Cheraga Nihad，沈 雁，涂家生

（中國(guó)藥科大學(xué)藥劑學(xué)教研室，江蘇南京210009）

·實(shí)驗(yàn)研究·

Taguchi正交法優(yōu)化奧沙利鉑長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的制備

Cheraga Nihad，沈 雁，涂家生

（中國(guó)藥科大學(xué)藥劑學(xué)教研室，江蘇南京210009）

目的通過(guò)優(yōu)化奧沙利鉑（L－OHP）長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的制備工藝，以提高其包封率（entrapment efficiency，EE%）并達(dá)到緩釋效果。方法采用Taguchi正交法L9（34）（TOA），以包封率作為考察指標(biāo)并采用超濾法檢測(cè)包封率?？疾炝薒－OHP脂質(zhì)體的粒徑、zeta電位、形態(tài)以及體外釋放行為。結(jié)果藥物與脂質(zhì)間的比例（W／W），膽固醇與磷脂酰膽堿的比值（M／M）和超聲時(shí)間是影響最大的三個(gè)因素（P＜0.05）。此外，優(yōu)化后的奧沙利鉑脂質(zhì)體經(jīng)mPEG修飾后與未修飾的奧沙利鉑脂質(zhì)體相比較，具有更好的物理化學(xué)特性，其粒徑為（204±1.1）nm，包封率高達(dá)25.40%±2.5%。修飾后的脂質(zhì)體在透射電子顯微鏡下呈現(xiàn)球形結(jié)構(gòu)，具有較大的內(nèi)部空間，脂質(zhì)體表面可見白色mPEG層狀結(jié)構(gòu)。經(jīng)mPEG修飾的奧沙利鉑脂質(zhì)體相比于未修飾的脂質(zhì)體，具有更低的體外釋放速率，具有一定緩釋能力。修飾與未修飾的脂質(zhì)體以及奧沙利鉑溶液均符合一級(jí)釋放模型，擬合系數(shù)為0.990 2。結(jié)論經(jīng)Taguchi正交法優(yōu)化后的奧沙利鉑長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體可作為一種新型的腫瘤靶向藥物傳遞系統(tǒng)。

Taguchi正交法；mPEG修飾；脂質(zhì)體；奧沙利鉑；藥物傳遞系統(tǒng)

奧沙利鉑（L－OHP）屬于第三代鉑類抗腫瘤化 合物。現(xiàn)已批準(zhǔn)奧沙利鉑與5－氟尿嘧啶（5－FU）／亞葉酸鈣（FOLFOX）［1，2］聯(lián)合用藥，是臨床治療轉(zhuǎn)移性或晚期結(jié)直腸癌的一線和二線藥物。奧沙利鉑與順鉑類似，通過(guò)與DNA形成DNA加合物從而抑制DNA的合成。此外，與順鉑不同，它也能抑制RNA的合成［3］。然而，單獨(dú)用藥時(shí)，其臨床療效相對(duì)較低，是由于其藥代動(dòng)力學(xué)特性導(dǎo)致，如高度不可逆地結(jié)合到血漿蛋白和組織蛋白以及紅細(xì)胞［4］。此外，它具有劑量限制性副作用，如外周感覺神經(jīng)病變和血小板減少癥［5］。因此，為克服以上缺點(diǎn)，可以利用載體將奧沙利鉑包裹，制備成奧沙利鉑脂質(zhì)體以減少臨床使用的副作用。

