黃 敏，陳明迎，舒建德

（連州衛(wèi)生學(xué)校，廣東 連州 513400）

1 材料

1.1 器材

培養(yǎng)皿一套、表面皿（或酒精瓶?jī)?nèi)蓋）、中速色譜濾紙、毛細(xì)吸管、顯色用噴霧器、電吹風(fēng)、電烤箱。

1.2 試劑

0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液（50ml）：精密稱取1.42 g磷酸氫二鈉固體，用蒸餾水溶于小燒杯中，再轉(zhuǎn)移到50ml容量瓶中定容。

0.2mol/L磷酸二氫鈉溶液（50 ml）：精密稱取1.2 g磷酸二氫鈉固體，用蒸餾水溶于小燒杯中，再轉(zhuǎn)移到50ml容量瓶中定容。

pH 7.4的磷酸緩沖溶液：取0.2 mol/L磷酸氫二鈉溶液40.5m l與0.2 mol/L磷酸二氫鈉溶液9.5 m l混勻，加蒸餾水至1 000m l。

0.1mol/L丙氨酸溶液：精密稱取0.891 g丙氨酸固體，溶于少量pH7.4的磷酸緩沖溶液中，以1 mol NaOH調(diào)至pH7.4后，加磷酸緩沖溶液至100m l。

0.1mol/L谷氨酸溶液：精密稱取0.735 g谷氨酸固體，溶于少量pH7.4的磷酸緩沖溶液中，以1 mol NaOH調(diào)至pH7.4后，加磷酸緩沖溶液至50ml。

混合氨基酸溶液：取丙氨酸與谷氨酸溶液各5m l混合。

0.1%茚三酮乙醇溶液：精密稱取0.1 g茚三酮固體，用少量95%乙醇溶解，加95%乙醇至100m l。

飽和苯酚-水溶液（展開劑）：將適量的苯酚溶液溶于適量的水中，得到渾濁液，置于分液漏斗中，靜置8小時(shí)，待下層溶液清晰透明，取下層溶液。

2 方法

2.1 準(zhǔn)備

取一張邊長(zhǎng)為11 cm的正方形中速色譜濾紙，在濾紙上畫一直徑為5.5 cm的圓，以該圓的圓心為定點(diǎn)，1 cm為半徑再畫一同心圓，在小圓內(nèi)過(guò)圓心作兩條相互垂直的線，兩條垂線兩端分別與小圓連接，見圖1。

2.2 點(diǎn)樣

如圖1所示，在1、3兩處用毛細(xì)吸管分別點(diǎn)上丙氨酸和谷氨酸溶液各3滴，在2、4兩處點(diǎn)上混合氨基酸溶液，注意點(diǎn)樣痕跡不宜擴(kuò)散較寬。每一次點(diǎn)完用電吹風(fēng)吹干，重復(fù)點(diǎn)3次即可。

圖1 紙色譜實(shí)驗(yàn)的層析濾紙準(zhǔn)備

2.3 層析

取一張同類濾紙（1.5 cm×1.5 cm），將下半剪成須狀，卷成圓筒。將少量的飽和苯酚-水溶液倒入表面皿中，溶液加至距表面皿邊緣0.5 cm處，將表面皿置于培養(yǎng)皿正中。在點(diǎn)好樣的濾紙圓心處打一個(gè)小孔（鉛筆尖大?。?，將卷好的圓筒濾紙的上端插入小孔（不要讓頂端突出）呈燈芯狀，再將點(diǎn)好樣的濾紙平放到培養(yǎng)皿上，“燈芯”浸入展開劑中。將同樣大小的培養(yǎng)皿反扣在上面以防展開劑揮發(fā)，見圖2。約30分鐘后取出濾紙，用鉛筆畫出展開劑邊緣，再放在60℃電烤箱中烘干。

圖2 層析裝置示意圖

2.4 顯色

烘干后的濾紙展開劑揮發(fā)，用噴霧器噴上0.1%茚三酮乙醇溶液，再放到60℃電烤箱中烘干，可見紫色同心弧斑出現(xiàn)。

2.5 測(cè)量計(jì)算

用鉛筆畫出色斑的中心，用尺量取各色斑中心到原點(diǎn)的距離、原點(diǎn)到試劑前緣的距離，并記錄，計(jì)算出它們各自的Rf值。分析各色斑是何種氨基酸。

3 討論

分析化學(xué)紙色譜實(shí)驗(yàn)是將色譜濾紙懸掛于盛展開劑的色譜缸頂端飽和，10分鐘后再行展開。色譜缸空間較大，濾紙懸掛頂端不便操作。本實(shí)驗(yàn)改進(jìn)為水平型紙色譜，器材簡(jiǎn)易，易于獲取和操作。實(shí)驗(yàn)結(jié)果與教材相同，效果滿意。

氨基酸水平型紙色譜實(shí)驗(yàn)?zāi)苁箤W(xué)生更好地通過(guò)實(shí)踐來(lái)理解實(shí)驗(yàn)原理，激發(fā)學(xué)生對(duì)分析化學(xué)的學(xué)習(xí)興趣和求知欲望，鍛煉學(xué)生的動(dòng)手能力?！?/p>