邢影，孫繼澤，牟鳳輝，李文麗，劉銀燕，楊錦竹※

(吉林大學 a．中日聯(lián)誼醫(yī)院； b．藥學院，長春 130021)

槲皮苷(Quercitrin)的藥理活性研究多集中在槲皮苷的保肝、抗炎、抗病毒[1，2]等方面，對槲皮苷的降血脂作用研究未見報道；而黃酮類化合物大多在預防和治療腦血栓、冠心病、降血脂等方面具有很好的生物活性；因此，對槲皮苷的降血脂作用研究必將填補槲皮苷藥理活性方面的空白。本課題組前期實驗已經(jīng)證明，槲皮苷在體外能有效清除羥自由基、超氧陰離子自由基以及二苯代苦味肼基(DPPH)自由基等多種自由基，但作為抗氧化劑對高脂血癥大鼠的機體氧化應激損傷是否具有保護作用尚未見報道。本實驗采用實驗性高脂血癥大鼠為模型，探討其對實驗性高脂血癥大鼠抗氧化能力和血脂代謝的影響，為槲皮苷的開發(fā)利用提供科學依據(jù)。

1 實驗材料

1.1 實驗動物

健康Wistar大鼠50只，體重180g～200g，雌、雄各半(吉林大學實驗動物中心提供)。

1.2 實驗原料與試劑

槲皮苷(吉林大學藥學院藥物化學實驗室自制)；總膽固醇(TC)檢測試劑盒、甘油三酯(TG)檢測試劑盒、高密度脂蛋白(HDL-C)檢測試劑盒、低密度脂蛋白(LDL-C)檢測試劑盒(北京九強生物技術有限公司)；丙二醛(MDA)檢測試劑盒、超氧化物岐化酶(SOD)檢測試劑盒(南京建成生物工程研究所)；膽固醇(上海新興化工試劑研究所)；膽酸鈉(Sigma公司)。

1.3 實驗儀器

DY 89-Ⅱ型電動玻璃勻漿機(寧波新芝生物科技股份有限公司)；KUBOTA KR/200A低溫高速離心機(日本KUBOTA SEISAKUSHO公司)；TGL-16 B型離心機(上海安亭科學儀器廠)；WFZ UV-2100型紫外可見分光光度計(尤尼柯上海儀器有限公司)；592型電熱三用水箱(北京醫(yī)療設備廠)；YKH-Ⅱ型液體快速混合器(江西醫(yī)療器械廠)。

2 實驗方法

2.1 高脂飼料的配方

基礎飼料87.6%、豬油10%、膽固醇2%、膽酸鈉0.4%。

2.2 造模與分組

健康Wistar大鼠隨機分成5組，每組10只。其中1組為正常對照組(NC)，其余為高脂飲食組。分別給予普通飼料和高脂飼料15d，第15天采血測血脂，與正常對照組比有明顯差異，即造模成功。再按血脂水平將形成高血脂模型的40d大鼠隨機分成4組，即高脂對照組(MC)、槲皮苷低劑量組[高脂飼料+槲皮苷10mg/(kg·d)]、槲皮苷中劑量組[高脂飼料+槲皮苷20mg/(kg·d)]、槲皮苷高劑量組[高脂飼料+槲皮苷40mg/(kg·d)]。

除正常對照組和高脂對照組，其余各組于實驗第16天開始，按組別灌胃給予槲皮苷，每天1次，共21d。試驗前1晚，大鼠禁食不禁水。次日上午，將大鼠用3%戊巴比妥鈉腹腔麻醉，頸動脈采血，并取肝臟。

2.3 指標測定

2.3.1血液指標血清TC、TG、HDL-C、LDL-C、SOD、MDA的測定均按試劑盒說明書方法操作。

2.3.2組織指標肝組織SOD、MDA的測定均按試劑盒說明書方法操作。肝組織TG和TC的測定[101]：稱取肝組織100mg，加提取液(氯仿∶甲醇=1∶1)2.0mL，研成勻漿，再補加提取液3.0mL，混勻。24h抽提，不斷振搖，然后3000r/min離心5min，得提取液，按血清脂質測定方法測定。

2.4 統(tǒng)計方法

3 實驗結果

3.1 槲皮苷對高脂血癥大鼠血脂水平的影響

與正常對照組比較可見，高脂對照組血清TC、TG和LDL-C含量均顯著升高(P<0.01)，HDL-C含量顯著下降(P<0.01)，表明大鼠高脂血癥模型復制成功。與高脂對照組相比，槲皮苷40mg/kg組可明顯降低血清TC、TG和LDL-C含量(P<0.05或P<0.01)，并明顯升高血清HDL-C含量；槲皮苷20mg/kg組也可使血清TC和LDL-C含量明顯降低，HDL-C含量明顯升高(P<0.05或P<0.01)，但對血清TG含量無明顯影響；槲皮苷10mg/kg組則對血清TC、TG、HDL-C和LDL-C含量無明顯影響(表1)。

表1槲皮苷對高脂血癥大鼠血脂水平的影響

組別 Group劑量 Dose[mg/(kg·d)]TC(mmol/L)TG(mmol/L)HDL-C(mmol/L)LDL-C(mmol/L)NC—168±015076±013096±014091±013MC—683±097??098±017??077±014??603±025??10618±066087±015083±010593±024槲皮苷20540±064△086±008090±015△398±018△△40482±049△△079±015△092±014△362±020△△

注：**P<0.01 vs NC；△P<0.05、△△P<0.01 vs MC，下表同。

根據(jù)上述測定的結果，按公式AI=(TC-HDL-C)/HDL-C計算動脈硬化指數(shù)(AI)以及TC/HDL-C比值和LDL-C/HDL-C比值，結果見表2。從表中可以看出，與高脂對照組相比，槲皮苷20mg/kg組、40mg/kg組可明顯降低AI以及TC/HDL-C和LDL-C/HDL-C比值(P<0.01)；槲皮苷10mg/kg組則對AI以及TC/HDL-C和LDL-C/HDL-C比值無明顯影響。

