張帆鄒惠美崔道林晏廷亮董超

THH對膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠模型病理評分的影響

張帆①鄒惠美①崔道林①晏廷亮①董超①

目的：探討昆明山海棠（tripterygium hypoglaucum hutch，THH）對膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎（collagen induced arthritis，CIA）大鼠模型關(guān)節(jié)病理評分的影響。方法：60只Wistar大鼠（雌雄各30只），將其隨機(jī)分為6組：空白組、模型組、地塞米松治療組以及THH高、中、低劑量治療組，連續(xù)給藥30 d，觀察大鼠關(guān)節(jié)病理的改變。結(jié)果：給藥30 d后，HE染色顯示模型組產(chǎn)生多層滑膜細(xì)胞，大量炎癥細(xì)胞和血管翳生成；在3個THH治療組中中劑量的治療效果最好，鏡下只見2～3層滑膜細(xì)胞，少見炎癥細(xì)胞。結(jié)論：HE染色結(jié)果顯示THH對CIA模型有積極的治療作用。

昆明山海棠； 膠原性誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎； 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）是一種可以引起多個關(guān)節(jié)破壞、以滑膜組織的慢性炎癥為特點(diǎn)的自身免疫性疾病，由于目前臨床尚缺乏治療RA的有效方法，導(dǎo)致許多患者最終形成關(guān)節(jié)畸形，這嚴(yán)重影響了患者的生活質(zhì)量[1-2]。昆明山海棠是一種傳統(tǒng)中草藥，具有抗炎和調(diào)節(jié)免疫等多種作用，目前該藥在臨床上用于治療RA等多種自身免疫性疾病取得了良好的效果[3]。本文通過CIA大鼠模型在THH作用下的病理學(xué)改變來驗證THH對RA的確切療效，現(xiàn)具體分析如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗動物與試劑 健康Wistar大鼠60只，雌雄各30只；昆明山海棠；地塞米松；牛Ⅱ型膠原；不完全弗氏佐劑。

1.2 實(shí)驗方法

1.2.1 動物的分組、標(biāo)記、造模 10只大鼠設(shè)為空白組（A組）不予任何處理。50只大鼠造模后隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為模型組（B組），地塞米松治療組（C組），以及THH高（D組）、中（E組）、低（F組）劑量治療組。每組均給予10%水合氯醛進(jìn)行腹腔注射，麻醉后在大鼠尾根部皮膚分5處皮內(nèi)注射乳化膠原共0.5 mL，每處注射0.1 mL。首次免疫第14天后相同方法等量加強(qiáng)免疫一次。

1.2.2 給藥 首次免疫第28天后開始藥物治療。A組不予任何處理。而B、C、D、E、F各組則按照每100克大鼠體重0.2 mL的劑量分別灌注蒸餾水，0.04 mg/mL地塞米松灌注液，200 mg/mL、150 mg/mL和100 mg/mL的高中低三個劑量的THH灌注液，灌胃1次/d，連續(xù)30 d。

1.2.3 標(biāo)本制作 所有大鼠于給藥第30天后處死，取大鼠踝關(guān)節(jié)于4%多聚甲醛中固定12 h，然后放入10%乙二胺四乙酸中脫鈣。脫水包埋切片，行HE染色。

1.2.4 病理學(xué)評分 方法參照Tsubaki等[4]于2005年提出的病理學(xué)評分。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 16.0軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析；計量資料用（±s）表示，多組間均數(shù)的比較應(yīng)用單因素方差分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠踝關(guān)節(jié)病理學(xué)改變 各組大鼠踝關(guān)節(jié)病理學(xué)改變。

2.1 A組 滑膜由1～2層滑膜細(xì)胞組成，鏡下未見炎癥細(xì)胞浸潤及血管增生，軟骨表面光滑，未見骨破壞，關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)完整。

2.2 B組 滑膜細(xì)胞增生明顯，形成10～15層滑膜層，并伴有血管翳形成。滑膜組織增生并呈絨毛狀伸入關(guān)節(jié)腔內(nèi)，關(guān)節(jié)腔內(nèi)有大量炎癥細(xì)胞浸潤，關(guān)節(jié)表面透明軟骨與骨組織發(fā)生破壞，局部纖維化并相互粘連，關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)被破壞。

2.3 C組 該組在所有治療組中的效果最佳，滑膜細(xì)胞層數(shù)基本處于正常水平，血管翳和炎癥也基本消失，偶見造模階段引起的少許骨組織破壞。

2.4 D組 該組對于模型有一定的抗炎作用，但與C組和E組相比，治療效果稍顯遜色。鏡下少見血管增生和炎癥細(xì)胞浸潤，滑膜細(xì)胞層數(shù)相比空白組稍有增加，達(dá)到5～6層，少見軟骨與骨組織破壞。

2.5 E組 該組在所有THH治療組中效果最好，鏡下只見2～3層滑膜細(xì)胞，很少見到炎癥細(xì)胞和血管增生，基本沒有發(fā)生軟骨與骨組織破壞。

2.6 F組 鏡下仍然可見數(shù)層滑膜細(xì)胞增生組織，有少許炎癥細(xì)胞浸潤同時伴有血管增生，關(guān)節(jié)骨組織破壞明顯，相對于其他治療組治療效果不太理想，具體病理學(xué)評分見表1。

表1 各組大鼠滑膜病理學(xué)評分（±s） 分

表1 各組大鼠滑膜病理學(xué)評分（±s） 分

*與A組比較，P＜0.05；△與B組比較，P＜0.05

組別 總分 滑膜增生 炎癥細(xì)胞浸潤 新生血管A組（n=10） 0.089±0.139△ 0.011±0.001△ 0.022±0.011△ 0.013±0.002△B組（n=10） 0.769±0.078* 0.481±0.001* 0.151±0.041* 0.281±0.160*C組（n=10） 0.514±0.129*△ 0.045±0.149△ 0.081±0.021△ 0.117±0.152△D組（n=10） 0.612±0.086*△ 0.287±0.171*△ 0.948±0.027* 0.208±0.141*E組（n=10） 0.546±0.129*△ 0.311±0.128*△ 0.010±0.003△ 0.198±0.149*F組（n=10） 0.597±0.108*△ 0.339±0.152*△ 0.053±0.017△ 0.244±0.171*

