韓歡勝，趙列平，張海燕

(黑龍江省農(nóng)墾科學(xué)院 a．哈爾濱特產(chǎn)研究所； b．畜牧獸醫(yī)研究所，哈爾濱 150038)

人工授精技術(shù)作為動(dòng)物遺傳改良的重要手段，對(duì)發(fā)揮動(dòng)物種質(zhì)資源優(yōu)勢(shì)、加快遺傳進(jìn)展、提高動(dòng)物生產(chǎn)性能具有重要生產(chǎn)意義。梅花鹿人工馴化時(shí)間短、野性強(qiáng)、發(fā)情鑒定難，輸精最佳時(shí)機(jī)難于把握，人工輸精受胎率較馬鹿低，情期受胎率很難突破70%。研究表明，根據(jù)牛、羊受精機(jī)理，牛、羊在接近排卵時(shí)輸精為較好時(shí)機(jī)，可獲得高的受胎率[1]。實(shí)踐中通過試情公鹿持續(xù)進(jìn)行母鹿發(fā)情鑒定，在母鹿剛剛開始拒絕公鹿爬跨時(shí)輸精，可獲得較好的受胎率，但試情勞動(dòng)強(qiáng)度較大。本研究對(duì)梅花鹿發(fā)情持續(xù)時(shí)間進(jìn)行了系統(tǒng)地觀測(cè)研究，在此基礎(chǔ)上對(duì)梅花鹿人工輸精方法進(jìn)行了優(yōu)化，亦即結(jié)合發(fā)情持續(xù)時(shí)間進(jìn)行了2次輸精試驗(yàn)，提出了新的輸精方法。

1 材料與方法

1.1 供試動(dòng)物

用于發(fā)情持續(xù)時(shí)間觀測(cè)試驗(yàn)的成年梅花鹿母鹿31頭，由哈爾濱金地鹿業(yè)有限公司提供。用于2次輸精試驗(yàn)的梅花鹿母鹿21頭，由黑龍江省富?？h梅花鹿場(chǎng)提供。全部為經(jīng)產(chǎn)母鹿，7～9成膘，共計(jì)52頭。

1.2 試驗(yàn)方法

母鹿發(fā)情持續(xù)時(shí)間采取試情公鹿全程跟蹤的方法鑒定，即從進(jìn)入發(fā)情季節(jié)開始(9月中、下旬)，用試情公鹿6∶00、11∶00、17∶00 3次試情，揭發(fā)出發(fā)情母鹿。出現(xiàn)發(fā)情的母鹿在10h后每隔2h再進(jìn)行跟蹤試情，直到拒絕爬跨，計(jì)算發(fā)情持續(xù)時(shí)間(發(fā)情母鹿接受試情公鹿爬跨到拒絕公鹿爬跨的時(shí)間)。

1次輸精法：試情公鹿跟蹤試情一直到發(fā)情母鹿拒絕爬跨，隨即進(jìn)行1次冷凍精液輸精。

2次輸精法：試情公鹿揭發(fā)出的母鹿出現(xiàn)發(fā)情后12h進(jìn)行第1次輸精，過4.5h～5h后進(jìn)行第2次輸精。

輸精方法：采用直腸把握輸精法，即將已涂潤(rùn)滑劑的手臂伸進(jìn)保定好的母鹿直腸內(nèi)，隔著直腸壁配合輸精槍進(jìn)行，將精液輸入子宮體。

輸精人員：為經(jīng)過培訓(xùn)從事多年的鹿人工輸精技術(shù)人員。

冷凍精液：由黑龍江農(nóng)墾天山種鹿場(chǎng)提供，99-10號(hào)凍精，并經(jīng)黑龍江省繁殖指導(dǎo)站質(zhì)檢合格，采用37.5℃～40℃水浴解凍，每0.25mL細(xì)管凍精解凍后有效精子數(shù)1000萬(wàn)以上，活力0.3以上。

受胎率確定方法：受胎率為第1情期受胎率，進(jìn)入發(fā)情季節(jié)第1情期輸精后，間隔1個(gè)情期通過公鹿試情未出現(xiàn)返情的，確定為人工輸精受胎。第2情期返情并進(jìn)行人工輸精的鹿不計(jì)入本試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)范圍內(nèi)。

2 結(jié)果與分析

2.1 發(fā)情持續(xù)時(shí)間(表1、圖1)

表1發(fā)情持續(xù)時(shí)間統(tǒng)計(jì)表

Table1estrusdurationstatisticaltable

發(fā)情時(shí)段(h)timedistributionofestrus14≤a<1616≤a<1818≤a<2020≤a<2222≤a<2424≤a<26數(shù)量(頭)number(head)982921比例(%)percentage290325816452903645323(X±S)1835±297范圍 range14～2553

注：a.發(fā)情持續(xù)時(shí)間。

note:the letter a represents the duration of estrus.