脂質(zhì)體是早期納米級(jí)別的藥物遞送系統(tǒng)之一，通過(guò)改變小分子抗癌藥物的組織分布，從而增加其在實(shí)體瘤部位的蓄積，提高腫瘤靶向性［6］。脂質(zhì)體已被多次證明能夠提高各種藥物的治療指數(shù)。此外，將聚乙二醇（PEG）－衍生化磷脂接入脂質(zhì)體膜，可以通過(guò)防止脂質(zhì)體與生物體內(nèi)環(huán)境的相互作用而實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)循環(huán)效應(yīng)［7］，并增強(qiáng)脂質(zhì)體到實(shí)體瘤的外滲作用，這一現(xiàn)象稱為EPR效應(yīng)（Enhanced Permeability and Retention Effect）。對(duì)于大分子和脂質(zhì)類分子，包括脂質(zhì)體［8］而言，都具有上述特點(diǎn)。本研究的目的是使用Taguchi正交法（TOA）優(yōu)化得到mPEG－修飾的奧沙利鉑脂質(zhì)體的最佳處方工藝，同時(shí)還研究了不同因素對(duì)奧沙利鉑脂質(zhì)體包封率的影響。此外，考察了經(jīng)過(guò)mPEG－修飾的奧沙利鉑脂質(zhì)體和未修飾脂質(zhì)體的體外釋放行為的差異。

1 材料

奧沙利鉑（購(gòu)自上海浩然生物技術(shù)有限公司）；磷脂酰膽堿（PC），膽固醇（Chol），1，2－二硬脂酰－sn－甘油－3磷酸乙醇胺－N－［順丁烯二酰亞胺（聚乙二醇）－2000］（DSPE－PEG2000）（購(gòu)自AVT制藥有限公司，中國(guó)上海）；TritonX－100（阿拉丁，中國(guó)上海）；其他試劑均為分析純。

2 方法

2.1 奧沙利鉑脂質(zhì)體的制備 Szoka等［9］采用逆向蒸發(fā)法（REV）制備得到奧沙利鉑脂質(zhì)體（PC／CHOL）和經(jīng)mPEG2000－DSPE修飾的奧沙利鉑脂質(zhì)體，即按照一定的摩爾比將脂質(zhì)溶解于氯仿／乙醚的混合液中，然后向該脂質(zhì)溶液中逐滴加入奧沙利鉑的9%蔗糖溶液（W／V）10 mL，使其形成W／O乳液。水相和有機(jī)相的體積比為1∶3，采用探頭式超聲儀（南京先歐儀器制造有限公司，20100071）將乳液超聲一定時(shí)間后，于40℃減壓旋蒸1 h，即得奧沙利鉑脂質(zhì)體。將制得的產(chǎn)物分別通過(guò)0.8、0.45和 0.22μm聚碳酸酯濾膜，得到大小均勻的脂質(zhì)體。

2.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 使用Taguchi正交表L9（34）（TOA），對(duì)所選因素進(jìn)行篩選，得到制備高包封率L－OHP脂質(zhì)體的最佳處方工藝。藥物與脂質(zhì)的比例（W／W），膽固醇和磷脂酰膽堿的比例（M／M），氯仿與乙醚的比例（V／V），以及超聲時(shí)間，4者作為影響OHP包封率最重要的因素加以考察。這4個(gè)影響因素分別在3個(gè)水平下進(jìn)行研究，如表1所示。通過(guò)L9（34）設(shè)計(jì)的9組實(shí)驗(yàn)中每組試驗(yàn)重復(fù)3次（表2）。使用Design Expert Version 8.0.6軟件設(shè)計(jì)試驗(yàn)并評(píng)估設(shè)計(jì)的試驗(yàn)。采用方差分析（ANOVA）檢測(cè)試驗(yàn)?zāi)Ｐ褪欠窬哂酗@著性差異。

表1 因素水平L9（34）TOA試驗(yàn)設(shè)計(jì)

表2 L9（34）TOA試驗(yàn)結(jié)果

2.3 粒徑和Zeta電位 使用Zeta Plus粒子分析儀（Brookhaven Instruments Corporation，美國(guó)），利用動(dòng)態(tài)光散射測(cè)定粒徑和多分散系數(shù)（PDI）（25℃）。Zeta電位使用Zetasizer（Brookhaven，美國(guó)）測(cè)定。每個(gè)結(jié)果重復(fù)測(cè)定3次。

