康明艷，李悅，魏文靜，靜寶元

（天津渤海職業(yè)技術(shù)學(xué)院，天津300402）

高效液相色譜法測定茶葉中的茶多酚

康明艷，李悅，魏文靜，靜寶元

（天津渤海職業(yè)技術(shù)學(xué)院，天津300402）

采用高效液相法，應(yīng)用L-3000高效液相色譜系統(tǒng)建立了茶葉提取物中茶多酚的分析分離方法，取得了理想的分離效果。實(shí)驗(yàn)證明該方法前處理簡便，分析結(jié)果準(zhǔn)確度高，精密度好，非常適合用于測定綠茶提取物中的茶多酚。

茶葉；茶多酚；高效液相色譜法

茶多酚是一類存在于茶樹中的多羥基酚類化合物的簡稱，尤以茶葉中含量最高，干茶葉中含茶多酚在30%左右。茶多酚主要包括兒茶素類（黃烷酮類），黃酮，黃酮醇類，花青素類，花白素類和酚酸及縮酚酸類。其中兒茶素類是茶多酚的主體組分，約占茶多酚總量的90%左右[1]。

茶多酚是茶葉中最具生物活性的成分，尤其其中的主要組分兒茶素。研究證實(shí)兒茶素具有良好的抗氧化能力，同時(shí)具有抗腫瘤，抗誘變，預(yù)防齲齒等功效。因此兒茶素日益受到人們重視，成為一類重要的食品添加劑和藥物成分[2]。

在茶多酚的色譜分析方法中，反相HPLC法是目前普遍使用，技術(shù)最為成熟的方法。本文應(yīng)用北京普源精儀科技有限責(zé)任公司自主研發(fā)的RIGOL L-3000高效液相色譜儀建立了綠茶提取物中茶多酚的分離分析方法。實(shí)驗(yàn)證明該方法分離效果好，分析準(zhǔn)確度高，重現(xiàn)性好。同時(shí)，RIGOLL-3000高效液相色譜儀非常適用于綠茶提取物中茶多酚的分離分析工作。

1材料與方法

1.1 儀器及試劑

RIGOL L-3000高效液相色譜系統(tǒng)（配L-3300自動(dòng)進(jìn)樣器）：北京普源精儀科技有限責(zé)任公司；超milli-Q純水純化系統(tǒng)：美國Millipore；BT 124S天平：德國塞多利斯；粉碎機(jī)：天津泰斯特FW 80；PHSJ-4A酸度計(jì)：上海雷磁；10μL～100μL/100μL～1 000μL移液槍：eppendorf；綠茶提取物：某天然產(chǎn)物公司；其余試劑均為市售HPLC級或分析純。

1.2 色譜條件

色譜柱：Rigol：Compass，C18，5μm，4.6×250 mm id，柱溫：35℃；進(jìn)樣量：10μL；流動(dòng)相：A為乙腈：水：TFA溶液；B為乙腈：水溶液，采用梯度洗脫。

表1 梯度方法參數(shù)Table1 Gradient method parameters

1.3 試樣準(zhǔn)備

1.3.1 樣品溶液的制備[3]

精密稱取綠茶提取物（從綠茶中經(jīng)過一系列工業(yè)提取純化制得）約23mg，置于10mL容量瓶中，加80%乙醇溶解，超聲提取20min，加80%乙醇定容，以0.45μm微孔濾膜濾過，濾液作為樣品供試液備用。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 樣品測試[4]

在選定的色譜條件下以樣品供試液進(jìn)樣，進(jìn)樣量10μL。

2結(jié)果及討論

2.1 樣品的分離

圖1 綠茶提取物樣品的色譜分離圖Fig.1 Green tea extract chromatographic separation of sample map

2.2 精密度實(shí)驗(yàn)

取茶葉提取物供試溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，進(jìn)樣量10μL[5]。根據(jù)測定結(jié)果，計(jì)算保留時(shí)間及峰面積的RSD（相對標(biāo)準(zhǔn)偏差），得到圖2結(jié)果。

圖2 樣品重復(fù)性實(shí)驗(yàn)譜圖Fig.2 Experimental spectra of sample reproducibility

以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果該方法可將綠茶提取物中茶多酚的多種成分分離開，定性定量重復(fù)性好。

2.3 流動(dòng)相的選擇實(shí)驗(yàn)

流動(dòng)相的選擇實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，茶葉成分的分析多采用梯度洗脫，其調(diào)節(jié)酸堿度的試劑多種多樣，可以用醋酸、磷酸、DMF、TFA等，分析時(shí)間從十幾分鐘到1 h不等。本實(shí)驗(yàn)先采用磷酸鹽做流動(dòng)相分析，出峰少且峰型不理想，后改用TFA，得到的峰型對稱性比較好。

表2 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab le2 Precision of experimental results

此外，文獻(xiàn)采用的梯度方法是A相在17 min內(nèi)由100%變化到25%[6]，采用這一方法實(shí)際的結(jié)果顯示，DL-C和EC分離效果不理想，調(diào)整了梯度方法后，這一問題得到了解決。

3結(jié)論

應(yīng)用RIGOL L-3000高效液相色譜儀，采用本文的方法進(jìn)行綠茶提取物中茶多酚活性物質(zhì)的分離分析實(shí)驗(yàn)，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好。該儀器與方法結(jié)合，可充分滿足綠茶提取物產(chǎn)品質(zhì)量控制的實(shí)驗(yàn)要求。

[1]王宏展．茶葉食品開拓研究[M]．北京：中國農(nóng)業(yè)出版社,1995：149-158

[2]方元超,趙晉府.茶飲料生產(chǎn)技術(shù)[M]．北京：中國輕工業(yè)出版社, 2001：23-25,325-326

[3]胡秋輝．茶葉中茶多酚和咖啡因提取技術(shù)研究[J]．天然產(chǎn)物研究與開發(fā),1997：63-66

[4]陳鶴立．高效液相色譜法測定茶葉中茶多酚及咖啡堿含量[J]．福建醫(yī)藥,2006：80-81

[5]陳海軍．茶多酚的生理保健功能及檢測方法探析[J]．廣西輕工業(yè),2009：4-6

[6]錢驊,趙伯濤,張衛(wèi)明.茶多酚提取、分離工藝研究[J]．中成藥, 1998：8

Determination of Tea Polyphenols by HPLC

KANGMing-yan，LIYue，WEIWen-jing，JINGBao-yuan
（Tianjin Bohai Vocational and Technical College，Tianjin 300402，China）

In this paper，HPLC，applied L-3000 HPLC system established tea extract polyphenols analysis and separation methods，achieved the desired separation.Experiments show that this method is simple pre-processing，analysis accuracy，Good precision，is very suitable for the determination of polyphenols in green tea extract.

tea；polyphenols；HPLC

10.3969/j.issn.1005-6521.2014.15.026

2013-11-11

康明艷（1975—），女（漢），講師，碩士研究生，研究方向：化學(xué)工程。