jié)炎繼發(fā)性炎癥；對(duì)炎性細(xì)胞因子影響的試驗(yàn)中，與模型對(duì)照組比較，牛尾菜乙醇提取物0.6g/kg劑量組和0.3g/kg劑量組對(duì)大鼠血清中IL-6、IL-1β和TNF-α含量有顯著的抑制作用，并且與陽(yáng)性對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異。

在牛尾菜乙醇提取物鎮(zhèn)痛作用中，牛尾菜乙醇提取物0.8g/kg劑量組和0.4g/kg劑量組對(duì)醋酸所致小鼠疼痛反應(yīng)有顯著的抑制作用，且0.8g/kg劑量組作用強(qiáng)于陽(yáng)性對(duì)照組0.1g/kg(P<0.01)；而牛尾菜乙醇提取物各個(gè)劑量組均能顯著抑制福爾馬林所致大鼠疼痛反應(yīng)的2個(gè)時(shí)相。

疼痛和炎癥是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的兩大主要癥狀，試驗(yàn)結(jié)果表明，牛尾菜乙醇提取物具有抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎作用，可望為治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎提供新的藥物。

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