2.4 奧沙利鉑HPLC分析 使用HPLC法測(cè)定奧沙利鉑的濃度。試驗(yàn)采用Dionex 3000 Ultimate（泵：LPG－3400SD，檢測(cè)器：VWD－3100，工作站：Chromeleon 6.8 SR11 Build 3161）。流動(dòng)相為水－甲醇（95∶5，V／V），流速為1 mL·min－1。色譜柱為Inertsil ODSC18（4.6 mm×250 mm，5μm），檢測(cè)波長(zhǎng)為250 nm，柱溫30℃，進(jìn)樣量20μL，檢測(cè)時(shí)間15 min。奧沙利鉑的標(biāo)準(zhǔn)曲線在5～100μg·m－1范圍內(nèi)呈線性，r＝0.999 7。

2.5 包封率 包封率利用改進(jìn)的超濾法進(jìn)行測(cè)定［10］。使用9%蔗糖溶液（W／V）將脂質(zhì)體稀釋十倍，取200μL奧沙利鉑脂質(zhì)體混懸液，加入超濾管（截留分子量10 000）。在4℃下，以13 000 rpm離心20 min，將游離奧沙利鉑從脂質(zhì)體中分離出。收集濾液，利用上述的HPLC法檢測(cè)游離藥物的濃度。另取奧沙利鉑脂質(zhì)體混懸液，加入10%Triton X－100破壞脂質(zhì)體，釋放包封的奧沙利鉑，用HPLC法測(cè)定奧沙利鉑的總濃度。并對(duì)該方法進(jìn)行回收率實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。將3種不同濃度的游離奧沙利鉑溶液分別與空白脂質(zhì)體混合。將混合物振搖10 min后，超濾。收集超濾液，測(cè)得奧沙利鉑的濃度?；厥章式Y(jié)果應(yīng)在90%～110%的標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)。

Cout表示脂質(zhì)體混懸液中未包封的藥物濃度；Ctot表示脂質(zhì)體混懸液中藥物的總濃度。所有試驗(yàn)重復(fù)測(cè)3次。

2.6 體外釋放 使用透析法在9%蔗糖溶液中測(cè)奧沙利鉑脂質(zhì)體的體外釋放曲線。將1 mL脂質(zhì)體置于透析袋內(nèi)（截留分子量14 000），將透析袋密封后，完全浸入50 mL釋放介質(zhì)中，于37℃水浴中振搖（轉(zhuǎn)速100 rpm）。于預(yù)設(shè)時(shí)間點(diǎn)15 min、30 min、45 min、1 h、1.5 h、2 h、2.5 h、3 h、4 h、5 h、6 h、8 h，分別從介質(zhì)中取出1 mL溶液，并補(bǔ)充1 mL釋放介質(zhì)。采用HPLC法測(cè)定并計(jì)算脂質(zhì)體中奧沙利鉑的釋放量。以L－OHP在9%的蔗糖溶液中的釋放作為對(duì)照，計(jì)算得到累積釋放度。

2.7 透射電子顯微鏡（TEM） 修飾和未修飾DSPE－PEG2000的脂質(zhì)體通過(guò)透射電鏡（TEM）（日立7650型電子顯微鏡，日本東京）掃描（加速電壓為80 kV）。脂質(zhì)體用蒸餾水稀釋，滴至銅網(wǎng)表面，用濾紙除去過(guò)量的樣品后，自然揮干。以2%磷鎢酸水溶液進(jìn)行負(fù)染，室溫下放置，待干燥后進(jìn)行觀察。

3 結(jié)果

3.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)和分析 Taguchi正交法最大的特點(diǎn)在于，可以利用最少的試驗(yàn)達(dá)到預(yù)設(shè)的優(yōu)化目的［11］。在本研究中，4因素3水平的研究正是采用了該方法。對(duì)方差R進(jìn)行分析，以選擇各因素水平的最佳組合。計(jì)算得到的每一水平的平均值Kn見表2。對(duì)包封率的不同影響因素中，按照影響力大小排列，分別是：藥物與脂質(zhì)的比例（W／W），膽固醇和磷脂酰膽堿的比例（M／M），超聲時(shí)間以及氯仿／乙醚的體積比。使用Design Expert version 8.0.6對(duì)TOA進(jìn)行方差分析。如表3所示，方差分析的結(jié)果表明，該模型有顯著性差異（P＜0.05），其中藥物與脂質(zhì)的比例（A），膽固醇和磷脂酰膽堿的比例（B）和超聲時(shí)間（D）具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的顯著差異（P＜0.05）。

