竇德泉，曾 艷，朱玥明，劉 燦，孫媛霞

（1.北京農(nóng)學(xué)院園林學(xué)院，北京 102206；2.中國(guó)科學(xué)院天津工業(yè)生物技術(shù)研究所 工業(yè)酶國(guó)家工程實(shí)驗(yàn)室，天津 300308）

弗吉尼亞鼠刺葉片中稀少糖醇生物轉(zhuǎn)化及分離制備

竇德泉1，曾 艷2，朱玥明2，劉 燦2，孫媛霞2

（1.北京農(nóng)學(xué)院園林學(xué)院，北京 102206；2.中國(guó)科學(xué)院天津工業(yè)生物技術(shù)研究所 工業(yè)酶國(guó)家工程實(shí)驗(yàn)室，天津 300308）

為探討使用鼠刺植物制備稀少糖醇的可能性，以弗吉尼亞鼠刺葉片為原料，熱水提取其所含的稀少糖及糖醇，使用產(chǎn)酸克雷伯氏菌靜息細(xì)胞對(duì)提取物的單糖類物質(zhì)進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化，再利用絮凝、離子樹脂色譜分離以及乙醇結(jié)晶連用手段對(duì)轉(zhuǎn)化的提取物進(jìn)行純化，最后使用核磁共振譜對(duì)獲得的稀少糖醇進(jìn)行分析鑒定。液相色譜分析結(jié)果顯示弗吉尼亞鼠刺葉片提取物含有稀少D-阿洛酮糖和蒜糖醇，其質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為27.86%和7.86%；利用制備的產(chǎn)酸克雷伯氏菌的靜息細(xì)胞進(jìn)行60 h催化反應(yīng)后，提取物中86%的D-阿洛酮糖轉(zhuǎn)化為蒜糖醇，其余被細(xì)胞代謝消耗。多種分離純化手段的聯(lián)合使用，能有效去除雜質(zhì)和色素，獲得蒜糖醇純品。

弗吉尼亞鼠刺；稀少糖醇；提取純化；生物轉(zhuǎn)化

弗吉尼亞鼠刺原產(chǎn)于北美東部，其樹型美觀，長(zhǎng)勢(shì)旺盛，易于修剪，可用作庭院色塊、綠籬、造型群植或孤植等[1]。同時(shí)，弗吉尼亞鼠刺也是一種稀少糖醇含量較高的植物，日本學(xué)者研究表明其莖葉中的蒜糖醇含量不低于細(xì)胞干質(zhì)量的10%[2]。自浙江森禾種業(yè)股份有限公司2001年引入弗吉尼亞鼠刺，經(jīng)過(guò)多年的引種馴化和繁育，其已成為我國(guó)園林綠化上重要的觀賞樹種。然而，雖然目前國(guó)內(nèi)已有弗吉尼亞鼠刺引種馴化和扦插繁育及其適應(yīng)性的研究報(bào)道[3-4]，但對(duì)于其蒜糖醇含量鑒定、提取純化及其生物轉(zhuǎn)化卻仍是空白。

弗吉尼亞鼠刺葉片中含有蒜糖醇（又名阿洛糖醇），是重要的六碳稀少糖醇。研究表明蒜糖醇具有獨(dú)特的生理功能。給小鼠口服一定劑量蒜糖醇后，觀察到小鼠小腸蠕動(dòng)速度加快，含水量增加，出現(xiàn)腹瀉現(xiàn)象，說(shuō)明蒜糖醇具有潤(rùn)腸通便作用，可用于治療便秘[5]。馬耀輝等[6]發(fā)現(xiàn)蒜糖醇具有一定的降血糖功能，而且動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明其降血糖的過(guò)程緩慢平穩(wěn)，即使大量服用也不會(huì)發(fā)生低血糖危險(xiǎn)。在韓國(guó)專利KR100372187中，蒜糖醇是一種治療女性不孕癥、保護(hù)男性生殖腺的藥物填充劑[7]。而世界專利WO2008056453保護(hù)的一種抗齲齒藥劑的配方中，除了D-阿洛酮糖、L-阿洛酮糖等外，蒜糖醇也是有效成分[8]。

