楊 瀅

(河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，河南 鄭州 450000)

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不同性狀款冬花的化學(xué)成分比較

楊 瀅

(河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，河南 鄭州 450000)

在中藥材的等級劃分過程中，性狀特征是重要的依據(jù)之一。傳統(tǒng)用藥經(jīng)驗認(rèn)為，紫色款冬花花蕾的藥用價值高于黃色款冬花的花蕾。通過對款冬花代謝活動的測定可以得出不同性狀款冬花所含的主要化學(xué)成分，以此來確定二者的臨床藥用價值。通過實驗方法測定不同性狀款冬花主要成分，并通過主要成分的不同來判定其藥用價值的差異。

款冬花；紫色；黃色；花蕾；化學(xué)成分

款冬花是菊科植物款冬的花蕾，也可以叫做冬花，是唯一一種菊科款冬屬植物，主要分布在我國的山西、河北、陜西以及內(nèi)蒙古等地區(qū)。據(jù)《本草綱目》記載，款冬花具有止咳化痰、潤肺下氣的功效，可以治療喉痹以及咳逆上氣善喘等疾病?，F(xiàn)代臨床多將款冬花用于喘咳痰多、久咳以及勞嗽咳血等疾病的治療中。為深入了解款冬花的藥用價值，筆者利用NMR法探析測定不同性狀款冬花的化學(xué)成分并進(jìn)行比較，并從化學(xué)角度對款冬花藥用等級劃分的科學(xué)性加以驗證。

1 實驗測定過程

1.1 材料準(zhǔn)備

本研究共采集四種不同性狀的款冬花，分別來自四個不同的產(chǎn)地。通過手工挑選的方式將四種不同性狀款冬花的花蕾摘下，按照紫色與黃色加以區(qū)分。

1.2 儀器和試劑

研究使用德國布魯克公司制造的質(zhì)子頻率為600.13 MHz的600 兆核磁儀；所需試劑為3-三甲基硅基、氘代氫氧化鈉、氘代丙酸鈉、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為99.8%的氘代氯仿、氘代甲醇以及NMR試劑重水。

1.3 樣品制備

準(zhǔn)確秤取200mg的款冬花樣品粉末置于10mL的離心管內(nèi)，甲醇與蒸餾水各加入1.5mL，然后加入3mL氯仿，將其混合均勻。執(zhí)行超聲提取操作25min，之后進(jìn)行離心，速度為3 500r/min，時間在25min左右。離心之后，提取液會分為上下兩層，然后將其轉(zhuǎn)移到25mL的圓底燒瓶內(nèi)進(jìn)行減壓，使其濃縮蒸干。之后將其溶解于NMR試劑中，下層的氯仿相使用800μL的CDCl3進(jìn)行溶解，上層的甲醇水相部分則使用400μL的氘代甲醇以及400μL的緩沖重水進(jìn)行溶解，溶解后再次進(jìn)行離心，10min以后取600μL上層清液放置于核磁管中待測。

1.4 測定過程

測定頻率為儀器的額定頻率600.13MHz，譜寬為12345.679Hz，傅里葉變換為0.188Hz，共掃描64次，脈沖的間隔時間為1s，溫度設(shè)定為25℃。采用手動方式進(jìn)行基線和相的調(diào)節(jié)以及峰的校正。在核磁測定甲醇水相提取物的過程中，采用noesyppr1d 序列來壓制水峰，并使用氘代甲醇來鎖場，使用TSP作為內(nèi)標(biāo)。核磁測定氯仿相提取物的過程中，采用的是zg30序列，使用氘代氯仿來鎖場，內(nèi)標(biāo)使用的是TMS。

2 實驗結(jié)果分析

2.1 實驗數(shù)據(jù)處理

采用MestReNova對得到的核磁圖譜進(jìn)行處理，在δ0.54～10.02分段內(nèi)進(jìn)行積分。而甲醇水相核磁圖譜中的δ4.70～5.02段屬于殘余水峰，δ3.30～3.38屬于殘余甲醇峰，因此不需要進(jìn)行積分；氯仿相所得到的核磁圖譜中，δ7.22～7.30屬于殘余氯仿峰，也不需要積分。將積分得到的結(jié)果進(jìn)行歸一化處理，然后利用SIMCA-P13.0軟件來分析款冬花的主要化學(xué)成分，并通過正交偏最小二乘法以及偏最小二乘法對成分進(jìn)行判別分析。

