徐淵金 陳含笑 張婷 卜慧斐

（建德市質(zhì)量計(jì)量監(jiān)測中心，浙江杭州311600）

RP-HPLC法同時(shí)測定糕點(diǎn)中安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和脫氫乙酸

徐淵金*陳含笑 張婷 卜慧斐

（建德市質(zhì)量計(jì)量監(jiān)測中心，浙江杭州311600）

建立反相高效液相色譜法（RP-HPLC）同時(shí)測定糕點(diǎn)中安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和脫氫乙酸。該方法糕點(diǎn)樣品經(jīng)處理后，采用SunFire C18（5 μm，4.6 mm×250 mm）反相色譜柱，流動(dòng)相為甲醇:磷酸鹽緩沖液（pH6.7）=7∶93等度洗脫，流速為1.0 mL/min，檢測波長230 nm，柱溫為30℃，進(jìn)樣量為20 μL。線性范圍0.2 mg/L～120 mg/L，檢出限0.4 mg/kg～1.0 mg/kg，加標(biāo)回收率為87.7%～105.3%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于5%。結(jié)果表明，該方法操作簡便、結(jié)果可靠，可用于同時(shí)檢測糕點(diǎn)中安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和脫氫乙酸。

反相高效液相色譜；糕點(diǎn)；防腐劑；甜味劑；添加劑

隨著食品工業(yè)的快速發(fā)展，食品添加劑在改善食品色澤、口感和延長食品貨架期等方面具有非常重要的作用，甚至可以說沒有食品添加劑，就沒有現(xiàn)代食品工業(yè)，但是大部分食品添加劑對人體具有一定的危害性，有些甚至具有一定的毒性。GB 2760《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》對食品添加劑的種類和使用范圍做了明確規(guī)定，甜味劑和防腐劑是較常見的食品添加劑，而乙酰磺胺酸鉀（安賽蜜）、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸及脫氫乙酸是甜味劑和防腐劑中使用范圍較廣和常見的種類。目前國家標(biāo)準(zhǔn)中對食品中安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸及脫氫乙酸的檢測方法較多，這些方法涉及多種檢測設(shè)備，且只能檢測其中的一種或幾種，不能同時(shí)檢測，如使用甲醇-乙酸銨作為流動(dòng)相，在有些情況下糖精鈉和脫氫乙酸會相互干擾，影響檢測結(jié)果。為提高工作效率、減少試驗(yàn)成本，建立這些添加劑同時(shí)檢測方法顯得十分必要。

1 材料與方法

1.1 儀器

Agilent 1200高效液相色譜儀，包括真空脫氣機(jī)（G1379B）、四元泵（G1311A）、自動(dòng)進(jìn)樣器（G1329A）、紫外檢測器（G1328B）和Agilent Chem Station，美國Agilent公司；HT-230A柱溫箱；UPWS-Ⅰ-30T純水儀，杭州永潔達(dá)凈化科技有限公司；LG10-2.4A離心機(jī)，北京醫(yī)用離心機(jī)廠；Sun-Fire C18色譜柱，美國Waters公司。

1.2 試劑與材料

1.2.1 試劑

標(biāo)準(zhǔn)品：安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸，中國計(jì)量科學(xué)研究院，1.00 mg/mL；脫氫乙鈉，北京上立方聯(lián)合化工技術(shù)研究院，純度98%。

試劑：甲醇，色譜純；磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、亞鐵氰化鉀、乙酸鋅，均為分析純。

樣品：綠豆糕、提子蛋糕，市售。

1.2.2 試劑配制

脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)儲備液的配制:準(zhǔn)確稱取脫氫乙鈉標(biāo)準(zhǔn)品0.059 g于小燒杯中，加少量純水，攪拌使其溶解，將溶液移到50 mL容量瓶中用純水定容至刻度，該標(biāo)準(zhǔn)儲備液每毫升相當(dāng)于含脫氫乙酸1.0 mg。

亞鐵氰化鉀溶液：稱取106 g亞鐵氰化鉀［K4Fe（CN）6·3H2O］于燒杯中，加少量水溶解，移至1 000 mL容量瓶中，加水定容。

乙酸鋅溶液：精確稱取220 g乙酸鋅［Zn（CHCO-O）2·3H2O］溶于少量水中，加入30 mL冰乙酸，加水定容至1 000 mL。

磷酸鹽緩沖液（pH6.7）：分別稱取2.5 g磷酸二氫鉀（KH2PO4）和2.5 g磷酸氫二鉀（K2HPO4· 3H2O）于燒杯中加水溶解，將溶液移至1 000 mL容量瓶中，用水定容到刻度后混勻，用孔徑0.45 μm的微孔濾膜過濾備用。

混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：用水稀釋安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸鈉標(biāo)準(zhǔn)貯備液至2 μg/mL～120 μg/mL。

1.3 色譜條件

色譜柱：SunFire C18（5 μm，4.6 mm×250 mm）；柱溫：30℃；紫外檢測器波長230 nm；流動(dòng)相：磷酸鹽緩沖液（pH6.7）：甲醇（93∶7），進(jìn)樣體積20 μL。

1.4 樣品處理

稱取粉碎均勻糕點(diǎn)樣品2 g～3 g（精確至0.001 g）于小燒杯中，用20 mL水分?jǐn)?shù)次將樣品移入25 mL容量瓶中，超聲振蕩提取5 min，取出后加入2 mL亞鐵氰化鉀搖勻，再加入2 mL乙酸鋅溶液搖勻，用水定容至刻度。移入離心管中，4 000 r/min離心5 min，吸取上清液，用孔徑0.45 μm的微孔濾膜過濾，濾液待上機(jī)分析。

