張 勇，馬繼偉，李?，摚踅B祥，3，閆雍容，劉子豪，杜 彬，鐘雪云

（暨南大學(xué)1．醫(yī)學(xué)院病理教研室，2．廣東省分子免疫與抗體工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，3．生物醫(yī)藥研究開(kāi)發(fā)基地廣東省生物工程藥物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東廣州 510632）

ZHANG Yong1，2，MA Ji-wei1，2，LIU Hai-ying1，2，WANG Shao-Xiang1，2，3，YAN Yong-rong1，2，LIU Zi-hao1，2，DU Bin1，2，ZHONG Xue-yun1，2

（1．Departm ent o f Patho logy，Medica l Co llege，2．Guangdong Provincia l Key Laboratory o f Mo lecu lar Immunology and Antibody Engineering，3．Guangzhou Jinan Biomedicine Research and Development Center，Guangdong Provincial Key Laboratory of Bioengineering Medicine，Jinan University，Guangzhou 510632，China）

替莫唑胺聯(lián)合粉防己堿對(duì)人腦膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞的抑制作用

張 勇1，2，馬繼偉1，2，李?，?，2，王紹祥1，2，3，閆雍容1，2，劉子豪1，2，杜 彬1，2，鐘雪云1，2

（暨南大學(xué)1．醫(yī)學(xué)院病理教研室，2．廣東省分子免疫與抗體工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，3．生物醫(yī)藥研究開(kāi)發(fā)基地廣東省生物工程藥物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東廣州 510632）

目的探討粉防己堿與替莫唑胺聯(lián)合用藥對(duì)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87細(xì)胞存活、克隆形成、遷移能力及凋亡的影響。方法 采用CCK-8法檢測(cè)粉防己堿8～64μmol·L－1，或替莫唑胺50～400μmol·L－1，或替莫唑胺＋粉防己堿3．2和6．4μmol·L－1作用24 h后細(xì)胞存活率。粉防己堿6．4μmol·L－1、替莫唑胺100μm o l·L－1或替莫唑胺＋粉防己堿3．2和6．4μm o l·L－1作用24 h后，Giem sa染色檢測(cè)細(xì)胞的克隆形成；Transwell小室檢測(cè)細(xì)胞遷移能力；流式細(xì)胞術(shù)AnnexinⅤ／PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡；W estern蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)Bcl-XL、活化胱天蛋白酶3及活化聚ADP核糖聚合酶（PARP）蛋白表達(dá)。結(jié)果 CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，單用粉防己堿和替莫唑胺均能抑制U87細(xì)胞的生長(zhǎng)，且具有濃度依賴(lài)性（r＝0．903，P＜0．05），替莫唑胺100μm ol·L－1＋粉防己堿3．2和6．4μm o l·L－1抑制率高于兩藥單用，經(jīng)分析兩者作用為相加。替莫唑胺可抑制U87細(xì)胞的克隆形成和遷移能力，兩藥聯(lián)用時(shí)比單用替莫唑胺抑制作用更明顯（P＜0．05）；與單用替莫唑胺相比，兩藥聯(lián)用時(shí)抗凋亡蛋白Bcl-XL明顯減少，執(zhí)行凋亡的活化的剪切胱天蛋白酶3蛋白及剪切PARP明顯增多。結(jié)論 粉防己堿聯(lián)用替莫唑胺能明顯抑制人腦膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞的生長(zhǎng)、克隆形成及遷移能力，并誘導(dǎo)激活胱天蛋白酶3依賴(lài)的細(xì)胞凋亡。