從統(tǒng)計(jì)結(jié)果看，梅花鹿發(fā)情持續(xù)時(shí)間平均為18.35h±2.97h，范圍是14h～25.53h，發(fā)情持續(xù)時(shí)間14h≤a<22h時(shí)段占90.32%，22h≤a<26h時(shí)段占9.68%，說明發(fā)情持續(xù)時(shí)間主要集中在14h≤a<22h之間。

另外，從圖1看出，發(fā)情持續(xù)時(shí)間分布范圍大，各時(shí)段比例不一變化大，在14h≤a<16h、16h≤a<18h、18h≤a<20h時(shí)段發(fā)情持續(xù)時(shí)間比例高，而在其它時(shí)段比例低，發(fā)情持續(xù)時(shí)間不一主要與個(gè)體、產(chǎn)齡、膘情與氣候條件有關(guān)[2，3]。

2.2 梅花鹿2次輸精(表2)

表2梅花鹿輸精方式比較

Table2Comparisionofinseminationwaysinsikadeer

輸精方式Inseminationways輸精數(shù)(頭)Inseminationnumber(head)準(zhǔn)胎數(shù)(頭)Conceptionnumber(head)受胎率(%)Conceptionpercentage普通凍精2次輸精Thetwoinseminationinnormalfrozensemen3831816普通凍精1次輸精Thefirstinseminationinnormalfrozensemen149643

表2結(jié)果表明，梅花鹿2次輸精受胎率為81.6%，1次輸精受胎率為64.3%，2次輸精較1次輸精受胎率提高17.3%(P<0.01)。說明2次輸精可大幅度提高梅花鹿受胎率。

3 討論

3.1 梅花鹿1次輸精受胎率低的原因

梅花鹿公鹿試情1次輸精受胎率低，在實(shí)際輸精過程中情期受胎率很難突破70%[4]。主要原因是梅花鹿馴化程度低，警覺性高，發(fā)情末期母鹿發(fā)情癥狀不明顯，通過公鹿試情準(zhǔn)確地掌握拒爬時(shí)間比較難，不易準(zhǔn)確掌握最佳輸精時(shí)間；其次，梅花鹿受外界影響應(yīng)激反應(yīng)大，會(huì)影響排卵時(shí)間；另外，梅花鹿麻醉過程耗時(shí)比較長(zhǎng)，容易延誤輸精時(shí)間。所以，即使采取公鹿試情全程跟蹤的方法也很難確定輸精最佳時(shí)機(jī)，往往不可避免地出現(xiàn)早輸精或晚輸精的現(xiàn)象，致使受胎率很難提高。生產(chǎn)實(shí)踐中，采取公鹿試情輸精時(shí)，大多輸精員選擇母鹿接受爬跨后16h～18h輸精。筆者在2次輸精和公鹿試情輸精試驗(yàn)中推算，凍精在體內(nèi)受精能力一般在6h內(nèi)，卵子從卵巢排出到輸卵管壺腹部滯留時(shí)間在2h以內(nèi)，根據(jù)圖1發(fā)情持續(xù)時(shí)間比例，在發(fā)情集中的16h～22h時(shí)段輸精推算受胎率在61.29%左右。因鹿體發(fā)情持續(xù)時(shí)間差異，1次輸精時(shí)只能覆蓋發(fā)情集中期，不能達(dá)到100%；而在本研究中1次輸精實(shí)際受胎率為64.3%，與其推算基本相符；說明梅花鹿公鹿試情輸精受胎率受以上分析原因影響，受胎率很難提高，同時(shí)也基本證實(shí)了梅花鹿發(fā)情持續(xù)時(shí)間分布的規(guī)律性。

3.2 梅花鹿二次輸精

依據(jù)發(fā)情持續(xù)時(shí)間分布規(guī)律和凍精(卵子)在體內(nèi)受精時(shí)間，將人工輸精覆蓋在14h～26h時(shí)間段，采取2次輸精。第1次在發(fā)情后12h開始麻醉輸精，以覆蓋14h≤a<20h發(fā)情的母鹿；在第1次輸精后間隔4.5h～5h開始進(jìn)行第2次麻醉輸精，以覆蓋20h≤a<26h時(shí)段發(fā)情的鹿。第1次麻醉輸精選擇12h，不選擇14h，一是為了預(yù)留麻醉和輸精時(shí)間，二是采取早、中、晚試情中間有間隔時(shí)間，揭發(fā)出的鹿往往不是第1發(fā)情時(shí)間，可能在試情前已經(jīng)發(fā)情，所以要提前進(jìn)行。2次輸精中間間隔選擇4.5h～5h，主要是為了給麻醉和輸精預(yù)留一定時(shí)間，因麻醉和輸精一般需要1h左右的時(shí)間。2次輸精實(shí)際應(yīng)用中，第1次輸精時(shí)間應(yīng)靈活進(jìn)行，對(duì)于早上發(fā)情的鹿應(yīng)根據(jù)發(fā)情表現(xiàn)，可以適當(dāng)再提前。按理論推算2次輸精已覆蓋了整個(gè)發(fā)情時(shí)段，受胎率應(yīng)達(dá)到100%，而本研究2次輸精實(shí)際受胎率81.6%，筆者認(rèn)為可能主要與凍精解凍后精子(卵子)在體內(nèi)受精時(shí)間、發(fā)情母鹿應(yīng)激反應(yīng)、妊娠中斷與第1次輸精時(shí)間不易把握等因素有關(guān)，有待繼續(xù)研究。

