嚴(yán) 霞，曹雅軍

(湖北中醫(yī)藥大學(xué)附屬襄陽市中醫(yī)醫(yī)院藥學(xué)部，湖北 襄陽 441000)

湖北中醫(yī)藥大學(xué)附屬襄陽市中醫(yī)醫(yī)院自制的乳癖合劑是根據(jù)本院乳腺病?？茀f(xié)定處方制備而成的中藥復(fù)方制劑，主要由海藻、夏枯草、當(dāng)歸和生牡礪等藥材組成，具有疏肝理氣、軟堅(jiān)散結(jié)、調(diào)攝沖任的功效，主要用于治療乳腺增生[1]、乳腺纖維瘤和乳頭溢液等癥。本院藥品檢驗(yàn)室近期對多個批次的乳癖合劑進(jìn)行質(zhì)量檢查，發(fā)現(xiàn)部分批次的乳癖合劑微生物限度檢查不合格，并且不合格批次的pH值均>5.0。鑒于此，作者在嚴(yán)格按照制劑標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范進(jìn)行生產(chǎn)的前提下，對乳癖合劑的防腐劑用量進(jìn)行了研究，考察了0.05%的羥苯乙酯分別與0.15%、0.20%、0.25%、0.30%的苯甲酸聯(lián)用的抑菌效能，篩選出最合理的苯甲酸用量，為提高乳癖合劑的質(zhì)量提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材 料

1.1 儀器 SW-CJ-2G雙人單面水平超凈工作臺(河南兄弟儀器設(shè)備有限公司)；SPX-150B型生化培養(yǎng)箱(上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠)； TN-100C型托盤扭力天平(昆山萊博爾實(shí)驗(yàn)室科技有限公司)；MX-9000型pH計(jì)(哈爾濱億唐科技有限公司)。

1.2 試劑和藥品 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(批號201303)、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基(批號20130122)均為青島海博生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)；膽鹽乳糖培養(yǎng)基(批號20130110，杭州拓目科技有限公司)；pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液(批號20130330，南京便診生物科技有限公司)；大腸桿菌[CMCC(B)44102(由中國食品藥品檢定研究院提供)；乳癖合劑(含0.05%羥苯乙酯，批號 20120814)1000 ml，共4份(湖北中醫(yī)藥大學(xué)附屬襄陽市中醫(yī)醫(yī)院自制)；苯甲酸(藥用純，批號 20130118，杭州龍輝化工有限公司)；羥苯乙酯(藥用純，批號 20120922，鄭州帝斯曼科技有限公司)。

2 方法和結(jié)果

2.1 樣品溶液的制備 在4份新制備的乳癖合劑中分別加入苯甲酸1.5、2.0、2.5、3.0 g，使苯甲酸終濃度分別為0.15%、0.20%、0.25%和0.30%。攪拌溶液,煮沸10 min，放冷。分別取上述樣品溶液適量，測定pH值，余者備用。

2.2 微生物檢測方法 取2.1項(xiàng)下4份乳癖合劑各10 ml，加pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100 ml，混勻，得到1∶10的供試液，再分別稀釋成1∶100、1∶1000的供試液，得到含不同濃度苯甲酸的各稀釋級別的乳癖合劑稀釋液。按照《中華人民共和國藥典》2010年版一部附錄ⅩⅢC法[2]，在超凈工作臺上進(jìn)行微生物限度檢測。用不同培養(yǎng)基培養(yǎng)上述稀釋液。細(xì)菌、霉菌、酵母菌和大腸桿菌培養(yǎng)分別用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基和膽鹽乳糖培養(yǎng)基。以pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液作為陰性對照，陰性對照檢測應(yīng)無菌生長。陽性對照液的加菌量為10～100 cfu，按相應(yīng)控制菌檢查法檢查，陽性對照液應(yīng)檢出相應(yīng)的控制菌。對供試液中的細(xì)菌、霉菌、酵母菌和大腸桿菌分別檢查，每個稀釋級別進(jìn)行3次獨(dú)立的平行實(shí)驗(yàn)。細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)取平均值，大腸桿菌檢測結(jié)果以陰性或陽性表示。

2.3 微生物檢測結(jié)果 同一批次4份乳癖合劑的微生物檢測結(jié)果見表1。由表1可以看出，隨苯甲酸用量的增大，乳癖合劑的pH值逐漸降低，細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)隨之下降，表明抑菌效能隨苯甲酸用量的增大逐漸增強(qiáng)。苯甲酸終濃度為0.15%和0.20%的乳癖合劑pH值均>5.0，微生物限度檢查不合格。苯甲酸用量為0.30%與0.25%的抑菌效能相當(dāng)，因此確定以0.25%的苯甲酸聯(lián)合0.05%的羥苯乙酯作為乳癖合劑的防腐劑。

3 討 論

pH值對苯甲酸的抑菌效果影響很大。在酸性條件下，苯甲酸對細(xì)菌、霉菌和酵母菌均有抑制作用，其抑菌效能的最適pH值為2.5～4.0，一般以<5.0為宜。降低pH值對苯甲酸發(fā)揮抑菌、防腐作用有利。當(dāng)pH值>5.0時，為了保證抑菌效能，苯甲酸用量不得<0.5%[3]。羥苯乙酯對霉菌的抑菌效能較強(qiáng)，但對細(xì)菌作用較弱。故本院生產(chǎn)的乳癖合劑中，將苯甲酸與羥苯乙酯(0.05%)聯(lián)合使用，以達(dá)到增強(qiáng)防腐、抑菌效能的目的。乳癖合劑自身pH值較高(5.5)，一般的防腐劑在常規(guī)劑量均達(dá)不到預(yù)期效果。由于苯甲酸的酸性較食品用酸度調(diào)節(jié)劑乙酸更強(qiáng)，因此，在pH值>5.0的合劑中，應(yīng)增大苯甲酸的濃度，使其在抑制微生物生長繁殖的同時，調(diào)低合劑的pH值，有利于苯甲酸更好地發(fā)揮抑菌作用。

本研究確定以0.25%的苯甲酸聯(lián)合0.05%的羥苯乙酯作為乳癖合劑的防腐劑，并進(jìn)一步改進(jìn)生產(chǎn)過程中可能造成微生物污染的各個環(huán)節(jié)，如做好環(huán)境衛(wèi)生和空氣的凈化，對制藥設(shè)備和用具及時進(jìn)行潔凈與滅菌處理，注意操作人員的個人衛(wèi)生等，從而使乳癖合劑的微生物限度控制達(dá)標(biāo)。

【參考文獻(xiàn)】

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[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典. 2010年版 一部[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010：附錄79-82.

State Pharmacopoeia Committee.Pharmacopoeia of the People’s Republic of China.2010 ed,Vol 1[S].Beijing:Chinese Medical Science Press，2010：Appendix 79-82.In Chinese.

[3] 張兆旺.中藥藥劑學(xué)[M].北京：中國中醫(yī)藥出版社,2003：57.

Zhang ZhaoWang.Pharmaceutics of Chinese materia medica[M].Beijing:Chinese Press of Traditional Chinese Medicine，2003：57. In Chinese.