粉防己堿；替莫唑胺；U87細(xì)胞；細(xì)胞凋亡

DO l：10．3867／j．issn．1000-3002．2014．03．010

腦膠質(zhì)瘤是最常見(jiàn)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病之一，其中腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的惡性程度最高，為WHOⅣ級(jí)，具有組織異型性和侵襲性，復(fù)發(fā)率很高，且生存率往往不到1年。因此，迫切需要發(fā)展新的治療方法和藥物，進(jìn)一步改善腦膠質(zhì)瘤的患者生存質(zhì)量、延長(zhǎng)生存率。粉防己堿（tetrandrine，TET）來(lái)源于防己科植物粉防己的根，研究表明，TET具有抗癌作用，包括乳腺癌、食管癌、鼻咽癌、結(jié)腸癌、肺癌、肝癌、成神經(jīng)細(xì)胞瘤及腦膠質(zhì)瘤［1］。TET聯(lián)合化療藥物紫杉醇對(duì)人胃癌細(xì)胞MKN-45的增殖抑制及凋亡誘導(dǎo)有良好的協(xié)同效應(yīng)［2］。體內(nèi)研究報(bào)道，TET可降低大鼠膠質(zhì)瘤生長(zhǎng)速率，延長(zhǎng)荷瘤大鼠生存時(shí)間，對(duì)大鼠皮下和腦內(nèi)膠質(zhì)瘤均具有抗癌作用［3］。替莫唑胺（temozolom ide，TMZ）以其高脂溶性和易于通過(guò)血腦屏障的特性，是化療的首選藥物，其不良反應(yīng)輕，廣泛用于臨床［4］。雖然TMZ的應(yīng)用在一定程度上改善了腦膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后，但是其單獨(dú)用藥的有效率仍然有待提高，且單用時(shí)會(huì)導(dǎo)致腦膠質(zhì)瘤耐藥的產(chǎn)生，限制了其臨床效果，因此，尋找TMZ的聯(lián)合用藥策略，對(duì)于增強(qiáng)腦膠質(zhì)瘤化療效果、改善患者生存質(zhì)量、減少膠質(zhì)瘤復(fù)發(fā)都尤為重要。

TET是屬雙芐基異喹啉類(lèi)化合物，具有抗炎、免疫抑制［5］及抗癌作用。研究表明，TET多通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞凋亡、抑制其增殖來(lái)實(shí)現(xiàn)抗癌作用，且大部分的促凋亡和抑制增殖的作用呈時(shí)間及濃度依賴(lài)性［6］，其促凋亡作用主要通過(guò)線(xiàn)粒體通路誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。但關(guān)于TET對(duì)人腦膠質(zhì)瘤的臨床療效的文獻(xiàn)還比較局限，其具體的抗膠質(zhì)瘤作用機(jī)制及與其他藥物或治療方法的聯(lián)用效果，都有待更深入的研究。本研究通過(guò)TMZ聯(lián)合應(yīng)用TET，探討它們對(duì)人腦膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞增殖生長(zhǎng)等生物學(xué)行為的影響，為臨床治療腦膠質(zhì)瘤聯(lián)合用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 藥物、試劑及主要儀器

TET及TMZ購(gòu)自美國(guó)Sigm a公司，人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87購(gòu)自上海中科院細(xì)胞庫(kù)，細(xì)胞復(fù)蘇后置于DMEM完全培養(yǎng)基中，37℃，5%CO2，95%濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；二甲亞砜（DMSO）、胰蛋白酶（trypsin，1∶250）購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；AnnexinⅤ／PI雙染試劑盒購(gòu)自北京寶賽生物技術(shù)公司；CCK-8（cell count kit-8）細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑購(gòu)自日本同仁化學(xué)研究所；Transwell小室購(gòu)自美國(guó)Corning公司；β肌動(dòng)蛋白（克隆號(hào)13E5），Bc l-XL（克隆號(hào)54H6），活化多聚二磷酸腺苷-核糖聚合酶〔poly（ADP-ribose）polymerase，PARP；克隆號(hào)Asp214，D64E10〕，活化胱天蛋白酶3（克隆號(hào)D175，5A1E）抗體均購(gòu)自美國(guó)Cell Signaling Technology公司；化學(xué)發(fā)光試劑（ECL）購(gòu)自美國(guó)Pierce公司；Olym pus倒置顯微鏡，日本；流式細(xì)胞儀，BDFACScantoTM，美國(guó)。

1．2 CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞存活

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的U87細(xì)胞，調(diào)成每孔5000個(gè)的細(xì)胞懸液接種于96孔板，每孔100μL，置于37℃，5%CO2，95%濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后去上清，分別加入TET 8，16，32，48和64μm o l·L－1或TMZ 50，100，200，300和400μmol·L－1及濃度梯度的TMZ＋TET 3．2或6．4μmo l·L－1，同時(shí)設(shè)正常對(duì)照組，每組5復(fù)孔。各組用DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h后，每孔加入10μL CCK-8試劑，繼續(xù)培養(yǎng)1 h，酶標(biāo)儀檢測(cè)吸光度值（A）（測(cè)定波長(zhǎng)450 nm，參比波長(zhǎng)655 nm），計(jì)算各組細(xì)胞增殖抑制率。細(xì)胞增殖抑制率（%）＝（1－A實(shí)驗(yàn)組／A對(duì)照組）×100%。