3 討論

RA是一種病因未明的慢性全身性自身免疫性疾病，以對稱性、多關(guān)節(jié)滑膜炎和關(guān)節(jié)外病變?yōu)橹饕R床表現(xiàn)，主要累及手、腕、足等小關(guān)節(jié)，反復(fù)發(fā)作，呈對稱分布[5]。傳統(tǒng)治療RA的藥物主要包括激素類和非甾體類抗炎藥等藥物，但長時間服用這些藥物會帶來類似骨髓抑制等一些較為嚴(yán)重的毒副反應(yīng)[6]，這也是許多患者無法堅持服藥治療的主要原因。因此臨床上治療RA的藥物雖然很多，但至今尚沒有一種特效的治療方法，所以目前對于RA的治療依然只能以減輕患者疼痛、降低病理損害和減緩關(guān)節(jié)畸形為治療的主要目標(biāo)。

昆明山海棠是一種與雷公藤同屬的傳統(tǒng)中草藥，與雷公藤相比，昆明山海棠具有毒性更小、安全范圍更大的優(yōu)點(diǎn)，目前在臨床上主要用于治療RA等多種自身免疫性疾病，效果顯著[7-8]。膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎以多發(fā)性關(guān)節(jié)炎性改變并伴有關(guān)節(jié)損害為特征，是國內(nèi)外較為理想的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎動物模型之一，大鼠則因飼養(yǎng)容易，實(shí)驗成本低廉而成為首選[9]。此種大鼠模型的病理特征甚至包括某些臨床表現(xiàn)都非常接近于人類RA[10]，因此本實(shí)驗采用了這種動物模型。

實(shí)驗結(jié)果顯示，在所有治療組中地塞米松的治療效果最好，這也是肯定了這一經(jīng)典藥物治療RA的有效性。同時在THH高中低三個不同劑量治療組中，中劑量的治療效果最好，這就提示在臨床用藥時應(yīng)該注意人體用藥劑量的把握?？傊畯腍E染色結(jié)果可以看出，模型建立成功，鏡下出現(xiàn)關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞增生、炎癥細(xì)胞浸潤、血管增生和軟骨及骨質(zhì)破壞等病理改變，所有THH治療組與模型組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），說明昆明山海棠對于大鼠模型的治療是有效的，這也驗證了THH在臨床上對于治療RA的積極作用。

[1]黃蓓，汪慶童，劉亢亢，等.類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)生發(fā)展中TNF-α信號通路與CD4+T細(xì)胞的關(guān)系[J].中國藥理學(xué)通報，2013，29（7）：900-903.

[2]傅旭春，蔣芳萍，范珈禎，等.豨薟草對單克隆抗體組合誘導(dǎo)的小鼠類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎作用[J].浙江大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2013，42（5）：556-560.

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[6]賴愛云，徐健，梁維，等.甲氨蝶呤聯(lián)合來氟米特治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的療效觀察[J].中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2012，9（10）：32-33.

[7]馮小可，談文峰，王芳，等.雷公藤紅素對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞中RANKL、OPG及炎性因子表達(dá)的影響[J].南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2013，33（6）：759-765.

[8]李莎莎，陳森洲，周英瓊，等.THH對HIF-1α在CIA動物模型中表達(dá)的影響及意義[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2011，27（5）：528-530.

[9]宋海霞，王全師.高頻超聲在大鼠膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎模型中的應(yīng)用[J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2013，33（12）：1766-1770.

[10] Kogure M，Mimura N，Ikemoto H，et al.Moxibustion at mingmen reduces inflammation and decreases IL-6 in a collagen-induced arthritis mouse model[J].Acupunct Meridian Stud，2012，5（1）：29-33.

The THH’s Effect on Pathological Score of Rats with CIA

/ZHANG Fan，ZOU Hui-mei，CUI Dao-lin，et al.// Medical Innovation of China，2014，11（08）：013-014

Objective：To explore the THH’s effect on pathological score of rats with CIA.Method：Sixty wistar rats （half male and half female） were randomly divided into six groups：the control group，the model control group，the dexamethasone treatment group，three treatment groups of high-dose，moderate-dose，low-dose of THH.The pathological changes of the rats were observed on the treatment for 30 days.Result：After the treatment for 30 days，HE staining revealed that the model control group were full of layers of synovial cells，a large number of inflammatory cells and vascular pannus were formed.The effect of moderate-dose group was the best among the three treatment groups of THH，there were only 2-3 layers of the synovial cells，inflammatory cells rarely exist.Conclusion：HE dyeing results confirm obvious curative effect of THH for CIA model.

Tripterygium hypoglaucum hutch； Collagen induced arthritis； Rheumatoid Arthritis

10.3969/j.issn.1674-4985.2014.08.006

2013-12-26） （本文編輯：歐麗）

①曲靖醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校 云南 曲靖 655000

鄒惠美

First-author’s address：Qujing Medical College，Qujing 655000，China