2.2 實驗數(shù)據(jù)分析

本次實驗結(jié)果得到了款冬花的40多種代謝產(chǎn)物，由于信息比較復(fù)雜，因此決定采用多元統(tǒng)計分析方法來比較不同性狀款冬花化學(xué)成分的不同，步驟如下：

2.2.1 款冬花主成分的分析過程 對款冬花紫色與黃色花蕾的甲醇水相提取物進(jìn)行PCA分析，由主成分23.0%的PC1和20.3%的PC2所構(gòu)建出的得分圖顯示，紫色和黃色款冬花花蕾呈現(xiàn)分開的趨勢，并且組間差異較大，表明兩組花蕾的代謝情況存在明顯差異，主成分差異很大。通過氯仿相散點圖我們可以知道，兩種不同性狀款冬花非極性成分的差異也比較大。在PCA分析方法下得到的數(shù)據(jù)為最原始狀態(tài)，可以判定樣品的組別關(guān)系和自然分布情況，但可能會存在組內(nèi)誤差，為進(jìn)一步確定兩種不同性狀款冬花化學(xué)成分的不同，本研究繼續(xù)采用OPLS-DA和PLS-DA這兩種方法來分析實驗數(shù)據(jù)。

2.2.2 OPLS-DA分析 OPLS-DA分析法可以確定出紫色與黃色花蕾化學(xué)成分的差異，因此在確定二者化學(xué)成分存在差異之后，就可以采用OPLS-DA分析法將二者間的差異成分確定出來。通過對兩種不同性狀款冬花花蕾甲醇水相以及氯仿相進(jìn)行OPLS-DA分析我們得到：紫色款冬花花蕾主要含有脯氨酸、馬來酸、磷脂酰膽堿、蘇氨酸、α-葡萄糖、醋酸、肌酐、3, 4-二咖啡?？崴?、延胡索酸、4, 5-二咖啡?？崴?、咖啡酸、蘆丁、3,5-二咖啡?？崴?、對羥基苯甲酸、山柰酚類似物、腺嘌呤、芥子酸、款冬酮、甲酸、腺嘌呤核苷、16α-diol以及bauer-7-ene-3β等成分，并且含量較高；而黃色花蕾的款冬花中則主要以琥珀酸、蔗糖、乙醇胺、檸檬酸以及脂肪酸類物質(zhì)為主要成分。經(jīng)t檢驗，兩種不同性狀款冬花中的脯氨酸、醋酸、咖啡酸、3, 4-二咖啡?？崴?、EMDNT、16α-diol以及bauer-7-ene-3β等成分存在明顯差異性；而磷脂酰膽堿、肌酐、蘇氨酸、馬來酸、4, 5-二咖啡?？崴?、蘆丁、3, 5-二咖啡?？崴?、腺嘌呤、山柰酚類似物、款冬酮以及腺嘌呤核苷等物質(zhì)的差異則更加明顯。

2.3 實驗結(jié)果談?wù)?/p>

核磁儀的測定以及OPLS-DA分析證實，紫色與黃色款冬花的主要化學(xué)成分差異較大，尤其是磷脂酰膽堿、肌酐、蘇氨酸、馬來酸、4, 5-二咖啡?？崴?、蘆丁、3, 5-二咖啡?？崴?、腺嘌呤、山柰酚類似物、款冬酮以及腺嘌呤核苷等物質(zhì)，差異非常明顯。由于蘆丁、3, 5-二咖啡?？崴嵋约翱疃瘸煞志哂休^好的抗病毒、抗氧化以及鎮(zhèn)痛作用，而咖啡酸及綠原酸類則具有較好的抗病毒、抗菌以及抗腫瘤等效用，款冬酮可以升壓和興奮作用，因此可以通過間接或者協(xié)同方式發(fā)揮止咳化痰作用。也由此可知，不同性狀的款冬花由于主要成分不同，因此藥用價值也存在一定差異。

3 結(jié)語

綜上所述，不同性狀款冬花的主要成分確實存在一定差異，也因此決定了二者在藥用價值上的差異。在臨床用藥中，需要根據(jù)款冬花成分以及主要成分的作用來確定其用途。

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(責(zé)任編輯：姜付平)

2014-03-12

楊瀅(1982-)，河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院藥師，研究方向為醫(yī)院藥學(xué)。

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1673-2197(2014)11-0015-01