D-阿洛酮糖是弗吉尼亞鼠刺葉片中含有的另外一種稀少糖，D-阿洛酮糖是D-果糖C3位差向異構(gòu)體，但與D-果糖在生理活性方面明顯不同，當(dāng)其被吸收到體內(nèi)的時(shí)候，很少被代謝，因此其具有零卡路里的特性，同時(shí)還可以通過(guò)其抑制脂質(zhì)合成的酶活性而減輕腹部肥胖的作用[9-11]。稀少糖/糖醇除了具有獨(dú)特的生理學(xué)功能，根據(jù)Izumoring生產(chǎn)策略，在脫氫酶或產(chǎn)脫氫酶微生物催化下D-阿洛酮糖和蒜糖醇能相互轉(zhuǎn)化，進(jìn)一步以蒜糖醇為底物，轉(zhuǎn)化形成L-阿洛酮糖、L-果糖、L-葡萄糖等一系列L型的稀少糖（圖1）[2]，為六碳稀少糖/糖醇生物轉(zhuǎn)化研究提供一定的實(shí)驗(yàn)參考[12-13]。

圖1 以蒜糖醇為基礎(chǔ)的六碳稀少糖轉(zhuǎn)化Fig.1 The conversion of rare sugars based on allitol

本研究以弗吉尼亞鼠刺葉片為研究對(duì)象，借助干燥粉碎、熱水抽提方式提取弗吉尼亞鼠刺葉片中的稀少糖及糖醇，然后利用靜息細(xì)胞反應(yīng)把弗吉尼亞鼠刺葉片中D-阿洛酮糖轉(zhuǎn)化為蒜糖醇，進(jìn)一步利用絮凝、離子樹脂色譜分離以及乙醇重結(jié)晶等手段對(duì)提取物進(jìn)行純化，并通過(guò)核磁共振譜對(duì)獲得的蒜糖醇晶體進(jìn)行鑒定。該項(xiàng)研究將能促進(jìn)我國(guó)稀少糖/糖醇研究及功能食品新資源的開發(fā)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

弗吉尼亞鼠刺葉片采自北京農(nóng)學(xué)院園林學(xué)院的弗吉尼亞鼠刺培養(yǎng)基地；產(chǎn)酸克雷伯氏菌（Klebsiella oxytoca G4A4）為實(shí)驗(yàn)室篩選獲得；001×7 H型強(qiáng)酸性陽(yáng)離子樹脂、D3 01弱堿性N(CH3)2型陰離子樹脂、D201大孔強(qiáng)堿性苯乙烯系陰離子樹脂、AB-8聚苯乙烯非極性大孔吸附樹脂天津波鴻樹脂有限公司；D-阿洛酮糖、蒜糖醇、沒(méi)食子酸、槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品 美國(guó)Sigma-Aldrich公司；乙醇、丁醇、氯仿、FeCl3、Ca(OH)2等試劑均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

1200Series高效液相色譜系統(tǒng)（配有示差折光檢測(cè)器） 美國(guó)安捷倫公司；AVANCEⅢ 600MHz NMR核磁共振儀 德國(guó)Bruker公司；GF254薄層層析硅膠版天津思利達(dá)科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 弗吉尼亞鼠刺葉片稀少糖醇的提取

稱取弗吉尼亞鮮葉若干，于70 ℃烘箱加熱干燥至質(zhì)量恒定，粉碎過(guò)40 目篩。按1∶10（g/mL）的料液比加入二次水，于90 ℃條件下攪拌加熱1 h。冷卻，使用砂芯漏斗過(guò)濾，濾液濃縮冷凍干燥即為提取物。

1.3.2 薄層色譜分析提取物主要成分

將點(diǎn)好樣品的薄層層析板晾干后置于密閉的薄層層析缸中，以體積比V乙醇∶V丁醇∶V氯仿∶V水= 3∶6∶2∶1為展開劑，展開、取出、晾干，噴以體積分?jǐn)?shù)10%硫酸-乙醇溶液，105 ℃烘約15 min。

1.3.3 多酚總量檢測(cè)

參照謝倩等[14]方法，采用Folin-Ciocalteu試劑對(duì)提取物的多酚總量進(jìn)行測(cè)試。使用沒(méi)食子酸繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.012x-0.007。其中，沒(méi)食子酸質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，765 nm波長(zhǎng)處紫外吸光度為縱坐標(biāo)。