1．3 克隆形成實(shí)驗(yàn)

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的U87細(xì)胞，調(diào)成每孔800個(gè)細(xì)胞懸液接種于6孔板，培養(yǎng)24 h后分別加入TMZ 100μm o l·L－1，TET 6．4μm o l·L－1，TMZ聯(lián)合TET 3．2和6．4μmol·L－1，終體積為每孔2 m L，正常組加入DMSO作為對(duì)照，培養(yǎng)7 d后，吸去培養(yǎng)液，PBS洗滌2次后，4%多聚甲醛固定液固定10 m in后晾干，吉姆薩染液染色15 m in后流水沖洗晾干，倒置顯微鏡下計(jì)數(shù)細(xì)胞克隆（＞20細(xì)胞為1個(gè)克?。┎⑴恼?，IPP采集圖像分析?？寺⌒纬梢种坡剩?）＝（1－實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞克隆數(shù)／對(duì)照組細(xì)胞克隆數(shù)）×100%。

1．4 Transw ell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力

在Transwe ll下室中加入含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基600μL，待檢細(xì)胞饑餓處理12 h以無(wú)血清DMEM培養(yǎng)基制成單細(xì)胞懸液，按1．3項(xiàng)分組處理的100μL細(xì)胞懸液種于上室，置于37℃，5%CO2，95%濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后取出小室，棄去小室內(nèi)培養(yǎng)液，濕棉簽擦去上面未穿過(guò)微孔的細(xì)胞，4%多聚甲醛固定1 h，風(fēng)干后置于0．1%結(jié)晶紫中染色1 h，倒置顯微鏡下觀(guān)察。隨機(jī)取5個(gè)視野，計(jì)數(shù)每個(gè)視野內(nèi)的穿過(guò)微孔的細(xì)胞數(shù)，以遷移細(xì)胞的相對(duì)數(shù)目來(lái)表示腫瘤細(xì)胞的侵襲能力，遷移抑制率（%）＝（1－實(shí)驗(yàn)組侵襲細(xì)胞數(shù)／對(duì)照組侵襲細(xì)胞數(shù)）×100%。

1．5 AnnexinⅤ／Pl雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞接種于6孔培養(yǎng)板過(guò)夜，棄上清，按1．3項(xiàng)分組處理的細(xì)胞每組設(shè)3復(fù)孔。培養(yǎng)48 h后，PBS洗滌細(xì)胞3次，按試劑盒說(shuō)明書(shū)分別加入AnnexinⅤ-FITC和PI，4℃避光反應(yīng)30 m in，再加入300μL結(jié)合緩沖液，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡。

1．6 Western蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)Bc l-XL，活化多聚二磷酸腺苷-核糖聚合酶及活化胱天蛋白酶3表達(dá)

將1．3項(xiàng)處理后的細(xì)胞，用PBS沖洗，冰上充分裂解后，置于4℃，13 400×g離心30 m in，取上清液，測(cè)定蛋白含量，加入上樣緩沖液沸水中煮沸5 m in，進(jìn)行SDS-PAGE電泳。300 m A恒流轉(zhuǎn)膜；膜封閉1 h，然后加一抗在4℃孵育過(guò)夜。次日加二抗于搖床室溫孵育1 h，然后經(jīng)ECL發(fā)光試劑（Pierce）顯影，最后于暗室X線(xiàn)膠片感光。以目標(biāo)蛋白與內(nèi)標(biāo)的積分吸光度的比值表示蛋白相對(duì)表達(dá)量。

1．7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2．1 粉防己堿及其與替莫唑胺聯(lián)合應(yīng)用對(duì)U87細(xì)胞存活的影響

