王 磊，王 煒，王 照，尹海軍*，徐學(xué)軍，高景宇

(1.河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院泌尿外科，河北 石家莊 050031；2.河北省承德市疾病預(yù)防控制中心,河北 承德 067000)

增殖細(xì)胞核抗原(proliferative cell nuclear antigen，PCNA)是一種相對分子質(zhì)量36 000的非組蛋白細(xì)胞核多肽，是DNA聚合酶δ的輔助蛋白，對DNA復(fù)制的調(diào)節(jié)起重要作用[1]。PCNA的陽性表達程度與腫瘤的增殖活性、轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)率及預(yù)后情況有顯著的相關(guān)性[2-3]，現(xiàn)已成為檢測腫瘤細(xì)胞增殖動力的有效指標(biāo)。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法觀察PCNA在正常膀胱黏膜、腺性膀胱炎和膀胱移行細(xì)胞癌(bladder transitional cell carcinoma，BTCC)中的表達，以探討其在腺性膀胱炎中的表達及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源：采用河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院2006—2009年人腺性膀胱炎標(biāo)本30例，正常膀胱黏膜30例，膀胱移行細(xì)胞癌30例。所有標(biāo)本均經(jīng)病理證實。腺性膀胱炎標(biāo)本均為術(shù)前活組織檢查標(biāo)本，正常膀胱黏膜為活組織檢查標(biāo)本，膀胱移行細(xì)胞癌標(biāo)本為經(jīng)尿道膀胱腫瘤電切術(shù)后及膀胱全切術(shù)后標(biāo)本。術(shù)前未行任何治療。病理分級，G1級18例，G2級6例，G3級6例。臨床分期，Tis-T1(淺表性)21例，T2～T4(浸潤性)9例。

1.2 主要儀器及試劑：鼠抗人PCNA單克隆抗體(美國Santa Cruz公司產(chǎn)品)；辣根過氧化氫酶二氨基苯胺(diaminobenzidine,DAB)顯色試劑盒；SP試劑盒。以上產(chǎn)品購于河北博海生物工程開發(fā)有限公司。

1.3 PCNA免疫組織化學(xué)法：從所取標(biāo)本上切取小于0.5cm×0.5cm×0.1cm的組織塊，用4%多聚甲醛固定，石蠟包埋。石蠟切片脫蠟至水后，1%甲醇雙氧水，室溫孵育10min，微波修復(fù)抗原，冷卻至室溫后，滴加正常山羊血清封閉液，室溫20min，甩去血清后滴加PCNA一抗，置4℃濕盒中過夜。0.01mol/L PBS沖洗3次×5min，滴加生物素化二抗37℃孵育20min。0.01mol/L PBS沖洗3次×5min，滴加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液，37℃孵育20min。0.01mol/L PBS沖洗3次×5min，將DAB顯色試劑盒中顯色劑A、B、C各1滴加入1mL蒸餾水中，混勻，加至切片上，顯微鏡下控制顯色時間。每次實驗均設(shè)陰性對照，以PBS代替一抗。

1.4 PCNA染色判斷標(biāo)準(zhǔn):PCNA以細(xì)胞核發(fā)現(xiàn)棕黃色為陽性信號。借助醫(yī)學(xué)真彩色計算機圖像分析系統(tǒng)，每張切片連續(xù)觀察10個高倍視野(400倍)，計算出各自的陽性細(xì)胞百分比。陽性細(xì)胞數(shù)<10%為陰性，陽性細(xì)胞數(shù)>10%為陽性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法:應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理，計數(shù)資料以百分率表示,組間比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

PCNA在正常膀胱黏膜無陽性表達，在腺性膀胱炎黏膜細(xì)胞核內(nèi)見散在棕黃色陽性顆粒，在膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞核內(nèi)密布棕黃色陽性顆粒。腺性膀胱炎和膀胱移行癌PCNA表達陽性率均明顯高于正常膀胱黏膜，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；腺性膀胱炎PCNA表達陽性率明顯低于膀胱移行癌，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 3組PCNA陽性表達比較Table 1 Comparison of PCNA positive among three groups (n=30，n，%)

*P<0.05vsnormal tunica mucosa of bladder #P<0.05vscystitis glandularis specimens by χ2test

3 討 論

腺性膀胱炎是一種膀胱黏膜上皮增生性病變，組織學(xué)上膀胱黏膜固有層有柱狀上皮形成的腺樣結(jié)構(gòu)(Brunn細(xì)胞巢)，并可見有黏液形成。固有層內(nèi)有不同程度的充血、水腫和淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞浸潤。近年來隨著腔內(nèi)泌尿外科的發(fā)展，臨床和病理醫(yī)師對本病的認(rèn)識逐漸提高，腺性膀胱炎確診率有增高趨勢。關(guān)于腺性膀胱炎與膀胱腫瘤的關(guān)系，目前仍有爭論。一種觀點認(rèn)為腺性膀胱炎是移行上皮的正常變異，與炎癥無關(guān)，亦非癌前病變[4]。而另一種觀點認(rèn)為腺性膀胱炎是癌前病變，一些腺性膀胱炎最終會進展為腺癌[5]。