表2槲皮苷對高脂血癥大鼠動脈粥樣硬化指數(shù)的影響

組別 Group劑量 Dose[mg/(kg·d)]TC/HDL-CLDL-C/HDL-CAINC—177±019097±021077±019MC—912±198??808±154??812±198??10754±114726±099654±114槲皮苷20621±134△△455±074△△521±134△△40537±099△△403±068△△437±099△△

3.2 槲皮苷對高脂血癥大鼠肝脂水平的影響

與高脂對照組相比，槲皮苷10mg/kg組、20mg/kg組、40mg/kg組均可明顯降低高脂血癥大鼠肝臟TC水平(P<0.01)，同時，還可使高脂血癥大鼠肝臟TG水平顯著降低(P<0.05或P<0.01)；槲皮苷10mg/kg組對高脂血癥大鼠肝臟TG水平無明顯影響(表3)。

表3槲皮苷對高脂血癥大鼠肝脂水平的影響

組別Group劑量 Dose[mg/(kg·d)]TC(mmol/L)TG(mmol/L)NC—185±031563±088MC—317±055??831±058??10208±065△△756±074槲皮苷20194±039△△732±072△40182±050△△697±097△△

3.3 槲皮苷對高脂血癥大鼠血清及肝組織中MDA含量和SOD活性的影響

3.3.1槲皮苷對高脂血癥大鼠血清中MDA含量和SOD活性的影響與正常對照組比較，高脂對照組血清中MDA含量明顯升高(P<0.01)，SOD活性明顯降低(P<0.01)。與高脂對照組相比，槲皮苷20mg/kg組、40mg/kg組可明顯降低血清中MDA含量(P<0.01或P<0.05)，升高SOD活性(P<0.01)；槲皮苷10mg/kg組對高脂血癥大鼠血清MDA含量和SOD活性無明顯影響，見表4。

表4槲皮苷對高脂血癥大鼠血清中MDA含量和SOD活性的影響

組別Group劑量 Dose[mg/(kg·d)]MDA(mmol/L)SOD(U/mL)NC—611±12428688±5893MC—911±109??21323±2183??10781±15623851±3812槲皮苷20733±128△26743±3429△△40721±130△△29626±3153△△

3.3.2槲皮苷對高脂血癥大鼠肝組織中MDA含量和SOD活性的影響與正常對照組比較，高脂對照組肝組織中MDA含量明顯升高(P<0.01)，SOD活性明顯降低(P<0.01)。與高脂對照組相比，槲皮苷20mg/kg組、40mg/kg組可明顯降低肝組織中MDA含量(P<0.01或P<0.05)，升高SOD活性(P<0.01或P<0.05)；槲皮苷10mg/kg組對高脂血癥大鼠肝組織中MDA含量和SOD活性無明顯影響(表5)。

表5槲皮苷對高脂血癥大鼠肝組織中MDA含量和SOD活性的影響

組別Group劑量 Dose[mg/(kg·d)]MDA(mmol/gpro)SOD(U/mgpro)NC—275±0786104±850MC—418±118??4030±695??10334±0734728±805槲皮苷20307±052△4806±690△40268±067△△5961±663△△

4 討論

動脈粥樣硬化(AS)的病因和發(fā)病機制雖未明了，但研究表明，脂質代謝異常是AS形成的重要因素之一[3]?，F(xiàn)已證實，血清TC、TG、LDL水平與AS形成呈正相關[4，5]，HDL水平與AS的形成呈負相關[6，7]。本實驗結果表明，高劑量的槲皮苷能顯著降低高脂血癥大鼠TC、TG、LDL-C水平，明顯升高HDL-C水平，這表明槲皮苷具有調血脂作用。

近年來的研究表明，引起AS的主要因素除了高TC、高TG、高LDL-C、低HDL-C以外，TG/HDL-C、LDL-C/HDL-C比值和AI等血脂綜合指數(shù)也是與AS具有獨立相關的危險因素，而且能更準確地反映血脂水平與AS之間的關系，更具可靠性、敏感性和臨床意義[8～11]。在本實驗中，槲皮苷能明顯降低高脂血癥大鼠的TG/HDL-C、LDL-C/HDL-C比值和AI，這進一步說明了槲皮苷具有良好的調血脂作用，可防止AS的形成。

SOD是一種存在于生物體內的重要氧自由基清除劑，具有清除氧自由基和保護機體細胞免受自由基損傷的作用。當SOD含量不足或活性降低時，會導致氧自由基堆積，使脂質氧化產(chǎn)生脂質代謝的終產(chǎn)物MDA。而過氧化脂質的增多和(或)SOD活性的降低，可直接或繼發(fā)性地導致機體的各種損傷，引發(fā)AS。研究表明，與正常對照組相比，高脂血癥動物血清MDA含量明顯增高，同時發(fā)現(xiàn)血清MDA含量與血清TG和TC含量呈正相關。本實驗的結果表明，中劑量和高劑量的槲皮苷可使血清和肝組織SOD活性明顯升高，MDA含量明顯降低，提示槲皮苷可通過提高自由基清除酶的活性以及抑制脂質的過氧化而發(fā)揮抗AS作用。

5 結論

槲皮苷具有防止動脈粥樣硬化的形成的作用，此作用與槲皮苷能調整實驗性高脂血癥大鼠的血脂代謝、提高機體清除自由基的能力、糾正自由基紊亂、抑制自由基所導致的損傷有關。

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