表3 TOA的方差分析

3.2 不同因素對(duì)于包封率和優(yōu)化配方的影響 如圖1所示，各因素各水平對(duì)于包封率的影響。膽固醇和磷脂酰膽堿的比例（B）增加，包封率增加，在1水平（1∶2）的時(shí)候達(dá)到最大值。此外，減少奧沙利鉑的用量，包封率降低，1水平達(dá)到最大值。超聲時(shí)間同樣影響藥物包封，1水平（5 min）為最優(yōu)結(jié)果。分析方差結(jié)果可知，溶劑比的影響較小（P＞0.05）。4個(gè)因素的優(yōu)化結(jié)果為A1B1C3D1。因此，優(yōu)化的制備條件為：脂質(zhì)和藥物的重量比1∶20，膽固醇和磷脂酰膽堿的摩爾比為1∶2，超聲時(shí)間5 min，氯仿／乙醚體積比為1∶3。優(yōu)化后的L－OHP脂質(zhì)體物理化學(xué)性質(zhì)見表4。

表4 優(yōu)化L－OHP脂質(zhì)體理化性質(zhì)

3.3 L－OHP脂質(zhì)體的理化特性 L－OHP的包封率為25.4%±1.5%，PEG修飾的脂質(zhì)體包封率為23.46%±1.7%。然而，與未修飾的脂質(zhì)體相比，mPEG修飾的脂質(zhì)體PDI更低，二者有顯著性差異（P＜0.05）。實(shí)驗(yàn)表明PEG修飾后的脂質(zhì)體具有較小的粒徑分布，脂質(zhì)體的粒徑更加均一。PEG修飾的脂質(zhì)體Zeta電位小于未修飾脂質(zhì)體，說(shuō)明DSPE－PEG2000一定程度上增大了膜的穩(wěn)定性。利用TEM觀察不同脂質(zhì)體的形態(tài)。如圖2所示，L－OHP脂質(zhì)體具有球形結(jié)構(gòu)，內(nèi)部空間更大。而經(jīng)過(guò)DSPE－PEG2000修飾的脂質(zhì)體，可以觀察到在脂質(zhì)體外層有白色mPEG修飾層，證明脂質(zhì)體修飾成功。

圖1 奧沙利鉑脂質(zhì)體影響因素實(shí)驗(yàn)

圖2 優(yōu)化的未修飾L－OHP脂質(zhì)體TEM圖譜（a）；優(yōu)化的mPEG修飾L－OHP脂質(zhì)體TEM圖譜（b）；未修飾L－OHP脂質(zhì)體與mPEG修飾的L－OHP脂質(zhì)體在9%蔗糖溶液中的體外釋放曲線（c）

3.4 體外釋放 采用優(yōu)化工藝制備得到的奧沙利鉑脂質(zhì)體在9%蔗糖溶液中的體外釋放曲線見圖2c。在9%葡萄糖溶液中，L－OHP溶液在2 h內(nèi)釋放可達(dá)94%，未經(jīng)修飾的脂質(zhì)體釋放達(dá)到80%，而經(jīng)過(guò)PEG修飾的脂質(zhì)體在2 h內(nèi)釋放約為62%。在經(jīng)過(guò)前2 h的突釋過(guò)程后，L－OHP趨于穩(wěn)定釋放。分別將釋放結(jié)果帶入零級(jí)模型，一級(jí)模型和Huguchi模型進(jìn)行擬合。比較擬合的相關(guān)系數(shù)，其中一級(jí)釋放模型（r＝0.990 2）為藥物從脂質(zhì)體中釋放的最佳釋放模型。

