宋金翠 楊成 劉艷榮

（國家農(nóng)副加工產(chǎn)品及白酒質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心，山西省食品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗研究院，山西太原030012）

液質(zhì)聯(lián)用測定肉制品中氟尼辛葡甲胺前處理方法的優(yōu)化

宋金翠*楊成 劉艷榮

（國家農(nóng)副加工產(chǎn)品及白酒質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心，山西省食品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗研究院，山西太原030012）

以液相色譜-四級桿串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）為檢測手段,通過考察回收率大小測定肉制品中氟尼辛葡甲胺的殘留量，并對其的前處理條件進(jìn)行了優(yōu)化，最終確定了肉制品中氟尼辛葡甲胺前處理方法：采用乙腈-乙酸乙酯（1∶1，V/V）提取，PCX固相萃取小柱凈化，用正己烷-乙酸乙酯（9∶1，V/V）淋洗，甲醇和氨化甲醇（5∶95，V/V）洗脫，再用體積濃度0.1%甲酸（含0.5 mmol/L乙酸銨）定容，待測。方法回收率為85.0%～110.0%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）＜6.0%。

氟尼辛葡甲胺；提??；凈化；肉制品；液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜

氟尼辛葡甲胺（Flunixin meglumine）是一種新型的、非甾體類動物專用的解熱鎮(zhèn)痛藥物。目前，對于利用液相色譜—四級桿串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）測定非甾體抗炎藥殘留分析方法所見報道不多。固相萃取是一項結(jié)合了選擇性保留、選擇性洗脫的分離過程。在固相萃取過程中，“保留”和“洗脫”均受目標(biāo)物、吸附劑和溶劑3種因素的影響。對于給定的目標(biāo)物，選擇合適的吸附劑、樣品溶劑以及洗脫溶劑是實現(xiàn)成功分離的關(guān)鍵。

因而，本試驗對雞、牛、羊、豬組織中氟尼辛葡甲胺的前處理條件進(jìn)行了優(yōu)化，所建立的前處理方法具有操作簡單、回收率高、重現(xiàn)性好的特點(diǎn)，能夠滿足現(xiàn)行獸藥殘留分析的要求。

1 試驗部分

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器

WH-2漩渦震蕩器，江蘇城西曉陽電子儀器廠；KQ5200DE超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；離心機(jī)，轉(zhuǎn)速不低于4 000 r/min，上海安亭科學(xué)儀器廠；調(diào)速多用振蕩器，國華電器有限公司；MTN-2800W氮吹儀，天津奧特賽恩斯儀器有限公司。

1.1.2 試劑

色譜用水為符合GB/T 6682規(guī)定的一級水，其他用水為符合GB/T 6682規(guī)定的三級水；乙腈、乙酸乙酯、甲醇，均為色譜純，美國DIKMA公司；甲酸、乙酸銨、氨水均為分析純，天津化學(xué)試劑三廠；磷酸，分析純，北京化工廠；無水硫酸鈉，分析純，天津鵬達(dá)化學(xué)試劑有限公司；雞肉、豬肉、牛肉、羊肉，均為市售；氟尼辛葡甲胺標(biāo)準(zhǔn)品，CAS號為42461-84-7，純度≥99.0%，化學(xué)式為C14H11F3N2O2·C7H17NO5，分子量為491.46，購于美國Dr.E公司；PCX（60 mg，3 mL）固相萃取柱；微孔濾膜，孔徑0.22 μm，有機(jī)相。

1.2 試驗方法

1.2.1 樣品的提取

將雞肉、豬肉、牛肉和羊肉分別攪碎混勻裝塑封袋，放入冰箱中備用。試驗時分別準(zhǔn)確稱取雞、豬、牛、羊肉2.00 g于離心管中，按0.1 μg/kg、0.3 μg/kg、0.5 μg/kg、1.0 μg/kg的水平加標(biāo)，依次加入2.00 g無水硫酸鈉，10 mL乙腈-乙酸乙酯（1∶1，V/V），渦旋1 min，超聲提取30 min，震蕩提取20 min，8 000 r/min離心20 min，收集上清液于100 mL的燒杯中；用10 mL乙腈-乙酸乙酯（1∶1，V/V）重復(fù)提取殘渣一次，合并兩次提取液，于40℃水浴中氮吹至近干。用2 mL乙腈超聲溶解殘渣，再用0.02 mol/L磷酸溶液定容至10 mL，待凈化。

1.2.2 樣品凈化與濃縮

依次用5 mL甲醇，5 mL水，10 mL 0.02 mol/L磷酸平衡PCX固相萃取小柱后，將上述待凈化液轉(zhuǎn)入固相萃取小柱中，待凈化液勻速流過小柱后，用10 mL正己烷-乙酸乙酯（9∶1，V/V）淋洗，再依次用4 mL甲醇和8 mL氨化甲醇（5∶95，V/V）洗脫，收集洗脫液于接收管中，于40℃水浴中氮吹至近干，加入1 mL乙腈超聲溶解，用體積濃度0.1%甲酸（含0.5 mmol/L乙酸銨）定容至2 mL，混勻后過孔徑0.22 μm有機(jī)濾膜，待液質(zhì)檢測。

