李榮貞，趙 軍，李慶英，王 彬，王 霞，李 偉

（1.山東生物制品研究所，山東泰安271000；2.山東泰邦生物制品有限公司，山東泰安271000）

兩種定量測定人血白蛋白中辛酸鈉含量方法的比較

李榮貞1，趙 軍1，李慶英1，王 彬2，王 霞2，李 偉2

（1.山東生物制品研究所，山東泰安271000；2.山東泰邦生物制品有限公司，山東泰安271000）

目的建立一種準確性高，簡便快速的方法，對人血白蛋白中間品的辛酸鈉含量進行質(zhì)量控制；方法通過采用氣相法和乙醚萃取法，分析比較T公司20批制品。結(jié)果乙醚萃取法與氣相法相比，回收率均在97%～101%的范圍內(nèi)，相對誤差小于2%，萃取法與氣相法差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。結(jié)論此法簡便快速，結(jié)果可靠，可應用于中間產(chǎn)品辛酸鈉含量的測定。

辛酸鈉含量；乙醚萃取法；氣相法

長期以來，辛酸鈉廣泛作為血液制品的保護劑［1，2］，用以增加白蛋白的穩(wěn)定性，已被證明是安全可靠的，現(xiàn)行2010年版《中國藥典》（三部）人血白蛋白中辛酸鈉的定量測定方法為氣相色譜法，成品質(zhì)量指標要求含量為0.140～0.180 mmol·g－1蛋白質(zhì)［2］，由于氣相色譜法樣品預處理時間長，針對血液制品中間產(chǎn)品的質(zhì)量控制，無法及時反映生產(chǎn)狀態(tài)，為車間提供即時的實驗數(shù)據(jù)。因此為更好的控制中間品質(zhì)量，服務于生產(chǎn)，確保成品質(zhì)量，我們對用乙醚萃取法檢測人血白蛋白制品中辛酸鈉含量的可靠性進行驗證，并與氣相法檢測的結(jié)果進行比較，證明乙醚萃取法結(jié)果的可靠性。

1 材料

1.1 待檢樣品 T公司人血白蛋白制品，201301～201320連續(xù)20批次。

1.2 主要試劑 1 mol·L－1鹽酸；乙醚（市售分析純）；正丁醇（市售分析純）；混合溶解液（無水乙醇：吐溫－80∶水＝5∶0.5∶94.5）；1%酚酞指示劑；0.01 mol·L－1氫氧化鈉滴定液。

1.3 儀器 分液漏斗、島津GC－14C氣相色譜儀。

2 方法

2.1 乙醚萃取法 取純化水19 mL，置250 mL分液漏斗中，依次準確加入20%供試品溶液1 mL，1 mol·L－1鹽酸0.2 mL，搖勻后加入乙醚15 mL及正丁醇1 mL，振搖約15 s，靜置分層，棄去水層，醚層用水洗兩次，每次15 mL，將醚層轉(zhuǎn)入100 mL三角瓶中，用混合溶解液15 mL充分洗滌分液漏斗后一并轉(zhuǎn)入三角燒瓶中，振搖混勻后加入1%酚酞指示劑2～3滴，用氫氧化鈉滴定液（0.01 mol·L－1）滴定至淡粉紅色即為終點，同時用純化水作空白，并配制標準辛酸鈉水溶液作回收試驗，回收率在97%～101%范圍內(nèi)。

V：樣品消耗氫氧化鈉滴定液（0.01 mol·L－1）量，mL；V0：空白消耗氫氧化鈉滴定液（0.01 mol·L－1）量，mL；M：氫氧化鈉滴定液摩爾濃度，mol·L－1；c：蛋白濃度，%；V1：供試品取樣量，mL。