如圖1所示，單用TET或TMZ對(duì)U87細(xì)胞存活有抑制作用，抑制率與藥物濃度呈正相關(guān)（r＝0．903，P＜0．05；r＝0．995，P＜0．05），TET和TMZ對(duì)人腦膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞的IC50分別為（20．91± 3．71）μmol·L－1和（292．15±8．36）μmol·L－1。采用抑制率＜30%的濃度進(jìn)行藥物的聯(lián)合實(shí)驗(yàn)，如圖1B，TMZ＋TET 3．2和6．4μm o l·L－1，其抑制率較單用 TMZ有下調(diào)趨勢(shì)，尤其當(dāng) TMZ＜200μmol·L－1效果更為明顯。當(dāng)TMZ濃度為50和100μmo l·L－1時(shí)，兩者聯(lián)合用藥抑制細(xì)胞存活作用比單用TMZ更明顯。經(jīng)計(jì)算分析表明，TMZ 100μmol·L－1＋TET 6．4μmol·L－1時(shí)，CI＝1．049，說(shuō)明兩藥為疊加作用。

Fig．1 Effect o f tetrand rine（TET）alone or in combination w ith temozo lom ide（TMZ）on U87 cell grow th．The cell viability was performed with a CCK-8 assay when U87 cells were treated with TET，TMZ and TMZ combined w ith TET for24 h．，n＝5．*P＜0．05，compared with TMZ 0μmol·L－1group；＃P＜0．05，compared with TMZ group of the same concentration．

2．2 粉防己堿與替莫唑胺聯(lián)合應(yīng)用對(duì)U87細(xì)胞克隆形成的影響

與正常對(duì)照組相比，單用TET 6．4μm o l·L－1或 TMZ 100μm o l·L－1處理細(xì)胞克隆有減少趨勢(shì)，抑制率分別為（30．2±2．4）%，（28．2±1．4）%；與單用TET及TMZ組相比，TMZ＋TET 3．2和6．4μmol·L－1組細(xì)胞克隆明顯減少（P＜0．05），其抑制率分別為（69．1±2．1）%和（76．5±2．0）%，表明TET合用TMZ能有效抑制U87細(xì)胞增殖。

2．3 粉防己堿與替莫唑胺聯(lián)合應(yīng)用對(duì)U87細(xì)胞遷移能力的影響

Transwe ll小室遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果（圖2）顯示，TMZ 100μm o l·L－1組、TET 6．4μm o l·L－1組、TMZ＋TET 3．2和6．4μmol·L－1組細(xì)胞遷移抑制率分別為（9．4±1．4）%，（12．9±1．0）%，（29．2± 1．6）%和（46．8±3．4）%，表明與單用TET組及TMZ組相比，TET合用TMZ能有效減弱U87細(xì)胞遷移能力（P＜0．05）。

Fig．2 Effec t o f TMZ com bined w ith TET on m ig ration ability o f U87 cells after 24 h treatm en t by transw e ll assay（×100）．A：normalcontrol；B：TMZ 100μm ol·L－1；C：TET 6．4μmol·L－1；D：TMZ 100μmol·L－1＋TET 3．2μmol·L－1；E：TMZ 100μmol·L－1＋TET 6．4μmol·L－1．Arrwos show the migrating cells．

2．4 粉防己堿與替莫唑胺聯(lián)合應(yīng)用對(duì)U87細(xì)胞凋亡的影響

AnnexinⅤ／PI雙染流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示（圖3和表1），與單用TET及TMZ組相比，TMZ＋TET 3．2和6．4μmol·L－1組細(xì)胞早期凋亡率和晚期凋亡及壞死率均明顯增多（P＜0．05，P＜0．01），表明TET合用TMZ能促進(jìn)U87細(xì)胞凋亡。

Fig．3 Effect o f TET combined w ith TMZ on U87 cell apop tosis detected by flow cytometry after 48 h treatm en t．A：norm al control；B：TMZ 100μmol·L－1；C：TET 6．4μmol·L－1group；D：TMZ＋TET 3．2μm ol·L－1group；E：TMZ＋TET 6．4μm ol·L－1group．

Tab．1 Effect o f TET combined w ith TMZ on U87 apop tosis

2．5 粉防己堿與替莫唑胺聯(lián)合應(yīng)用對(duì)U87細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的影響