1.5 定性定量方法

采用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的保留時(shí)間對樣品峰進(jìn)行定性，采用外標(biāo)法以峰面積計(jì)算定量，依次配制不同質(zhì)量濃度的安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸等甜味劑和防腐劑標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣分析,以質(zhì)量濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2 結(jié)果和討論

2.1 檢測波長的選擇

在190 nm～400 nm之間對各組分的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行光譜掃描，查看各組分的吸收波長，同時(shí)參考相關(guān)文獻(xiàn)，選擇波長230 nm作為檢測波長。

2.2 流動(dòng)相的優(yōu)化

首先在固定泵流速條件下，對流動(dòng)相按不同比例進(jìn)行試驗(yàn),結(jié)果發(fā)現(xiàn)當(dāng)磷酸鹽緩沖液（pH6.7）：甲醇（93∶7）時(shí)，5種物質(zhì)能夠完全分離。然后在選定的流動(dòng)相比例情況下，調(diào)節(jié)泵流速，結(jié)果發(fā)現(xiàn)流動(dòng)相為磷酸鹽緩沖液（pH6.7）：甲醇（93∶7）、流速1.0 mL/min時(shí)，5種物質(zhì)能夠分離效果最好，并且分析時(shí)間適宜，標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖見下頁圖1。

2.3 線性范圍與檢出限

在試驗(yàn)條件下，用峰面積比對質(zhì)量濃度繪制曲線，檢測結(jié)果中色譜峰高為噪聲高的3倍（S/N=3），相對應(yīng)的濃度為檢出限。各組分的線性方程、相關(guān)系數(shù)、線性范圍及檢出限見表1。從表1可以看出各組分在線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

表1 各組分的線性范圍及檢出限

2.4 方法回收率及精密度

采用添加回收的方法，測定回收率。分別添加高、中、低3個(gè)水平，每個(gè)添加水平平行檢測6次，回收率和精密度數(shù)據(jù)見表2。由表2可知，方法回收率在87.7%～105.3%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）小于5%，可見本方法有較高的準(zhǔn)確度和可靠性。

表2 回收率和精密度測定結(jié)果

2.5 樣品測定

采用本方法對市售綠豆糕和提子蛋糕進(jìn)行測定，同時(shí)采用國家標(biāo)準(zhǔn)檢測方法對樣品進(jìn)行檢測，結(jié)果見表3。由表3可知，本方法與國家標(biāo)準(zhǔn)檢測方法比較，測定結(jié)果令人滿意。

表3 樣品的測定結(jié)果

3 結(jié)論

本文建立了糕點(diǎn)中安賽蜜、苯甲酸和脫氫乙酸等5種添加劑同時(shí)檢測的反相高效液相色譜測定方法。該方法采用甲醇-磷酸鹽緩沖液等度洗脫，操作簡便，分析時(shí)間短，且回收率和重現(xiàn)性較好,可用于糕點(diǎn)中安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸和糖精鈉的含量檢測。

［1］中華人民共和國衛(wèi)生部.GB 2760-2011食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)［S］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2011：1-186.

［2］中華人民共和國衛(wèi)生部，中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會. GB/T 5009.140-2003飲料中乙?；前匪徕浀臏y定［S］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2004：203-207.

［3］中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局，中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會.GB/T 23377-2009食品中脫氫乙酸的測定高效液相色譜法［S］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2009：1-5.

［4］中華人民共和國衛(wèi)生部，中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會. GB/T 5009.29-2003食品中山梨酸、苯甲酸的測定［S］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2004：231-239.

［5］中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局，中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會.GB/T 23495-2009食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定高效液相色譜法［S］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2009：1-4.

Simultaneous determ ination ofacesulfame,benzoic acid,sorbic acid,saccharin sodium,and dehydroacetic acid in cakes by RP-HPLC

XU Yuan-jin*CHENHan-xiao ZHANG Ting BOHui-fei
（Jiande city center ofsupervision&inspection on quality and measurement，Hangzhou Zhejiang 311600，China）

RP-HPLC was applied to the separation and determination of acesulfame,benzoic acid,sorbic acid,saccharin sodium,and dehydroacetic acid in cakes.SunFire C18was used as reversed phase column,and a solution containingmethanol and phosphate buffered saline mixed in the ratioof7 to93 was used as the mobile phase.The flow was 1.0 mL/min,the detect wavelength was 230 nm，the column temperature was 30℃,and the injection volume was 20 μL. The limit of detection was between 0.4 mg/kg and 1.0 mg/kg，the linear plots were obtained between 0.2 mg/L and 120 mg/L.The fortification recoveries were between 87.7%and 105.3%,and RSD(n=6)value were less than 5%.This method is simple and highly sensitive,can be used to determine acesulfame,benzoic acid,sorbic acid,saccharin sodium, and dehydroacetic acid in cakes simultaneously.

RP-HPLC；cakes；preservative；sweetener；additive

TS207.3

A

1673-6044（2014）03-0055-03

10.3969/j.issn.1673-6044.2014.03.017

*徐淵金，男，1980年出生，2007年畢業(yè)于浙江工商大學(xué)食品科學(xué)專業(yè)，碩士，工程師。

2014-04-10