趙紫亮，楊春輝，張小東，聞 輝，王 沛

(長春中醫(yī)藥大學(xué)，長春130117)

寒濕痹阻型外敷制劑(由萆薢、木瓜、烏藥等中藥精制而成)，是本課題組將臨床應(yīng)用多年，療效十分理想的口服協(xié)定處方制劑的改型制劑，具有活血祛瘀、健骨補(bǔ)腎之功，局部外敷，可直接吸收，并減少口服藥物的不良反應(yīng)。本研究對該外敷制劑中的藥效成分——綠原酸建立一個(gè)含量測定方法，以求為該新制劑的制備提供理論支撐［1-2］。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀:Waters公司;SK-3200H超聲清洗器:上?？茖?dǎo)儀器有限公司;AL-204型電子天平:上?？茖?dǎo)儀器有限公司。

1.2 藥品與試劑 綠原酸:中國藥品生物制品檢定所(批號:110753-200413);寒濕痹阻型外敷制劑是由本研究室自制(由萆薢、木瓜、烏藥等藥經(jīng)提取后，加入適當(dāng)輔料，制成)。陰性對照品，由本研究室自制;用于高效液相的試劑均為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜分析條件 色譜柱:Autanlit C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇－0.5‰三氟乙酸水溶液(24∶76);流速:1.0 mL/min;檢測波長:327 nm;柱溫:30℃;理論塔板數(shù)不低于10 000。

2.2 對照品(標(biāo)準(zhǔn)品)溶液的制備 取經(jīng)80℃干燥至恒重的綠原酸對照品8 mg，精密稱定，置于25 mL容量瓶中，用流動(dòng)相(甲醇－0.5‰三氟乙酸水溶液)溶解，并加至刻線，搖勻，即得(每1 mL中約含綠原酸0.32 mg)儲備液。

2.3 樣品(供試品)溶液的制備 取制劑適量，研細(xì)，取約1.5 g，精密稱定，加70%乙醇40 mL，加熱回流1 h，放冷，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)恿鲃?dòng)相5 mL溶解，用0.45 μm微膜濾過，取濾液，作為制劑樣品供試品。

2.4 陰性對照品溶液制備 按處方比例稱取除木瓜外的其他藥物，按制備法制成的陰性對照品，取陰性對照品適量，研細(xì)，按2.3項(xiàng)下操作，最終制得陰性對照品溶液。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密吸取2.2項(xiàng)下的綠原酸對照品(標(biāo)準(zhǔn)品)儲備液，精密量取儲備液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL置于10 mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。制成含綠原酸0.16～1.6 mg/ mL的一組待測液，分別吸取20 μL進(jìn)樣，按上述色譜條件測定峰面積，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)。以濃度對峰面積進(jìn)行線性回歸。求得回歸方程為:Y=4 407 504.55X－1 248 761.6;r=0.999 7。結(jié)果表明綠原酸進(jìn)樣量在0.32～1.92 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取對照品溶液(儲備液稀釋10倍0.032 mg/mL)20 μL進(jìn)樣，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定色譜峰面積。計(jì)算得精密度試驗(yàn) RSD值為0.20%，結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)儀器有良好的精密度。

2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取供試品適量，精密稱定，依照供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，室溫(20℃)下放置分別于0、2、4、8、16、24 h內(nèi)待測組分峰面積，結(jié)果分別為428329、425866、414280、413020、407271、407144。計(jì)算樣品溶液含量，RSD值為0.55%。結(jié)果表明，供試品溶液在24 h內(nèi)是穩(wěn)定的。

2.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 采用加樣回收法，取已知含量的樣品，精密稱定，分別精密加入一定量的綠原酸對照品，按供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，按上述測定方法進(jìn)行測定，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為99.66%，RSD為0.415%。

2.9 樣品測定 分別取批號為100501、100502、100503、100601、100602、100603的制劑6批樣品，測定結(jié)果見表1。

表1 6批樣品測定結(jié)果(n=6)

3 討論

3.1 樣品溶液流動(dòng)相選擇 鑒于該組方屬于中藥復(fù)方制劑，成分比較復(fù)雜，考慮到在含量測定時(shí)雜質(zhì)的干擾，對樣品的溶解度進(jìn)行了測定試驗(yàn)［3-7］。通過使用甲醇、乙醇、醋酸乙酯、乙腈等試劑進(jìn)行比較，結(jié)果使用甲醇－0.5‰三氟乙酸水溶液(24∶76)作為流動(dòng)相效果最佳。

3.2 測定結(jié)果 本方法簡便快捷，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，為該中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制及綠原酸的含量測定提供可行的方法。

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