芮紅兵，鄭 玲，康日輝，林珺芳，鄭曉強(qiáng)

(福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院風(fēng)濕科，福建福州350005)

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)患者機(jī)體能產(chǎn)生多種抗非肽類自身抗體，如抗雙鏈DNA(antidsDNA autoantibody)抗體及抗心磷脂抗體(anti-cardiolipin antibody，ACA))。ACA 在約60%的SLE 患者中高表達(dá)，與動(dòng)靜脈栓塞、血小板減少及狼瘡抗凝因子(lupus anticoagulant，LA))顯著相關(guān)。作為抗原遞呈分子，CD1c 和CD1d 分子在SLE 自身非肽類抗體的發(fā)生發(fā)展中可能發(fā)揮著重要作用。本實(shí)驗(yàn)對(duì)伴ACA 陽性的SLE 患者外周血CD1c 及CD1d 的表達(dá)及相關(guān)細(xì)胞因子進(jìn)行了研究。

1 材料與方法

1.1 主要試劑:FITC 標(biāo)記的小鼠抗人CD1c 和CD1d 抗體(PharMingen 公司)，人IL-4、IL-10、IL-2 或IFN-γ 檢測(cè)試劑盒(R＆D systems 公司)。

1.2 臨床資料:SLE 患者均為福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院門診和住院患者，符合1997年修定的美國風(fēng)濕病學(xué)會(huì)的診斷標(biāo)準(zhǔn)。伴ACA 陽性的活動(dòng)期SLE 患者27 例，其中女性25例，男性2 例，年齡為12～58 歲，平均32.2 歲，病程為7 天～4年。無伴ACA 陽性的活動(dòng)期SLE 患者23 例，其中女性18例，男性5 例，年齡為14～53 歲，平均27.9 歲，病程為10 天～11年。穩(wěn)定期SLE 患者11 例，其中女性9 例，男性2 例，年齡為17～45 歲，平均28.5 歲，病程為240 天到8年?；顒?dòng)期患者均使用糖皮質(zhì)激素加免疫抑制劑治療，潑尼松劑量每日1～1.5 mg/kg，免疫抑制劑為環(huán)磷酰胺(CTX)沖擊治療(CTX 0.8～1.0 g，3 周1 次)或硫唑嘌呤每天0.1g。主要實(shí)驗(yàn)室檢查方面，用ELISA 方法測(cè)定抗核抗體(ANA)、抗ds-DNA 抗體和ACA;用免疫印跡法測(cè)定抗ENA 抗體;蛋白分析儀散射速率法測(cè)定C3、C4 和CRP 含量。20 例正常人為自愿獻(xiàn)血者，其中女性17 例，男性3 例，平均年齡為30.8 歲。經(jīng)福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，各組均簽署知情同意書。

1.3 流式細(xì)胞儀分析:肝素抗凝靜脈血經(jīng)淋巴細(xì)胞分離液離心分層，取出中間層的外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMC)，使用流式細(xì)胞儀(becton dickinson)進(jìn)行細(xì)胞表面抗原分析，每份標(biāo)本分析10 000 個(gè)細(xì)胞?；顒?dòng)期患者于治療前、治療2 周后及治療4 周后分別進(jìn)行流式細(xì)胞分析。

1.4 細(xì)胞因子檢測(cè):人IL-4、IL-10、IL-2、IFN-γ 檢測(cè)采用試劑盒雙抗體夾心法，按說明書操作。

2 結(jié)果

2.1 伴ACA 陽性SLE 患者CD1c、CD1d、IFN-γ、IL-2、IL-4 和IL-10 水平:伴ACA 陽性SLE 患者PBMC 中CD1c+細(xì)胞百分?jǐn)?shù)較對(duì)照組、緩解期組及ACA 陰性組增加(P＜0.05)，CD1d+細(xì)胞百分?jǐn)?shù)較對(duì)照組及緩解期SLE 組增加(P＜0.05)?；顒?dòng)期SLE 患者血清IFN-γ 和IL-2 水平低于對(duì)照組及緩解期SLE 組(P＜0.05)，IL-4 和IL-10 水平高于對(duì)照組及緩解期SLE 組(P＜0.05)(表1)。

2.2 伴ACA 陽性SLE 患者治療前后CD1c、CD1d、IFN-γ、IL-2、IL-4 和IL-10 水平的變化:27 例伴ACA 陽性的活動(dòng)期患者治療2 及4 周后PBMC 中CD1c+及CD1d+細(xì)胞較治療前下降(P＜0.05)。IFN-γ 和IL-2 水平在治療4 周后升高(P＜0.05)，IL-4 和IL-10 水平較治療前下降(P＜0.05)(表2)。

2.3 相關(guān)性分析:伴ACA 陽性SLE 患者PBMC 中CD1c+及CD1d+細(xì)胞與抗dsDNA 抗體水平顯著相關(guān)(P＜0.05)，CD1c的表達(dá)與ACA 和C3 水平顯著相關(guān)(P＜0.05)。IL-4 和IL-10水平與CD1c 和CD1d 陽性細(xì)胞百分率均顯著相關(guān)(P＜0.05)。

表1 伴ACA 陽性SLE 患者CD1c、CD1d、IFN-γ、IL-2、IL-4 和IL-10 水平Table 1 Expression of CD1c，CD1d，IFN-γ，IL-2，IL-4 and IL-10 in SLE patients with positive ACA (±s，n=27)

