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(1 濰坊醫(yī)學(xué)院，山東 濰坊 261000； 2 青島市市立醫(yī)院耳鼻喉科)

新生血管形成對(duì)于惡性腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移至關(guān)重要[1]。目前已發(fā)現(xiàn)許多參與調(diào)節(jié)血管生成的基因和蛋白，包括血管生成的促進(jìn)因子和抑制因子。其中堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)是體內(nèi)最為有效的促進(jìn)血管生成因子之一，可趨化血管內(nèi)膜的各類細(xì)胞[2]，而血小板反應(yīng)蛋白-1 (TSP-1)是重要的抑制血管生成的因子之一。本研究采用免疫組化Supervision法，對(duì)鼻腔-鼻竇惡性腫瘤組織bFGF和TSP-1表達(dá)進(jìn)行檢測，以探討 bFGF和TSP-1水平與鼻腔-鼻竇惡性腫瘤生成的關(guān)系及其臨床意義。

1 材料與方法

1.1 材料來源

收集青島市市立醫(yī)院病理科2009 年1月—2012 年10 月保存的手術(shù)切除的鼻腔及鼻竇組織臘塊，所有病人手術(shù)前均未經(jīng)任何治療，術(shù)后均經(jīng)病理證實(shí)明確診斷。其中鼻腔-鼻竇惡性腫瘤54例，男36例，女18例；中位年齡45.10歲；鱗癌31例，淋巴瘤15例，腺癌8例。鼻腔良性腫瘤 43例，男29例，女14例；中位年齡42.85歲；鼻內(nèi)翻乳頭狀瘤27例，血管瘤16例。鼻息肉 30例，男18例，女12例；中位年齡40.25歲。

1.2 研究方法

蠟塊常規(guī)4 μm厚切片，脫蠟、水化。高溫高壓抗原修復(fù)，以體積分?jǐn)?shù)0.03的H2O2阻斷內(nèi)源性過氧化酶，正常血清孵育20 min后，加相應(yīng)bFGF兔抗人多克隆抗體(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，工作濃度為1∶400)和TSP-1兔抗人單克隆抗體(北京博奧森有限公司，工作濃度為1∶200)與特異性抗原結(jié)合，將加有一抗的切片置于濕盒中，然后將濕盒置于4 ℃冰箱內(nèi)過夜。加二抗系統(tǒng)室溫下孵育。PBS沖洗，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，脫水、封片。用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，用已知bFGF和TSP-1陽性的結(jié)腸癌組織作為陽性對(duì)照。

1.3 免疫組化結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)

bFGF陽性物質(zhì)表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，TSP-1陽性物質(zhì)表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜。每張切片選取5個(gè)高倍視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，觀察各種組織細(xì)胞免疫組織化學(xué)染色的情況并進(jìn)行計(jì)分。計(jì)分方法如下。①根據(jù)細(xì)胞染色強(qiáng)弱計(jì)分:無著色為0分，淺黃或淺褐色為1分，棕黃或褐色為2分，深褐色為3分。②根據(jù)陽性細(xì)胞百分比計(jì)分:1%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，76%～100%為4分。兩者計(jì)分乘積為IHS計(jì)分。IHS計(jì)分<3分為陰性，≥3分為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，統(tǒng)計(jì)處理采用行×列表卡方檢驗(yàn)及四格表精確概率法，P<0.05為差異有顯著性。

2 結(jié) 果

bFGF蛋白陽性物質(zhì)表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，鼻腔-鼻竇惡性腫瘤、鼻腔-鼻竇良性腫瘤及鼻息肉組織bFGF蛋白陽性率分別為83.33%、58.14%、20.00%，組間比較差異有顯著意義(χ2=7.56～32.43，P<0.05)。bFGF蛋白陽性表達(dá)與惡性腫瘤病人的性別、年齡及病理類型無關(guān)(P>0.05)。見表1。

TSP-1蛋白陽性物質(zhì)表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)或胞膜，鼻腔-鼻竇惡性腫瘤、鼻腔-鼻竇良性腫瘤及鼻息肉組織中TSP-1蛋白的陽性率分別為25.93%、62.79%和86.67%，各組間差異具有顯著意義(χ2=5.06～25.53，P<0.05)。TSP-1蛋白陽性表達(dá)與惡性腫瘤病人性別、年齡及病理類型無關(guān)(P>0.05)。見表1。