4 討論

奧沙利鉑（L－OHP）是第三代鉑類似物，與前幾代相比，如順鉑和卡鉑，奧沙利鉑具有更好的活性和安全性。然而，其臨床療效在體內(nèi)受到了劑量依賴神經(jīng)毒性和對(duì)血紅蛋白的高分區(qū)的限制［4］。因此，需要利用藥物傳遞系統(tǒng)以減少其毒副作用，提高治療指數(shù)。理想的奧沙利鉑藥物傳遞系統(tǒng)，應(yīng)具有一定選擇性的傳遞，以及通過(guò)提高藥物在腫瘤組織的滲透和滯留效應(yīng)（EPR效應(yīng)）從而實(shí)現(xiàn)藥物在腫瘤組織的蓄積和被動(dòng)靶向［12］。然而，奧沙利鉑良好的水溶性和低親脂性使得藥物難以被載入脂質(zhì)體內(nèi)［13］。而且脂質(zhì)體包封率和粒徑分布的均一性對(duì)制備方法具有較高依賴［14］。在本研究中，基于大多數(shù)文獻(xiàn)有關(guān)鉑及其衍生物相關(guān)載體的報(bào)道，選擇使用REV方法制備奧沙利鉑脂質(zhì)體并實(shí)現(xiàn)被動(dòng)靶向。之所以選擇這種方法，是由于其對(duì)水溶性藥物的包封率較高，可達(dá)50%［9］。針對(duì)血液循環(huán)中的穩(wěn)定性問題，可通過(guò)將穩(wěn)定劑接入脂質(zhì)雙分子層加以克服。為了減小網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)（RES）對(duì)脂質(zhì)體的吞噬，引入了PEG化脂質(zhì)（DSPE－PEG2000），實(shí)現(xiàn)在血液中的長(zhǎng)循環(huán)效應(yīng)。據(jù)報(bào)道，REV方法的包封率受多種因素影響，包括PC與膽固醇的比例，藥物與脂質(zhì)的比例，油相與水相比例，超聲時(shí)間等［15］。在這項(xiàng)研究中，通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)確定了最佳制備工藝。優(yōu)化后，mPEG修飾的脂質(zhì)體平均粒徑減小到約200 nm，包封率提高至25%。此結(jié)果與之前報(bào)道的，使用REV方法得到奧沙利鉑脂質(zhì)體的結(jié)果基本一致。報(bào)道同時(shí)指出，使用磷脂，可提高脂質(zhì)體穩(wěn)定性。Abu－Lila等［16］使用半合成脂質(zhì)體（HSPC）制備了奧沙利鉑脂質(zhì)體，粒徑為200 nm，包封率為20%，他們使用的半合成脂質(zhì)體比天然脂質(zhì)體更穩(wěn)定。此外，可以通過(guò)不同的方法除去游離的奧沙利鉑，如：5%葡萄糖透析法［16］，超速離心或超濾法［14］等。本文中，使用超濾法分離游離藥物，藥物加入到空白脂質(zhì)體后，在超濾液可以回收99.17%的游離藥物。TOA（表1）結(jié)果顯示，藥物與脂質(zhì)的比例是影響包封率（K1平均值）的最重要因素。如圖1所示，增加藥物與脂質(zhì)的比例可以增加包封率。這可能是由于藥物濃度在水相中增加，意味著藥物分子被載入脂質(zhì)體的幾率增大，從而達(dá)到更高的包封率。然而，增加不成比例的藥量，當(dāng)該比率升高到1∶10，包封率略有下降（數(shù)據(jù)未顯示）。膽固醇的作用同樣重要，膽固醇量的增加，包封率也會(huì)隨之增加。加入膽固醇可以增加脂質(zhì)體雙分子層的剛性，因此，可以減少藥物的泄漏［17］。超聲時(shí)間也可以影響包封率。據(jù)報(bào)道，超聲時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可誘導(dǎo)藥物從脂質(zhì)體中泄漏［18］。本研究中，5 min的超聲時(shí)間即可達(dá)到最高包封率。但即使延長(zhǎng)超聲時(shí)間，若膽固醇的量控制得當(dāng)，同樣可以減少藥物滲漏。此外，奧沙利鉑從PEG修飾的脂質(zhì)體中釋放速度慢于從未修飾脂質(zhì)體中的釋放。這一現(xiàn)象可能是由于PC的低相轉(zhuǎn)變溫度（約20℃）導(dǎo)致了脂質(zhì)體膜的高流動(dòng)性，從而誘發(fā)奧沙利鉑從未修飾脂質(zhì)體中的快速釋放。DSPE－PEG2000修飾的脂質(zhì)體膜可使藥物在生理?xiàng)l件下具有更好的穩(wěn)定性和體內(nèi)釋放行為。此外，PEG2000修飾的脂質(zhì)體具有更小的粒徑，可以降低脂質(zhì)體粒子間的聚集。TEM表征結(jié)果表明，脂質(zhì)體具有完整的球形形態(tài)，可以較好的包載藥物與脂質(zhì)體內(nèi)部。