3.3 梅花鹿發(fā)情持續(xù)時(shí)間分布規(guī)律意義與2次輸精利弊

梅花鹿發(fā)情持續(xù)時(shí)間規(guī)律為人工輸精時(shí)間合理安排提供了參考依據(jù)，可使人工輸精做到有的放矢。

2次輸精益處：(1)輸精覆蓋受精時(shí)間范圍廣，較1次輸精受胎率大大提高；(2)可減少全程跟蹤試情時(shí)試情員的勞動(dòng)強(qiáng)度，揭發(fā)出的母鹿不用再每隔2h～3h進(jìn)行全程跟蹤試情了，可在確定發(fā)情第1時(shí)間后，從12h開始每隔2h～3h后進(jìn)行試情，減少了試情次數(shù)；(3)確定母鹿第1發(fā)情時(shí)間后，就可人為確定輸精時(shí)間，可減少試情公鹿體力消耗，以更好地揭發(fā)發(fā)情母鹿，同時(shí)也降低了母鹿群因試情引起的應(yīng)激反應(yīng)；(4)第1情期受胎率增加，產(chǎn)仔率高、群體產(chǎn)仔將整體提前，便于集中管理，提高仔鹿成活率，增加養(yǎng)殖效益。

2次輸精弊端：增加了母鹿的麻醉次數(shù)及其帶來的不良反應(yīng)，冷凍精液耗量增加，但從總體效益分析是利大于弊。

3.4 人工輸精建議

發(fā)情鑒定可將輸精管結(jié)扎(或帶試情布)的試情公鹿與參配母鹿同圈，每圈15頭～20頭母鹿，用監(jiān)控器進(jìn)行發(fā)情觀察，采用監(jiān)控器回放的方式揭發(fā)出母鹿第1發(fā)情時(shí)間，結(jié)合發(fā)情持續(xù)時(shí)間分布規(guī)律，進(jìn)行2次麻醉輸精(12h，17h)或1次麻醉輸精(17.5h)，以減少勞動(dòng)強(qiáng)度，保證較高的受胎率。吉林雙陽(yáng)趙擁在實(shí)踐中應(yīng)用監(jiān)控回放發(fā)情鑒定人工1次輸精方法，2個(gè)情期受胎率80%左右，證明采用輸精管結(jié)扎的公鹿試情和應(yīng)用監(jiān)控器進(jìn)行發(fā)情鑒定定時(shí)輸精在實(shí)踐應(yīng)用中可行。2次輸精時(shí)，同時(shí)出現(xiàn)多只發(fā)情母鹿，在母鹿無(wú)布氏桿菌病、子宮炎、陰道炎等產(chǎn)科疾病的情況下，可1支凍精分2頭鹿應(yīng)用，減少精液的耗費(fèi)量。

2次輸精麻醉參考用藥劑量，如采用青島漢河生產(chǎn)的鹿眠寶(鹿醒寧)第1次梅花鹿可用1.2mL麻藥，肌肉解藥1.2mL；第2次麻醉2mL麻藥，肌肉解藥2mL，或靜脈注射0.5mL解藥，再肌肉注射1.5mL解藥。如采用其它麻醉藥品應(yīng)按說明進(jìn)行，并根據(jù)鹿體情況掌握用量，要以第1次麻醉后，在進(jìn)行第2次麻醉時(shí)耗時(shí)要短、麻醉保定確實(shí)、用藥適當(dāng)為原則。

4 結(jié)論

本研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)產(chǎn)梅花鹿發(fā)情持續(xù)時(shí)間分布范圍是14h～26h，主要集中在14h～22h時(shí)段。根據(jù)梅花鹿發(fā)情持續(xù)時(shí)間特點(diǎn)，確定發(fā)情后12h進(jìn)行第1次輸精，再過4.5h～5h進(jìn)行第2次輸精是提高梅花鹿人工輸精受胎率的可行方法。

[1]王鋒,王元興.牛羊繁殖學(xué)[M].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,2003:35-39.

[2]韓歡勝,趙列平，趙廣華.梅花鹿受胎率主要影響因素分析[J].經(jīng)濟(jì)動(dòng)物學(xué)報(bào),2011,(9):138-140.

[3]趙列平,韓歡勝,李會(huì)寧.寒區(qū)馬鹿繁殖規(guī)律研究[J].經(jīng)濟(jì)動(dòng)物學(xué)報(bào),2008,(4):193-196.

[4]韓歡勝,趙列平.茸鹿不同人工輸精方式受胎效果分析[J].畜牧獸醫(yī)科技信息,2009，(12):28-29.