1.3.4 總黃酮含量檢測(cè)

參照Erdogan-Orhan等[15]方法，采用氯化鋁比色法測(cè)試提取物的總黃酮含量。使用槲皮素繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.005x-0.085。其中，沒(méi)食子酸質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，415 nm波長(zhǎng)處紫外吸光度為縱坐標(biāo)。

1.3.5 高效液相色譜分析提取物中的稀少糖成分[13]

色譜柱：Waters Sugar-Pak-Ⅰ（8 ?m，6.5 mm×300 mm）；柱溫：80 ℃；洗脫溶劑：超純水；流速：0.4 mL/min；進(jìn)樣量：20 ?L（20 mg/mL）；色譜采集時(shí)間：30 min。檢測(cè)信號(hào)為示差折光率。以稀少糖質(zhì)量濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)，示差折光信號(hào)相應(yīng)值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。其中，蒜糖醇的標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=17 395x-400.76，D-阿洛酮糖的標(biāo)準(zhǔn) 曲線為y=10 679x-802.38。

1.3.6 產(chǎn)酸克雷伯氏菌靜息細(xì)胞對(duì)鼠刺提取物中稀少糖的轉(zhuǎn)化

利用實(shí)驗(yàn)室前期工作中篩選得到的能夠?qū)-阿洛酮糖轉(zhuǎn)化成蒜糖醇的產(chǎn)酸克雷伯氏菌，制備其靜息細(xì)胞，具體方法參見(jiàn)文獻(xiàn)[13]。利用pH 8.0的Tris-HCl緩沖液調(diào)整鼠刺提取物中總糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%，加入產(chǎn)酸克雷伯氏菌靜息細(xì)胞并使其在反應(yīng)體系中的光密度（OD600nm）值為40左右，吹氮?dú)夂竺芊猓?7 ℃條件下靜置培養(yǎng)，進(jìn)行靜息細(xì)胞反應(yīng)。反應(yīng)0、3、6、12、24、36、48、60、72 h取樣，高效液相色譜檢測(cè)D-阿洛酮糖的轉(zhuǎn)化情況。

1.3.7 脫色樹脂的粗篩

根據(jù)使用說(shuō)明對(duì)樹脂進(jìn)行前期 處理后，采用靜態(tài)法粗篩樹脂。具體操作以D201大孔強(qiáng)堿性苯乙烯系陰離子樹脂靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)為例，稱取5 g弗吉尼亞鼠刺葉片提取物，溶于100 mL二次水中，12 000 r/min離心15 min，移取上層清液，加入50 g經(jīng)處理的D201樹脂，置于搖床，設(shè)置搖床溫度25 ℃、轉(zhuǎn)速150 r/min，測(cè)試靜態(tài)吸附0～6 h內(nèi)，鼠刺葉片提取物在420 nm波長(zhǎng)處紫外吸收，測(cè)定溶液顏色以及稀少糖含量的變化。并根據(jù)文獻(xiàn)[16]提供的色素吸附率計(jì)算方法以420 nm波長(zhǎng)處紫外吸收變化評(píng)估離子樹脂的脫色效果。

1.3.8 FeCl3-Ca(OH)2絮凝[17]

稱取5 g鼠刺葉片提取物，加入200 mL水，振蕩溶解后，12 000 r/min離心20 min，移取合并上層清液。調(diào)節(jié)pH值至9.0，加入1.0 g的Ca(OH)2和0.25 g FeCl3，在 65 ℃條件下50 r/min 攪拌10 min后，靜置1 h。離心，使用活性白土作為載體過(guò)濾，獲得上層清液。

1.3.9 離子交換樹脂動(dòng)態(tài)吸附和乙醇結(jié)晶

稱取5 g鼠刺提取物按照1.3.6節(jié)操作后，濃縮至50 mL，以0.6 mL/min流速轉(zhuǎn)移至001×7 H型強(qiáng)酸性陽(yáng)離子樹脂色譜柱（內(nèi)徑2 cm，柱高50 cm），以二次水為淋洗劑進(jìn)行洗脫。全程通過(guò)薄層分析監(jiān)控，以3 mL/管的速率收集含有稀少糖的洗脫液合并，轉(zhuǎn)移至D201強(qiáng)堿性陰離子樹脂色譜柱（內(nèi)徑2 cm，柱高50 cm）。繼續(xù)以二次水為淋洗劑，流速為0.6 mL/min進(jìn)行洗脫，濃縮含有稀少糖的洗脫液，加入大量無(wú)水乙醇，于-20 ℃冰箱靜置結(jié)晶。