Western蛋白質(zhì)印跡法結(jié)果（圖4）顯示，TMZ組的抗凋亡蛋白Bcl-XL，活化胱天蛋白酶3及活化PARP變化不明顯；TET組的抗凋亡蛋白Bcl-XL表達(dá)減少，活化PARP表達(dá)增多；與單用TET組及TMZ組相比，TMZ＋TET 3．2和6．4μmol·L－1組，抗凋亡蛋白Bc l-XL明顯減少，執(zhí)行凋亡的活化胱天蛋白酶3蛋白及活化PARP明顯增多（P＜0．05）。

Fig．4 E ffec t o f TET com bined w ith TMZ on p ro tein exp ression o f U87 ce lls detec ted by Western b lo tting after 48 h treatment．C-PARP：cleaved poly（ADP-ribose）polymerase．Lane 1：normal control；lane 2：TMZ 100μmol·L－1；lane 3：TET 6．4μmol·L－1；lane 4：TMZ 100＋TET 3．2μmol·L－1；lane 5：TMZ 100μmol·L－1＋TET 6．4μmol·L－1．B was the semi-quantitative resultof A．，n＝3．*P＜0．05，**P＜0．01，com pared with normal control group；＃P＜0．05，＃＃P＜0．01，com pared w ith TMZ group；△P＜0．05，△△P＜0．01，compared with TET group．

3 討論

本研究結(jié)果表明，TET聯(lián)合TMZ能抑制U87細(xì)胞增殖，減弱其細(xì)胞遷移能力，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。有報(bào)道發(fā)現(xiàn)，在人白血病細(xì)胞U937中，TET通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)活性氧的產(chǎn)生，從而激活JNK和胱天蛋白酶，促進(jìn)細(xì)胞凋亡［8］；在人肝母細(xì)胞瘤HepG2細(xì)胞株中，TET上調(diào)p53，激活胱天蛋白酶3及胱天蛋白酶9，剪切PARP（cleaved-PARP，C-PARP），下調(diào)抑制凋亡的蛋白Bcl-XL和Bcl-2的表達(dá)，表明TET主要通過(guò)線(xiàn)粒體途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡發(fā)揮抗腫瘤作用［9］。

盡管如此，有研究表明，TET可下調(diào)耐藥蛋白P-糖蛋白介導(dǎo)的藥物外排來(lái)逆轉(zhuǎn)多藥耐藥從而發(fā)揮抗腫瘤作用。比如，TET逆轉(zhuǎn)人乳腺癌多藥耐藥細(xì)胞MCF-7／adr對(duì)多柔比星的耐藥［10］；還可逆轉(zhuǎn)人口腔鱗癌多藥耐藥細(xì)胞KBv200對(duì)紫杉醇的耐藥［11］。此外，在人食管鱗癌順鉑耐藥細(xì)胞YES-2／DDP中，TET還可通過(guò)抑制多藥耐藥相關(guān)蛋白MRP1，逆轉(zhuǎn)細(xì)胞對(duì)順鉑的耐藥［12］。在人腦惡性膠質(zhì)瘤U138MG中，TET還可以通過(guò)增強(qiáng)其放療效果來(lái)發(fā)揮抗膠質(zhì)瘤作用［13］。這些TET逆轉(zhuǎn)耐藥和增效作用的研究為T(mén)MZ聯(lián)用TET提供了一定理論依據(jù)。本研究中，TET聯(lián)合運(yùn)用TMZ處理人腦膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞時(shí)，比兩藥單用能更好地抑制U87細(xì)胞生長(zhǎng)、克隆形成和遷移能力等。通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡，兩者聯(lián)合用藥比兩藥單用更能促進(jìn)U87細(xì)胞凋亡。Western蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)凋亡蛋白發(fā)現(xiàn)，TET可能通過(guò)參與下調(diào)細(xì)胞內(nèi)抗凋亡蛋白Bcl-XL，上調(diào)活化胱天蛋白酶3，從而剪切的DNA修復(fù)酶PARP增多，誘導(dǎo)活化胱天蛋白酶3依賴(lài)的細(xì)胞凋亡。這其中，兩藥聯(lián)用促進(jìn)U87細(xì)胞凋亡作用可能與其下調(diào)耐藥相關(guān)蛋白有關(guān)，尚需要進(jìn)一步深入研究。因此，在膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中，建立多藥耐藥蛋白高表達(dá)的細(xì)胞株，進(jìn)一步研究TET對(duì)其生物學(xué)行為的影響及分子機(jī)制顯得更有研究?jī)r(jià)值。

