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        HPLC法測定勐海縣曬青毛茶兒茶素單體含量的研究

        2014-03-07 09:11:16梁名志夏麗飛楊盛美李曉霞李友勇冉隆珣
        湖南農業(yè)科學 2014年1期
        關鍵詞:勐??h毛茶兒茶素

        蔡 麗,梁名志,夏麗飛,楊盛美,李曉霞,陳 枚,李友勇,冉隆珣

        (1.云南省農業(yè)科學院茶葉研究所,云南 勐海 666201;2.云南省茶樹種質資源創(chuàng)新與配套栽培技術工程研究中心,云南 勐海 666201)

        勐??h地處高原山區(qū),海拔高低相差極大,地貌類型多樣,氣候類型復雜,氣溫垂直落差異常顯著,其自然條件非常適宜茶樹生長,且大部分茶園為天然生態(tài)茶園。不同地區(qū)所產的曬青毛茶在品質上差異較大,而曬青毛茶是普洱茶的主要原料,它的好壞決定了普洱茶品質的優(yōu)劣[1-4]。兒茶素是茶葉中最主要的生物活性成分之一,占茶葉干重的12%~24%;主要包括沒食子酸(GA)、表沒食子兒茶素(EGC)、右旋兒茶素(C)、表兒茶素(EC)、表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)、表兒茶素沒食子酸酯(ECG)等成分[5-6]。

        試驗采用高效液相色譜法對勐??h普洱茶主要產區(qū)的曬青毛茶兒茶素單體進行測定,以期揭示不同地區(qū)所產曬青毛茶中兒茶素單體成分及含量的差異,為構建茶葉指紋圖譜提供依據。

        1 材料與方法

        1.1 試驗材料

        供試茶葉樣品為2010年春季在勐??h10個主要產茶鄉(xiāng)鎮(zhèn)按一芽一葉標準采摘15個古樹茶樣和10個生態(tài)茶樣;試驗主要試劑有兒茶素類化合物標樣(美國SIGM A公司)、甲醇(色譜純)、乙腈(色譜純)、乙酸(色譜純)等;試驗主要儀器有超純水儀(Millipore公司)、分析天平(Denver公司)、水浴鍋(北京精瑞科技有限公司)、離心機(Beckman公司)、高效液相色譜儀(Waters公司)。

        1.2 試驗方法

        1.2.1 曬青毛茶樣品的前處理 高溫殺青曬干,每個茶樣得干茶樣約300 g備用。工藝流程為鮮葉→攤青→殺青→曬干→磨樣→分析。準確稱取茶粉1.000 0 g,加入80%(V/V,下同)甲醇100 m L,于30℃水浴中超聲提取20 m in,經濾紙過濾,洗滌濾渣3次后合并濾液,定容至200 m L,用0.45 μm濾膜過濾后備用[7]。茶樣由云南省農業(yè)科學院茶葉研究所茶葉加工與檢測中心分析檢測。

        1.2.2 混合標樣的配制 標準儲備液:分別稱取6種兒茶素類化合物的固體標樣各10 mg,用50%的甲醇水溶液溶解并定容至10 m L,則6種兒茶素類化合物的標準儲備液濃度均為1 mg/m L。

        1.2.3 色譜檢測條件 采用GB/T8313-2008中的方法進行檢測。流動相:A為甲醇,B為乙腈;流動相的梯度為從10%的乙腈到 60%的乙腈,流速1 m L/m in,在36 m in內完成;色譜柱為waters-C18(5 μm,4.6 mm×250 mm);檢測波長280 nm。每次檢測完成后,系統(tǒng)平衡15 m in后重復3次進樣。所得數據用Empower軟件處理。

        2 結果與分析

        2.1 標準曲線

        從圖1中看出,在試驗設置的色譜條件下,各種單體物質的分離度較高,峰形較好。這說明該色譜條件符合試驗要求。其中,Caf為咖啡堿,雖然其不是兒茶素類,但卻是茶葉的主要內含物質;EGC的保留時間為11.4 m in,圖1中未有明顯峰形,是因為其在茶葉中含量較少,為了突出其他幾種兒茶素單體的峰形,特用Empower軟件對標樣色譜圖進行了處理。