5 結(jié)論

在本研究中，采用逆向蒸發(fā)法制得了未修飾的長(zhǎng)循環(huán)奧沙利鉑脂質(zhì)體。采用Taguchi正交設(shè)計(jì)法深入研究了影響奧沙利鉑脂質(zhì)體包封率的多種因素，并確定了最優(yōu)處方工藝。優(yōu)化工藝制備的經(jīng)mPEG2000修飾的奧沙利鉑脂質(zhì)體在生理?xiàng)l件下更加穩(wěn)定，與未修飾脂質(zhì)體相比，具有更好的穩(wěn)定性且具有緩釋特性。因此，經(jīng)過(guò)優(yōu)化的PEG修飾的長(zhǎng)循環(huán)奧沙利鉑脂質(zhì)體，是一種較好的抗腫瘤藥物遞送系統(tǒng)。

［1］Des Guetz G，Lecaille C，Mariani P，et al.Prognostic impact of microsatellite instability in colorectal cancer patients treated with adjuvant FOLFOX［J］.Anticancer Res，2010，30（10）：4297－4301.

［2］Tampellini M.Pharmacoeconomic aspects of FOLFIRI or FOLFOX regimens administered with a fully ambulatory pump compared to the day hospital setting［J］.Tumori，2010，96（3）：438－442.

［3］Tashir T，Kawada Y，SakuraI Y，et al.Antitumor activity of a new platinum complex，oxalato（trans－l－1，2－diaminocyclohexane）platinum（II）：new experimental data［J］.Biomed Pharmacother，1989，43（4）：251－260.

［4］Pendyala L，Creaven PJ.In vitro cytotoxicity，protein binding，red blood cell partitioning，and biotransformation of oxaliplatin［J］.Cancer Res，1993，53（24）：5970－5976.

［5］Extra JM，Espie M，Calvo F，et al.Phase I study of oxaliplatin in patients with advanced cancer［J］.Cancer Chemother Pharmacol，1990，25（4）：299－303.

［6］Hussain S，Pluckthun A，Allen TM，et al.Antitumor activity of an epithelial cell adhesion molecule targeted nanovesicular drug delivery system［J］.Mol Cancer Ther，2007，6（11）：3019－3027.

［7］Allen TM，Hansen C，Martin F，et al.Liposomes containing synthetic lipid derivatives of poly（ethylene glycol）show prolonged circulation half－lives in vivo［J］.Biochim Biophys Acta，1991，1066（1）：29－36.

［8］Ishida O，Maruyama K，Sasaki K，et al.Size－dependent extravasation and interstitial localization of polyethyleneglycol liposomes in solid tumor－bearing mice［J］.Int J Pharm，1999，190（1）：49－56.

［9］Szoka F Jr，Papahadjopoulos D.Procedure for preparation of liposomes with large internal aqueous space and high capture by reverse－phase evaporation［J］.Proc Natl Acad Sci USA，1978，75（9）：4194－4198.

［10］Ishii F，Nagasaka Y.Simple and convenientmethod for estimation marker entrapped in liposomes［J］.JDispersion Sci Technol，2001，22（1）：97－101.

