王 正，沈 華，李 蕾，酈紅巖

（江蘇吉貝爾藥業(yè)有限公司，江蘇鎮(zhèn)江212009）

桑葉中蘆丁含量的動態(tài)變化研究

王 正，沈 華，李 蕾，酈紅巖

（江蘇吉貝爾藥業(yè)有限公司，江蘇鎮(zhèn)江212009）

目的研究不同時(shí)期桑葉中蘆丁的含量。方法Kromasil C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；流動相：甲醇－0.5%磷酸水溶液（梯度洗脫），檢測波長：358 nm；柱溫：30℃；結(jié)果蘆丁在0.126 2～2.02μg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，r＝0.999 9，平均回收率為97.88%，桑葉中蘆丁含量最高在霜降前后。結(jié)論初步表明了桑葉中蘆丁含量隨季節(jié)變化的規(guī)律。

桑葉；蘆??；高效液相色譜法；含量測定

桑葉為?？浦参锷orus alba L.的干燥葉，具有疏散風(fēng)熱、清肺潤燥、清肝明目的功能。桑葉是重要的傳統(tǒng)中藥，桑葉入藥首見于《神農(nóng)本草經(jīng)》，被列為中品。衛(wèi)生部2002年發(fā)布的《關(guān)于進(jìn)一步規(guī)范保健食品原料管理的通知》中將桑葉列入既是食品又是藥品的名單?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》中稱桑葉為“神仙葉”，性寒、味甘苦，具有疏散風(fēng)熱、清肺潤燥、清肝明目之功效，是常用中藥之一。明代李時(shí)珍所著的《本草綱目》中記載：“桑葉乃手足陽明之藥，汁煎代茗，能止消渴，明目長發(fā)?！吨袊幍洹?010年版中桑葉主治風(fēng)熱感冒，肺熱燥咳，頭暈頭痛，目赤昏花?，F(xiàn)代藥理研究表明桑葉具有降血糖、降血脂、抗氧化、抗腫瘤等多種活性［1，2］。對桑葉的藥理作用研究發(fā)現(xiàn)，桑葉黃酮類、生物堿類、多糖為降血糖有效組分［3～5］。本文建立了桑葉中蘆丁的含量分析方法，并對不同時(shí)期的桑葉蘆丁含量的動態(tài)變化進(jìn)行研究［6～9］，為桑葉資源的合理利用提供一定的依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 JASCO LC1500高效液相色譜系統(tǒng)（日本分光公司），PU－1580色譜泵；LG－1580－04四通道梯度單元；DG－1580－54四通道在線脫氣器；CO－1560柱溫箱；UV－1575紫外／可見光檢測器；Rheodyne Model 7125進(jìn)樣閥；高純水機(jī)RO－MB－10D（杭州永潔達(dá)膜分離設(shè)備廠）；N2000色譜工作站（浙江大學(xué)信息智能研究所）；Mettler AE240分析天平（上海梅特勒－托利多儀器有限公司）；BP211D電子天平（北京賽多利斯天平有限公司）；SK250LH超聲波清洗儀（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司）；HHS－1恒溫水浴鍋（上海浦東躍新科學(xué)儀器廠）。

1.2 試藥 蘆丁對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：100080－200707）；甲醇為色譜純，水為注射用水，其余試劑均為分析純桑葉采自鎮(zhèn)江市蠶研所，經(jīng)江蘇大學(xué)藥學(xué)院歐陽臻教授鑒定為?？浦参锷orus alba L.的葉，低溫干燥后備用。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Kromasil C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；流動相：甲醇（A）－0.5%磷酸水溶液（B）梯度洗脫（A∶B在0、5、10、15、18、40 min的比例為：30∶70、30∶70、35∶65、40∶60、50∶50、50∶50）；流速： 1.0 mL·min－1；檢測波長：358 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：20μL。理論板數(shù)按蘆丁峰計(jì)算應(yīng)不低于2 800，見圖1。

2.2 對照品溶液與供試品溶液的制備 精密稱取干燥至恒重的蘆丁對照品適量，加甲醇制成每mL含20μg的對照品溶液，即得。

取桑葉粉碎成細(xì)粉，稱取本品粉末約1.0 g，精密稱定，加甲醇50 mL，加熱回流30 min，濾過，藥渣再同法提取2次，合并濾液，減壓回收溶劑，殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至50 mL容量瓶，甲醇定容即得。