雖然，腺性膀胱炎(特別是腸上皮型)發(fā)展為膀胱腺癌的病例也時有報道[6-8]，但要證實腺性膀胱炎為膀胱腫瘤的癌前病變尚缺乏確切的證據(jù)。膀胱癌是我國泌尿系統(tǒng)發(fā)病率最高的惡性腫瘤，術(shù)后復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致治療失敗的常見原因，因此，研究腺性膀胱炎與膀胱移行細(xì)胞癌之間的關(guān)系，對于早期發(fā)現(xiàn)膀胱癌、降低術(shù)后復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移，提高患者的生存率具有重要意義。

PCNA是真核生物復(fù)制復(fù)合體的核心成分，作為真核細(xì)胞DNA聚合酶δ的輔助蛋白，協(xié)調(diào)DNA的復(fù)制過程。同時，PCNA還作為功能轉(zhuǎn)換因子，通過不同調(diào)控方式與多種細(xì)胞因子作用，參與DNA損傷修復(fù)、細(xì)胞周期調(diào)控及凋亡等許多重要的細(xì)胞事件，且與腫瘤等細(xì)胞增殖性疾病的發(fā)生發(fā)展存在相關(guān)性[1]。在多種惡性腫瘤如腎癌、結(jié)腸癌、睪丸腫瘤、肝癌、喉癌、乳腺癌、甲狀腺癌等中，PCNA的表達明顯增高。在PCNA與膀胱腫瘤關(guān)系的研究中發(fā)現(xiàn)，PCNA在膀胱癌中有較高表達率，并且其表達與判斷預(yù)后的指標(biāo)如腫瘤病理分級、臨床分期等也具有相關(guān)性：PCNA在膀胱良性病變中無表達或呈弱陽性表達；在膀胱癌中病理分級越高，分化程度越低，PCNA的表達也越強；發(fā)生浸潤、轉(zhuǎn)移的膀胱癌較表淺性膀胱癌的PCNA表達明顯增強；復(fù)發(fā)膀胱腫瘤的PCNA陽性細(xì)胞數(shù)高于未復(fù)發(fā)者。因此，PCNA的表達可作為判斷膀胱癌預(yù)后的指標(biāo)之一[9-10]。

本研究觀察了PCNA在腺性膀胱炎中的表達情況，并與其在正常膀胱黏膜及膀胱移行細(xì)胞癌中的表達進行比較，以探討腺性膀胱炎與膀胱移行細(xì)胞癌的關(guān)系，以期為臨床上膀胱癌的早期發(fā)現(xiàn)與診斷提供依據(jù)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PCNA在腺性膀胱炎的陽性表達率(46.7%)顯著高于正常膀胱黏膜PCNA的表達陽性率(0.0%)，但低于其在膀胱移行細(xì)胞癌中的表達陽性率(73.3%)。表明腺性膀胱炎是介于膀胱正常黏膜與膀胱移行細(xì)胞癌之間的一個階段，腺性膀胱炎中細(xì)胞的增殖活躍程度高于正常膀胱黏膜，但低于膀胱移行細(xì)胞癌，不能等同于癌癥，可又具有惡變潛能，PCNA的表達可能促進膀胱腫瘤的發(fā)生，提示腺性膀胱炎可能是癌前病變。PCNA可用于腺性膀胱炎與膀胱腫瘤關(guān)系的研究。

[1] STRZALKA W,ZIEMIENOWICZ A.Proliferating cell nuclear antigen (PCNA):a key factor in DNA replication and cell cycle regulation[J].Ann Bot,2011,107(7):1127-1140.

[2] CAPPELLO F,RIBBENE A,CAMPANELLA C,et al.The value of immunohistochemical research on PCNA,p53 and heat shock proteins in prostate cancer management:a review[J].Eur J Histochem,2006,50(1):25-34.

[3] QASIM BJ,ALI HH,HUSSEIN AG.Immunohistochemical expression of PCNA and CD34 in colorectal adenomas and carcinomas using specified automated cellular image analysis system:a clinicopathologic study[J].Saudi J Gastroenterol,2012,18(4):268-276.

[4] LAGE AL,GILLETT NA,GERLACH RF,et al.The prevalence and distribution of proliferative and metaplastic changes in normal appearing canine bladders[J].J Urol,1989,141(4):993-997.

[5] PANTUCK AJ,BANCILA E,DAS KM,et al.Adenocarcinoma of the urachus and bladder expresses a unique colonic epithelial epitope:an immunohistochemical study[J].J Urol,1997,158(5):1722-1727.

[6] HEYNS CF,DE KOCK ML,KIRSTEN PH,et al.Pelvic lipomatosis associated with cystitis glandularis and adenocarcinoma of the bladder[J].J Urol,1991,145(2):364-366.

[7] THRASHER JB,RAJAN RR,PEREZLM,et al.Cystitis glandularis.Transition to adenocarcinoma of the urinary bladder[J].N C Med J,1994,55(11):562-564.

[8] S?ZEN S,GüROCAK S,UZüM N,et al.The importance of re-evaluation in patients with cystitis glandularis associated with pelvic lipomatosis:a case report[J].Urol Oncol,2004,22(5):428-430.

[9] SKOPELITOU A,HADJIYANNAKIS M,DIMOPOULOS D,et al.p53 and c-jun expression in urinary bladder transitional cell carcinoma:correlation with proliferating cell nuclear antigen (PCNA) histological grade and clinical stage[J].Eur Urol,1997,31(4):464-471.

[10] INAGAKI T,EBISUNO S,UEKADO Y,et al.PCNA and p53 in urinary bladder cancer:correlation with histological findings and prognosis[J].Int J Urol,1997,4(2):172-177.