1.3.1013CNMR的分析

用D2O溶解適量乙醇結(jié)晶獲得的白色固體，通過(guò)Bruker AVANCE Ⅲ 600MHz NMR核磁共振儀測(cè)定分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 弗吉尼亞鼠刺葉片提取物中各成分的分析

圖2 弗吉尼亞鼠刺葉片提取物的糖類物質(zhì)分析Fig.2 Analysis of sugar substances in the extract of Itea virginica leaves

根據(jù)熱風(fēng)干燥的失重測(cè)試，弗吉尼亞鼠刺新鮮葉片的水分含量為62.5%。所得葉片提取物經(jīng)冷凍干燥后，為棕黃色松散固體。在薄層色譜分析中，使用體積分?jǐn)?shù)10%的硫酸-乙醇作為顯色劑，發(fā)現(xiàn)提取物在層析板原點(diǎn)處有一無(wú)法移動(dòng)的棕色大斑點(diǎn)，推測(cè)其可能為酚類物質(zhì)。Folin-Ciocalteu和氯化鋁比色法測(cè)試結(jié)果顯示鼠刺提取物的總多酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)（28.7±1.5）%（按沒(méi)食子酸當(dāng)量折算）、總黃酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)（2.73±0.19）%（按槲皮素當(dāng)量折算）。酚類和黃酮類化合物的大量存在，在使用高效液相示差折光信號(hào)檢測(cè)鼠刺葉片提取物的單糖組成時(shí)，同樣被觀察到（圖2虛線標(biāo)記）。通過(guò)與稀少糖的標(biāo)準(zhǔn)品保留時(shí)間對(duì)照，發(fā)現(xiàn)弗吉尼亞鼠刺提取物主要含有稀少糖D-阿洛酮糖和蒜糖醇。標(biāo) 準(zhǔn)曲線計(jì)算，其D-阿洛酮糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為27.86%，蒜糖醇則為7.86%。

2.2 利用產(chǎn)酸克雷伯氏菌靜息細(xì)胞轉(zhuǎn)化鼠刺提取物中的D-阿洛酮糖生成蒜糖醇

圖3 利用產(chǎn)酸克雷伯氏菌靜息細(xì)胞轉(zhuǎn)化鼠刺提取物中稀少糖的反應(yīng)進(jìn)程Fig.3 Time courses of conversion of rare sugars in the extract of Itea virginica using the resting cells of Klebsiella oxytoca

圖4 鼠刺提取物經(jīng)靜息細(xì)胞轉(zhuǎn)化后產(chǎn)物的高效液相色譜分析Fig.4 HPLC analysis of Itea virginica extract before and after being transformed by resting cells

弗吉尼亞鼠刺提取物中D-阿洛酮糖含量較高，大約是蒜糖醇的4 倍，為了獲得更多的蒜糖醇，用實(shí)驗(yàn)室前期篩選得到的產(chǎn)酸克雷伯氏菌對(duì)鼠刺提取物中的單糖成分進(jìn)行轉(zhuǎn)化。前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，利用該產(chǎn)酸克雷伯氏菌的靜息細(xì)胞可以將D-阿洛酮糖轉(zhuǎn)化成蒜糖醇，底物質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5%時(shí)轉(zhuǎn)化率約為83%[13]；當(dāng)利用總糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5%的鼠刺提取物（D-阿洛酮糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.4%）作為底物時(shí)，通過(guò)60 h的靜息細(xì)胞反應(yīng)，產(chǎn)物中檢測(cè)不到D-阿洛酮糖，通過(guò)高效液相色譜數(shù)據(jù)計(jì)算發(fā)現(xiàn)，大約有86%的D-阿洛酮糖轉(zhuǎn)化為蒜糖醇，推測(cè)其余的D-阿洛酮糖被菌體消耗利用（圖3）。利用靜息細(xì)胞對(duì)鼠刺提取物進(jìn)行轉(zhuǎn)化，一方面在細(xì)菌細(xì)胞膜的屏障作用下，阻礙提取物中雜質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，避免了其對(duì)酶活的影響；另一方面，在轉(zhuǎn)化生成蒜糖醇的同時(shí)，剩余少量的D-阿洛酮糖被細(xì)胞代謝，起到了生物凈化的作用，方便了后續(xù)的純化。轉(zhuǎn)化后樣品溶液的高效液相色譜分析如圖4所示。