［11］Ghambarian M，Yamini Y，Saleh A，et al.Taguchi OA16 orthogonal array design for the optimization of cloud point extraction for selenium determination in environmental and biological samples by tungsten－modified tube electrothermal atomic absorption spectrometry［J］.Talanta，2009，78（3）：970－976.

［12］Abu Lila AS，Doi Y，Nakamura K，etal.Sequential administration with oxaliplatin－containing PEG－coated cationic liposomes promotes a significant delivery of subsequent dose into murine solid tumor［J］.J Control Release，2010，142（2）：167－173

［13］van Zutphen S，Reedijk J.Targeting platinum antitumour drugs：Overview of strategies employed to reduce systemic toxicity［J］.Coord Chem Rev，2005，249（24）：2845－2853.

［14］Zalba S，Navarro I，Trocóniz IF，et al.Application of differentmethods to formulate PEG－liposomes of oxaliplatin：evaluation in vitro and in vivo［J］.Eur JPharm Biopharm，2012，81（2）：273－280.

［15］Kulkarni SB，Betageri GV，Singh M.Factors affectingmicroencapsulation of drugs in liposomes［J］.JMicroencapsul，1995，12（3）：229－246.

［16］Abu－Lila AS，Suzuki T，Doi Y，et al.Oxaliplatin targeting to angiogenic vessels by PEGylated cationic liposomes suppresses the angiogenesis in a dorsal air sac mouse model［J］.JControl Release，2009，134（1）：18－25.

［17］Castaing M，Loiseau A，Djoudi L.Effects of cholesterol on dye leakage induced by multidrug－resistancemodulators from anionic liposomes［J］.Eur J Pharm Sci，2003，18（1）：81－88.

［18］Taha EI，El－AnaziMH，El－Bagory IM，et al.Design of liposomal colloidal systems for ocular delivery of ciprofloxacin［OL／J］.Saudi Pharm J，2013.http：／／dx.doi.org／10.1016／j.jsps.2013.07.003.

Optim ization of oxalip latin long circulated liposom es by Taguchi orthogonal design

Cheraga Nihad，SHEN Yan，TU Jia-sheng
（State Key Laboratory of Natural Medicines，Department of Pharmaceutics，China Pharmaceutical University，Nanjing 210009，China）

ObjectiveTo optimize the preparation parameters of oxaliplatin long circulated liposomes for enhancing maximum entrapment efficiency（EE%）exerting sustained－release property.MethodsTaguchiorthogonal arrays L9（34）（TOA）was applied in this investigation with encapsulation efficiency as an evaluation index.The entrapmentefficiency was calculated using Ultra－filtration techniques.The particle size，zeta potential and in vitro release behavior of L－OHP liposomeswere characterized.ResultsThe drug to lipids ratio（W／W），the cholesterol to phosphatidylcholine ratio（M／M）and the sonication time were found to be the most influencing factors（P＜0.05）.Moreover，the optimized L－OHPmPEG－modified liposome showed better physicochemical characteristics compared to the optimized L－OHP bare liposomeswith a smaller particle size of204 nm and higher entrapment efficiency up to 25.4%.TEM visualization revealed spherical structure with a large internal space and a white coated film surrounding themPEG－modified liposomes.The in vitro release of L－OHP from mPEG－modified liposome was found to be slower than that of bare liposomes and L－OHP solution，respectively.The release profile of both liposomes and solution were well described by first ordermodelwith a coefficient correlation of0.990 2.ConclusionThe optimized L－OHP long circulated liposomes using TOA designmay be a promising carrier for L－OHP delivery into tumors compared to the conventional bare liposome.

Taguchiorthogonal array；mPEG－modified liposome；Bare liposome；Oxaliplatin；Drug delivery system

R979.1

A

2095－5375（2014）04－0187－006

國(guó)家自然科學(xué)基金（No.81201182）；中央高?；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)基金（No.JKPZ2013006）

Cheraga Nihad，女，研究方向：藥物新劑型與新技術(shù)，E－mail：missritchi＠hotmail.com

涂家生，男，教授，研究方向：藥物新劑型與新技術(shù)，Tel：025－83271305，E－mail：jiashengtu＠cpu.edu.cn