2.3 線性關(guān)系的考察 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：精密稱取蘆丁對照品0.050 50 g于50 mL量瓶中，加甲醇制成每1 mL含1.01 mg的對照品溶液，精密量取一定體積的該對照品溶液，用甲醇分別稀釋成6.31、12.62、25.25、50.5、101μg·mL－1，作為對照品溶液。精密吸取不同濃度的對照品溶液注入液相色譜儀，以進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)（X），以峰面積值為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)行線性回歸繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得回歸方程Y＝17 854X＋3 111.2，r＝0.999 9，結(jié)果表明蘆丁在0.126 2～2.02μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

圖1 HPLC色譜圖

2.4 進(jìn)樣精密度試驗(yàn) 精密吸取同一濃度對照品溶液，依法測定，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積，其精密度良好，蘆丁的RSD為1.63%。

2.5 供試液穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一樣品供試液，分別在0、2、4、8、12、24 h測定蘆丁峰面積，其RSD為1.78%，表明樣品在24 h內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品分別精密稱取6份，依法處理，測定，結(jié)果樣品中蘆丁的平均含量為1.710 2 mg·g－1，RSD為2.24%。

2.7 回收率測定 精密稱取已知含量的樣品6份約1.0 g，加入蘆丁對照品溶液，依法處理，得供試品溶液，依法測定，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

2.8 樣品測定 分別精密稱取不同批次的桑葉樣品，按供試品溶液制備方法制備，如法測定，結(jié)果見表2。

表2 桑葉中蘆丁含量動態(tài)變化

圖2 桑葉中蘆丁含量變化

3 總結(jié)

桑葉收載于《中國藥典》2010年版，其中對桑葉中蘆丁的含量測定方法是采用高效液相色譜法（梯度洗脫）進(jìn)行的，本文對不同時(shí)期的桑葉中蘆丁的含量進(jìn)行了含量測定。經(jīng)過研究，不同時(shí)期的桑葉中蘆丁的含量是呈動態(tài)分布的，在霜降節(jié)氣前后含量達(dá)到最高，經(jīng)霜后含量逐漸下降，這有助于更好控制桑葉的質(zhì)量，為桑葉的采摘提供依據(jù)。

本文研究了經(jīng)霜前后野桑和園桑中蘆丁的含量動態(tài)變化，結(jié)果表明經(jīng)霜前后的野桑和園桑中蘆丁的含量均有一定差異。園桑中蘆丁含量比同期的野桑高。兩者含量從9月份開始持續(xù)上升，10月23日霜降節(jié)氣前后含量達(dá)到最高，經(jīng)霜后含量逐漸下降。因此，桑葉經(jīng)霜藥用可能與黃酮類成分有關(guān)，其具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

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表2 4批樣品中丹酚酸B的含量測定結(jié)果

3.2 供試品溶液制備中對提取溶劑進(jìn)行了考察，分別采用甲醇和75%甲醇提取，結(jié)果兩者含量接近，但75%甲醇提取的雜質(zhì)稍多，因此確定采用甲醇提取。

3.3 本文建立的含量測定方法，具有靈敏度高，重現(xiàn)性好，專屬性強(qiáng)，無明顯干擾等優(yōu)點(diǎn)，是有效控制本品內(nèi)在質(zhì)量的較理想方法。

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Study on the dynam ic change of rutin content in mulberry leaves

WANG Zheng，SHEN Hua，LILei，LIHong-yan
（Jiangsu Jibrier Pharmaceutial Co.，Ltd.，Zhenjiang 212009，China）

ObjectiveTo study the content of rutin in different period ofmulberry leaf.Methods The Kromasil C18column（4.6 mm×250 mm，5μm）was used，andmobile phasewas composed ofmethanol－0.5%phosphoric acid solution（gradient elution），Detection wavelength was at358 nm，the column temperaturewas at30℃.ResultsThe linear range of rutin was0.126 2～2.02μg（r＝0.999 9）.The average recovery of rutin was97.88%，the highest contentof rutin inmulberry leaves before and after the frost.ConclusionPreliminary results suggested that rules of rutin inmulberry leaves seasonal changes.

Mulberry leaves；Rutin；HPLC；Determination

R284.2

A

2095－5375（2014）12－0693－003

王正，男，研究方向：藥品生產(chǎn)、生產(chǎn)工藝以及產(chǎn)品質(zhì)量，E－mail：haolewangzheng＠126.com