        2.2 勐??h曬青毛茶兒茶素單體HPLC指紋圖譜

        由表1可知,各鄉(xiāng)鎮(zhèn)曬青毛茶的兒茶素單體成分的含量差異顯著。其中,布朗山鄉(xiāng)老班章古樹茶的沒食子酸(GA)和右旋兒茶素(C)的含量遠遠高于其他鄉(xiāng)鎮(zhèn)茶葉的含量,而表沒食子兒茶素(EGC)和表兒茶素(EC)的含量卻稍低于其他鄉(xiāng)鎮(zhèn)茶葉的含量;而EGC、EC、EGCE、ECG含量最高的分別是西定鄉(xiāng)曼佤村委會賀松村古樹茶、格朗和鄉(xiāng)蘇湖村生態(tài)茶、勐往鄉(xiāng)曼糯大寨古樹茶、格朗和鄉(xiāng)帕沙村古樹茶。

        由表2可知,各茶葉樣品的出峰時間及出峰順序均較穩(wěn)定,各種兒茶素單體在勐??h產茶區(qū)的古樹茶和生態(tài)茶中的含量差異顯著。其中,EGC、C和EC的總變異數超過30%,這在同地區(qū)茶葉化學成分檢測上是比較罕見的現象,值得進一步研究。

        表1 茶葉樣品中6種兒茶素類化合物的含量 (%)Tab le 1 Content of six kinds of catechin compounds in tea sam ple

        3 討 論

        試驗結果表明:勐??h各鄉(xiāng)鎮(zhèn)曬青毛茶中兒茶素單體成分的含量差異顯著。這從理論上解釋了勐海各茶區(qū)茶葉感官差異顯著的主要原因,也為勐??h曬青毛茶的指紋圖譜建立提供了理論依據。在HPLC檢測過程中,兒茶素單體成分均有穩(wěn)定的出峰時間和峰面積,因此兒茶素單體成分及含量可作為勐??h曬青毛茶HPLC指紋圖譜的特征峰,用于鑒定茶葉的來源和品質,有望成為勐海曬青毛茶的化學條碼,這在茶葉的質量監(jiān)督和生化成分檢測中具有重要意義。根據25種曬青毛茶的兒茶素單體成分含量不同,可制定全縣各鄉(xiāng)鎮(zhèn)茶葉開發(fā)計劃,有針對性地開發(fā)利用特有的茶樹資源,為實現勐??h“中國茶葉第一縣”的目標提供指導。

        表2 古樹茶與生態(tài)茶兒茶素單體成分統(tǒng)計分析Table 2 The statistical analysis of catechin monom er com positions in old-p lan and ecological tea (%)

        茶葉中各種成分含量是相輔相成、互相影響的,對茶葉品質起著決定性的。HPLC指紋圖譜的識別技術與模型構建是茶葉鑒定的關鍵步驟,也是目前學者關注較多的研究領域[8]。由于茶葉成分絕大多數可在液相色譜上進行檢測分析,且具備分離效能好、選擇性強、檢測靈敏度高、分析速度快、應用范圍廣以及可用作實驗室小量制備等優(yōu)點,使得液相色譜法成為茶葉指紋圖譜技術的首選方法[9-12]。目前,茶葉的指紋圖譜研究的普及力度遠不及中藥材的指紋圖譜研究,但是隨著茶葉消費水平以及人們對自身健康關注度的不斷提高,茶葉品質評價體系有待于進一步科學化、合理化。在這一過程中,指紋圖譜研究必然將發(fā)揮其重要作用。

        [1] 寧井銘,張正竹,谷勛剛,等. 云南曬青毛茶HPLC指紋圖譜的研究[J]. 食品與發(fā)酵工業(yè),2009,35(9):36-40.

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