2.3 樹脂吸附與FeCl3-Ca(OH)2絮凝的脫色和純化效果

鼠刺提取物色素、糖苷等雜質(zhì)的去除，是影響稀少糖純化效果的關(guān)鍵因素。陰陽(yáng)離子樹脂和大孔吸附樹脂能有效吸附植物黃酮與色素，已成功應(yīng)用于核糖、葡萄糖、低聚木糖等糖工業(yè)生產(chǎn)的脫色純化上[18-21]。因此，本研究選擇了4 種代表性樹脂，通過(guò)靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)測(cè)試樹脂對(duì)鼠刺提取物脫色純化的效果。結(jié)果表明，在這4 種樹脂中，001×7 H型強(qiáng)酸性陽(yáng)離子樹脂不會(huì)造成提取物稀少糖的明顯損失，但脫色效果有限。D301弱堿性N(CH3)2型陰離子樹脂能吸附大部分色素，但對(duì)稀少糖特別是D-阿洛酮糖有吸收。AB-8大孔樹脂的色素吸附率強(qiáng)，但是對(duì)處于薄層分析板原點(diǎn)處的極性酚類雜質(zhì)作用效果小。在色素吸附方面，D201大孔強(qiáng)堿性苯乙烯系陰離子樹脂比D301型樹脂的效果好，同時(shí)其對(duì)極性酚類雜質(zhì)的去除能力則優(yōu)于AB-8大孔樹脂，圖5顯示了D201型樹脂的靜態(tài)吸附率隨時(shí)間的變化，這一結(jié)果與已有報(bào)道一致。呂蕾等[22]分析D201型樹脂色素吸附效果好是因?yàn)閺?qiáng)堿條件下色素中的酚羥基更容易解離成負(fù)離子從而被交換吸附，同時(shí)色素內(nèi)的疏水結(jié)構(gòu)基團(tuán)可以通過(guò)范德華力與樹脂苯環(huán)結(jié)合。而向大雄等[23]在使用樹脂分離純化葛根總黃酮時(shí)，發(fā)現(xiàn)在靜態(tài)吸附中AB-8型樹脂吸附的黃酮較易洗脫，而D201型樹脂的洗脫率相對(duì)較低。

圖5 D201樹脂對(duì)鼠刺葉片提取物色素靜態(tài)吸附率隨時(shí)間的變化Fig.5 Change in static adsorption rate of pigments in the extract of Itea virginica leaves onto D201 resin

進(jìn)行單糖生物轉(zhuǎn)化后的鼠刺葉片提取物經(jīng)樹脂脫色純化濃縮后，若直接加入乙醇進(jìn)行結(jié)晶，溶液會(huì)出現(xiàn)膠狀物，導(dǎo)致析出的固體量甚少。推測(cè)這是因?yàn)槠浜写罅康鞍踪|(zhì)、蠟質(zhì)、多糖、鞣質(zhì)等雜質(zhì)。它們不僅能污染樹脂降低柱效，還容易在加入乙醇時(shí)形成膠狀固體，造成鼠刺葉片提取物的脫色純化損失率高。而絮凝劑能提供大量的絡(luò)合離子，強(qiáng)烈吸附這些膠體微粒，通過(guò)黏附橋架交聯(lián)作用，促使其凝聚；中和膠體微粒及懸浮物表面電荷，降低膠團(tuán)電位，破壞膠團(tuán)穩(wěn)定性，使其互相碰撞，形成沉淀[24-25]。在采用FeCl3-Ca(OH)2進(jìn)行絮凝操作后，發(fā)現(xiàn)鼠刺提取物溶液的渾濁度減小，顏色變淺。