綜上所述，TET聯(lián)合運(yùn)用TMZ能明顯抑制人腦膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞的存活、克隆形成及遷移能力，并誘導(dǎo)胱天蛋白酶3依賴(lài)的細(xì)胞凋亡。這提示TMZ聯(lián)合TET可能成為膠質(zhì)瘤臨床化療過(guò)程中候選治療措施，將提高膠質(zhì)瘤化療效果和抗膠質(zhì)瘤治療提供參考。

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lnhibito ry effect o f tem ozo lom ide com bined w ith tetrand rine on hum an g liob lastom a U87 cells

OBJECTlVETo observe the e ffect o f tem ozo lom ide（TMZ）in com bination w ith tetrand rine（TET）on cell viability，colony formation，m igration and ce ll apoptosis of human g lioblastom a U87 ce lls．METHODSThe viability o f U87 ce lls treated w ith TET（8－64μm o l·L－1），TMZ（50－400μm o l·L－1）and TMZ com bined w ith TET（3．2，6．4μm o l·L－1）was detected by cytotoxicity assays w ith Cell Counting Kit-8（CCK-8），the co lony form ation was detected by Giem sa staining，ce llm igration ability was detected by Transwellm igration assay，cell apoptosis was assayed by flow cytometry using AnnexinⅤ／PIdouble staining，and the expression of apoptosis-related proteins expression was detected by Western blotting．RESULTSThe data of CCK-8 showed that TET（r＝0．903，P＜0．05）or TMZ（r＝0．995，P＜0．05）could inhibitU87 cellviability alone in a concentration-dependentmanner．The cell viability inhibition rate of U87 ce lls by TMZ combined w ith TET was higher than by TMZ or TET a lone．Data showed that the e ffect o f TMZ combined w ith TET was additive．TMZ 100μm ol·L－1inhibited U87 ce ll co lony formation and m igration ab lility com pared w ith norm a l contro l．The inhibition rate o f U87 cells by TMZ 100μmo l·L－1com bined w ith TET（3．2 and 6．4μm ol·L－1）was m ore significant than by TMZ a lone（P＜0．05）．Compared w ith TMZ a lone，TMZ com bined w ith TET（3．2 and 6．4μm o l·L－1）significantly down-regulated the expression of anti-apoptotic protein Bcl-XL，but significantly up-regulated the expression of cleaved caspase 3 protein and cleaved poly（ADP-ribose）polymerase．CONCLUSlONTET combined with TMZ can inhibit U87 cell viability，colony formation and m igration by activating caspase-dependent apoptotic pathway，resulting in apoptosis．

tetrand rine；tem ozo lom ide；U87 cells；apop tosis

ZHONG Xue-yun，E-mail：tzxy＠jnu．edu．cn，Tel：（020）85228363

ZHANG Yong1，2，MA Ji-wei1，2，LIU Hai-ying1，2，WANG Shao-Xiang1，2，3，YAN Yong-rong1，2，LIU Zi-hao1，2，DU Bin1，2，ZHONG Xue-yun1，2

（1．Departm ent o f Patho logy，Medica l Co llege，2．Guangdong Provincia l Key Laboratory o f Mo lecu lar Immunology and Antibody Engineering，3．Guangzhou Jinan Biomedicine Research and Development Center，Guangdong Provincial Key Laboratory of Bioengineering Medicine，Jinan University，Guangzhou 510632，China）

R285，R966

：1000-3002（2014）03-0367-06

Foundation item：The project supported by NationalNatural Science Foundation of China（81072059）；and Science and Technology Innovation Key Project of Guangdong Higher Education Institutes（CXZD1110）

2013-11-06 接受日期：2014-03-12）

（本文編輯：?jiǎn)?虹）

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（81072059）；廣東省高等學(xué)?？萍紕?chuàng)新重點(diǎn)項(xiàng)目（CXZD1110）

張 勇，碩士，主要從事腫瘤病理及膠質(zhì)瘤干細(xì)胞相關(guān)耐藥機(jī)制研究。

鐘雪云，E-mail：tzxy＠jnu．edu．cn，Tel：（020）85228363