2.2 氣相色譜法 參照2010年版《中國藥典》（三部）附錄ⅥK辛酸鈉測定法。

3 結(jié)果與討論

用兩種方法對20批人血白蛋白制品進行了辛酸鈉含量的測定（結(jié)果見表1），乙醚萃取法所測定的20批人血白蛋白的回收率均在97%～101%的范圍內(nèi)，統(tǒng)計學結(jié)果表明：兩種方法最大相對偏差均不超過2%（氣相色譜法最大允許誤差為2%），檢測結(jié)果無顯著差異（P＜0.05）。由此可見乙醚萃取法與現(xiàn)行的2010年版《中國藥典》（三部）附錄ⅥK GC法測定辛酸鈉含量結(jié)果具有高度的一致性。

表1 兩種方法的實驗結(jié)果對比

4 結(jié)論

辛酸鈉是人血白蛋白生產(chǎn)過程中加入的穩(wěn)定劑，現(xiàn)行2010年版《中國藥典》（三部）規(guī)定用GC法檢測人白成品，辛酸鈉含量每1 g蛋白質(zhì)中應為0.140～0.180 mmol，由于質(zhì)量指標要求范圍較窄，血液制品生產(chǎn)企業(yè)為確保成品辛酸鈉含量符合規(guī)定，在制品分裝前對半成品進行辛酸鈉含量測定，而現(xiàn)行《中國藥典》中規(guī)定的方法，樣品處理時間過長，不能即時反映結(jié)果。通過實驗分析，乙醚萃取法準確性與可靠性良好，簡便快速，可用于血液制品人血白蛋白中間產(chǎn)品辛酸鈉含量的質(zhì)量控制，確保成品辛酸鈉含量符合《中國藥典》的規(guī)定。

在檢測過程中應注意下列幾點：①隨著混合溶解液放置時間延長，空白耗堿量會逐漸增高，混合溶解液使用期限不得超過2個月；②萃取過程中要注意振搖的速度和幅度，振搖太輕，萃取不完全，導致實驗結(jié)果偏低，振搖過度，容易發(fā)生乳化現(xiàn)象，導致結(jié)果偏高；如遇乳化現(xiàn)象，兩相比重相近難以分離時，可采用延長靜止時間或加少量電解質(zhì)（如氯化鈉）破乳，使兩相分離；③若溶液呈堿性而產(chǎn)生乳化，加入少量稀硫酸或采用過濾等方法除去；④接近終點時一定要搖勻，避免局部濃度過高造成假終點；⑤每次試驗必須用0.04 mmol·L－1的辛酸鈉做回收試驗，回收率在97%～101%范圍內(nèi)，試驗成立，否則試驗不成立。

［1］鄒莉，鄒煒，彭良俊，等.辛酸鈉對人免疫球蛋白中病毒的滅活效果［J］.中國生物制品學雜志，2012，25（5）：585－588.

［2］Horowitz B，Piёt MP，Prince AM，et al.Inactivation of lipid enveloped viruses in labile blood derivatives by unsaturated fatty acids［J］.Vox Sang，1988，54（1）：14－20.

［3］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版（三部）［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

Study on two methods of sodium caprilate assay determ ination in human serum album in

LIRong-zhen1，ZHAO Jun1，LIQing-ying1，WANG Bin2，WANG Xia2，LIWei2

（1.Shandong Institute of Biological Products，Taian 271000，China；2.Shandong Taibang Biological Products Co.Ltd.，Taian 271000，China）

ObjectiveTo establish an accurate and rapid method to detect sodium caprylate during the process of human serum albumin（HSA）.M ethods20 samples of company T was analyzed with ether extraction and gas chromatography（GC）.ResultsThemean recovery ranged from 97%to 101%and RSD was less than 2%.ConclusionThe results showed that this method was rapid，convenient and accurate，which could meet the quality control during the production of HSA.

Sodium caprylate assay；Ether extraction；Gas chromatography

R927.2

A

2095－5375（2014）02－0085－002

李榮貞，女，研究方向：生物制品質(zhì)量控制，E－mail：lrc7098＠163.com