2.4 陽(yáng)陰離子樹脂動(dòng)態(tài)吸附與乙醇結(jié)晶進(jìn)一步純化

考慮FeCl3-Ca(OH)2絮凝操作可能帶入Fe3+、Ca2+陽(yáng)離子，先使用001×7 H型強(qiáng)酸性陽(yáng)離子樹脂脫除陽(yáng)離子，再采用D201強(qiáng)堿性陰離子樹脂進(jìn)行動(dòng)態(tài)吸附。結(jié)果表明在進(jìn)行相關(guān)操作后，濃縮洗脫液加入乙醇結(jié)晶時(shí)不會(huì)產(chǎn)生膠體。-20 ℃靜置后有淺黃白色固體析出。過(guò)濾，使用乙醇進(jìn)行重結(jié)晶能獲得白色松散固體，其高效液相色譜保留時(shí)間與蒜糖醇標(biāo)準(zhǔn)物吻合，其13CNMR譜分析進(jìn)一步證實(shí)這些白色松散固體為蒜糖醇（圖6）。

圖6 弗吉尼亞鼠刺提取物純化后析出晶體的表征Fig.6 Identification of the crystals from the extract of Itea virginica leaves after purification

3 結(jié)3 論

本研究使用熱水抽提從弗吉尼亞鼠刺葉片中提取稀少糖醇，發(fā)現(xiàn)該鼠刺含有D-阿洛酮糖和蒜糖醇兩種稀少糖/糖醇，質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為27.86%和7.86%。利用產(chǎn)酸克雷伯氏菌靜息細(xì)胞能將提取物中D-阿洛酮糖轉(zhuǎn)化為蒜糖醇，轉(zhuǎn)化率達(dá)到86%，其余D-阿洛酮糖被菌體消耗，起到了初步純化的目的。進(jìn)一步對(duì)產(chǎn)物的純化鑒定進(jìn)行研究表明：絮凝操作能有效降低提取液的濁度，并起到一定的脫色效果。而001×7 H型與D201型樹脂的串聯(lián)動(dòng)態(tài)吸附能滿足分離純化中盡量去除色素同時(shí)保留產(chǎn)物的效果。通過(guò)乙醇重結(jié)晶得到的白色固體也被高效液相和核磁共振譜鑒定為蒜糖醇。這一工藝顯示了如果大面積栽植弗吉尼亞鼠刺，有望實(shí)現(xiàn)從中使用工業(yè)化手段獲得稀少糖醇用于功能糖生產(chǎn)。

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Biotransformation and Purification of Allulose/Allitol from Itea virginica Leaves

DOU De-quan1, ZENG Yan2, ZHU Yue-ming2, LIU Can2, SUN Yuan-xia2
(1. College of Landscape Architecture, Beijing University of Agriculture, Beijing 102206, China; 2. National Engineering Laboratory for Industrial Enzymes, Tianjin Institute of Industrial Biotechnology, Chinese Academy of Sciences, Tianjin 300308, China)

In this study, we investigated the possibility of producing rare sugar alcohols from Itea virginica leaves. Hot water was used to extract rare sugars/sugar alcohols from the leaves of this plant. It was showed that the extract of leaves contained 27.86% D-psicose and 7.86% allitol. The rare sugars in the extract were transformed by the resting cells of Klebsiella oxytoca. After 60 h reaction, 86% of D-psicose was converted into allitol, while the rest was consumed by cellular metabolism. Flocculation, ion exchange resin chromatography and ethanol crystallization were used to analyze the conversion products. Finally, the purified rare sugar alcohol was identified as allitol by13CNMR.

Itea virginica; rare sugar alcohol; purification; biotransformation

Q946.3

A

1002-6630（2014）22-0028-05

10.7506/spkx1002-6630-201422006

2014-06-08

天津市科技支撐計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目（12ZCZDSY14900）；天津市企業(yè)博士后創(chuàng)新項(xiàng)目擇優(yōu)資助計(jì)劃項(xiàng)目

竇德泉（1962—），男，副教授，博士，研究方向?yàn)楸本┑貐^(qū)適宜樹種的選擇和屋頂綠化。E-mail：doudequan@bac.edu.cn