表1bFGF和TSP-1蛋白在鼻腔-鼻竇組織中的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

bFGF(χ/%)PTSP-1(χ/%)P 62.6549.40 54.55>0.0547.73>0.05() ≤6063.0147.95 >6055.56>0.0559.26>0.05 87.1022.58 73.3333.33 87.50>0.0525.00>0.05

3 討 論

新生血管的生成對(duì)腫瘤的發(fā)生發(fā)展具有重要的作用，腫瘤生長所需要的氧氣和營養(yǎng)可持續(xù)不斷的由新生腫瘤血管而獲得，代謝產(chǎn)物同樣經(jīng)過新生腫瘤血管而帶走[3]，這就為腫瘤的血行及淋巴道轉(zhuǎn)移提供了途徑。但腫瘤的血管新生是一個(gè)復(fù)雜的過程，是多種促進(jìn)血管生成因子及抑制因子共同調(diào)控的結(jié)果。本文主要研究血管生成促進(jìn)因子bFGF及抑制因子TSP-1表達(dá)與鼻腔-鼻竇腫瘤生成的關(guān)系。bFGF通過促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞分裂和趨化，刺激內(nèi)皮細(xì)胞膠原酶和纖維蛋白酶的活化，并降解其基底膜，誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞形成血管芽并向腫瘤組織中生長，促進(jìn)腫瘤血管管腔的生成而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生及發(fā)展[4]；而TSP-1則通過誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡，抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移及管道的形成間接抑制腫瘤的生成，且TSP-1可干擾bFGF與內(nèi)皮細(xì)胞受體的結(jié)合而抑制bFGF的促進(jìn)腫瘤生成的作用[5]。

本研究結(jié)果顯示，bFGF在鼻腔-鼻竇惡性腫瘤中的表達(dá)陽性率明顯高于鼻腔-鼻竇良性腫瘤及鼻息肉組織，由此可以看出 bFGF可能具有促進(jìn)腫瘤發(fā)生的作用。同樣，DEMIRKESEN等[6]研究顯示,bFGF在早期胃癌組織中的表達(dá)明顯高于慢性淺表胃炎,說明bFGF具有促進(jìn)胃癌發(fā)生的作用。VESELY等[7]通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)研究顯示，甲狀腺腫瘤組織中bFGF的表達(dá)明顯高于甲狀旁腺腫的病人，在未分化癌中bFGF的表達(dá)又較乳頭狀癌的表達(dá)明顯增高，提示bFGF與腫瘤的發(fā)生具有相關(guān)性，且惡性程度越高，bFGF表達(dá)越高。

研究結(jié)果已顯示，TSP-1在腫瘤生成中發(fā)揮著復(fù)雜而又互不相同的作用，對(duì)腫瘤的作用有爭議。KASPER等[8]研究顯示，低分化胰腺癌中TSP-1的陽性表達(dá)率明顯高于高分化胰腺癌，表明TSP-1與腫瘤的惡性程度有關(guān)。而楊森等[9]則研究顯示，TSP-1可抑制黏液表皮樣癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，并可抑制腫瘤的惡性轉(zhuǎn)化。本研究結(jié)果顯示，TSP-1在鼻腔-鼻竇惡性腫瘤中的陽性表達(dá)率明顯低于鼻腔-鼻竇良性腫瘤及鼻息肉組織，說明TSP-1隨著腫瘤的惡性程度的增高而陽性表達(dá)率降低，提示TSP-1具有抑制腫瘤生成的作用。研究顯示，乳癌、直腸癌中TSP-1 的陽性表達(dá)率與腫瘤組織惡性程度呈顯著負(fù)相關(guān)[10],本文結(jié)果與此一致。TSP-1在腫瘤中不同的作用是否可能與其類型及TSP-1在腫瘤組織中的濃度有關(guān)，需進(jìn)一步研究。

總之，本研究結(jié)果顯示，bFGF可能對(duì)鼻腔-鼻竇惡性腫瘤的生成具有促進(jìn)作用，而TSP-1可能具有抑制其生成的作用。

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