表1 伴ACA 陽性SLE 患者CD1c、CD1d、IFN-γ、IL-2、IL-4 和IL-10 水平Table 1 Expression of CD1c，CD1d，IFN-γ，IL-2，IL-4 and IL-10 in SLE patients with positive ACA (±s，n=27)

＊P＜0.05 compared with control or stable patients;#P＜0.05 compared with active patients with ACA －.

groupnCD1cCD1dIFN-γ(ng/L) IL-2(ng/L)IL-4(ng/L)IL-10(ng/L)control203.0% ±0.7%3.0% ±1.0%15.4 ±3.312.9 ±5.217.4 ±5.235.6 ±11.2 stable patients113.3% ±0.5%3.5% ±0.8%16.2 ±5.412.2 ±4.115.8 ±4.737.7 ±10.8 active patients with ACA －234.4% ±1.1% *5.2% ±1.5% *12.6 ±4.4*3.0 ±1.2*33.6 ±5.2*59.2 ±9.6*active patients with ACA +275.4% ±1.2% #5.4% ±1.4% *11.7 ±4.8*3.2 ±1.0*34.2 ±4.9*58.8 ±9.1*

表2 伴ACA 陽性SLE 患者治療前后CD1c、CD1d、IFN-γ、IL-2、IL-4 和IL-10 水平的變化Table 2 Expression of CD1c，CD1d，IFN-γ，IL-2，IL-4 and IL-10 in active SLE patients with positive ACA after treatment(±s，n=27)

表2 伴ACA 陽性SLE 患者治療前后CD1c、CD1d、IFN-γ、IL-2、IL-4 和IL-10 水平的變化Table 2 Expression of CD1c，CD1d，IFN-γ，IL-2，IL-4 and IL-10 in active SLE patients with positive ACA after treatment(±s，n=27)

*P＜0.05 compared with two weeks after treatment;#P＜0.05 compared with before treatment.

CD1cCD1dIFN-γ(ng/L)IL-2(ng/L)IL-4(ng/L)IL-10(ng/L)before treatment5.4% ±1.2%5.4% ±1.4%11.7 ±4.83.2 ±1.034.2 ±4.958.8 ±9.1 two weeks after treatment4.1% ±1.1% #4.5% ±0.9% #12.9 ±3.43.3 ±0.928.7 ±6.151.5 ±9.3 four weeks after treatment2.6% ±0.9% *2.8% ±0.8% *13.2 ±3.6#4.8 ±1.3#27.4 ±6.1#46.4 ±8.0#

3 討論

CD1 遞呈的是非肽類的抗原，CD1c 和CD1d 的抗原遞呈作用和自身免疫病發(fā)病密切相關(guān)［1］。本研究中發(fā)現(xiàn)，二種CD1 分子特別是CD1c 水平在伴ACA 陽性患者PBMC 中明顯升高，且與ACA、抗dsDNA 抗體和補(bǔ)體C3 水平明顯相關(guān)，治療后CD1c 和CD1d 水平明顯下降，提示CD1c 和CD1d 與這兩種抗體及病情發(fā)展有關(guān)，在伴ACA 陽性活動(dòng)期SLE 中這兩種自身抗原遞呈分子尤其CD1c 呈現(xiàn)亢進(jìn)現(xiàn)象，引起這種現(xiàn)象的機(jī)制目前尚不清楚。

SLE 患者體內(nèi)T 和B 細(xì)胞紊亂導(dǎo)致免疫異常是SLE 主要的發(fā)病機(jī)制，這種紊亂往往又表現(xiàn)為細(xì)胞因子表達(dá)異常。研究發(fā)現(xiàn)，伴ACA 陽性的SLE 患者血清Th1 細(xì)胞因子IFNγ、IL-2 水平低于正常對(duì)照組，Th2 細(xì)胞因子IL-4、IL-10 水平高于正常對(duì)照組，且與CD1c、CD1d 水平顯著相關(guān)。這可能與CD1 對(duì)自身抗原的遞呈引發(fā)了一個(gè)Th2 型應(yīng)答反應(yīng)，激活效應(yīng)細(xì)胞快速產(chǎn)生細(xì)胞因子有關(guān)，而與CD1 分子遞呈細(xì)菌抗原引發(fā)了IFN-γ 的產(chǎn)生和Th1 型應(yīng)答反應(yīng)，以利受感染巨噬細(xì)胞的清除不同［2-3］。

經(jīng)有效治療后的患者CD1c、CD1d 陽性細(xì)胞水平很快下降至正常范圍，自身抗體的產(chǎn)生及疾病得到有效控制。雖然細(xì)胞因子水平也向正常趨勢(shì)變化，但下降速度較慢且與正常水平仍有較大差距。這些跡象表明，SLE 發(fā)病機(jī)制中重要的自身抗原遞呈分子亢進(jìn)現(xiàn)象隨著有效治療能很快恢復(fù)，但不平衡的細(xì)胞因子卻在短時(shí)間內(nèi)難以恢復(fù)，這也提示SLE 的治療是個(gè)長(zhǎng)期緩慢的過程。

［1］Brigl M，Brenner MB.CD1:antigen presentation and T cell function［J］.Annu Rev Immunol，2004，22:817-890.

［2］Yap DY，Lai KN.The role of cytokines in the pathogenesis of systemic lupus erythematosus-from bench to bedside［J］.Nephrology (Carlton)，2013，18:243-255.

［3］Montamat-Sicotte DJ，Millington KA，Willcox CR，et al.A mycolic acid-specific CD1-restricted T cell population contributes to acute and memory immune responses in human tuberculosis infection［J］.J Clin Invest，2011，121:2493-2503.