2 結(jié)果與討論

2.1 固相萃取柱的選擇

采用現(xiàn)有的AgilentPCX柱、HLB柱和SCX柱3種固相萃取小柱對氟尼辛葡甲胺的凈化和吸附能力進(jìn)行考察，回收率和總離子流圖結(jié)果分別見表1和圖1。

表1 不同固相萃取小柱對氟尼辛葡甲胺凈化后的回收率

圖1 不同固相萃取柱對氟尼辛葡甲胺凈化后的總離子流圖

由表1可以看出，在同等淋洗條件和洗脫條件下，對極性較強(qiáng)的氟尼辛葡甲胺凈化時，采用HLB柱回收率最低，PCX柱回收率最高，由圖1同樣可以直觀地看出這一點(diǎn)。這可能和氟尼辛葡甲胺的結(jié)構(gòu)有關(guān)，氟尼辛葡甲胺的結(jié)構(gòu)式見圖2。由圖2可以看出其含有羧基和氨基，但羧基的酸性大于氨基的堿性，所以SCX柱吸附氟尼辛葡甲胺的能力較弱；氟尼辛葡甲胺含有F電負(fù)性原子，易于得到質(zhì)子，從而在Agilent PCX柱上有較好的保留能力。故本試驗選用Agilent PCX固相萃取小柱凈化樣品。

圖2 氟尼辛葡甲胺化學(xué)式

2.2 提取溶劑的優(yōu)化

從氟尼辛葡甲胺結(jié)構(gòu)式可以看出，氟尼辛葡甲胺含有羥基、羧基和氨基，極性較大。試驗采用不同溶劑甲醇、體積濃度95%乙醇、乙腈-乙酸乙酯進(jìn)行提取后的加標(biāo)回收率結(jié)果見表2。

表2 不同提取溶劑對氟尼辛葡甲胺的提取回收率

由表2可以看出，甲醇和乙腈-乙酸乙酯的提取效果相當(dāng)，但是考慮到肉制品中含油脂和蛋白質(zhì)較多，乙酸乙酯有利于油脂的去除、乙腈有利于沉淀蛋白，為了得到比較干凈的體系，減少后面過柱子時的負(fù)荷以及保證質(zhì)譜系統(tǒng)的干凈環(huán)境，最終減少基質(zhì)效應(yīng)，本試驗選用乙腈-乙酸乙酯（1∶1，V/V）作為提取溶劑。

2.3 溶劑干擾和基質(zhì)效應(yīng)試驗

確定提取溶劑、固相萃取小柱后，凈化過程中的每一環(huán)節(jié)都可能對回收率和最終檢測結(jié)果造成影響，本研究重點(diǎn)對溶劑和基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行了試驗，結(jié)果如表3所示。

表3 溶劑和基質(zhì)對回收率的影響

由表3可知，標(biāo)液直接進(jìn)PCX柱、空白加標(biāo)和基質(zhì)加標(biāo)的回收率均比較滿意且加標(biāo)回收率受基質(zhì)影響不大。

2.4 方法的回收率和精密度

本試驗采用外標(biāo)法定量，通過向陰性樣品中添加不同水平的氟尼辛葡甲胺標(biāo)準(zhǔn)溶液來考察回收率和精密度。每個樣品平行測定6次，結(jié)果如表4所示。試驗結(jié)果表明，該法的平均回收率為85.0%～110.0%之間，其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）＜6.0%。

表4 試樣測定的平均回收率與精密度

3 結(jié)論

本試驗對樣品前處理的提取和凈化條件進(jìn)行了優(yōu)化，所得方法回收率為85.0%～110.0%之間。該方法操作簡便易行，回收率和重現(xiàn)性好，可用于氟尼辛葡甲胺殘留量的檢測分析。

［1］康永鋒，鄒世文，段吳平，等.鯽魚中4種非甾體抗炎藥殘留的分析研究［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，39（1）: 286-288.

［2］彭濤，于靜，嚴(yán)矛，等.超高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定豬肝中非甾體類抗炎藥殘留［J］.分析化學(xué)研究報告，2009，37（3）:363-368.

［3］李存，江瀟瀟，吳銀良，等.液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定牛組織中氨丙啉殘留量［J］.分析化學(xué)研究簡報，2011，39（4）：576-579.

［4］彭濤，于靜，李曉娟，等.SN/T 1922-2007進(jìn)出口動物源性食品中對乙酰氨基酚、鄰乙酰水楊酸殘留量檢測方法液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法［S］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2007：1-16.

［5］胡婷，彭濤，李曉娟，等.離子交換固相萃取-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定動物組織中的8類非甾體抗炎藥殘留［J］.分析化學(xué)研究報告，2012，40（2）：236-242.

［6］康永峰，鄒世文，段吳平，等.超聲波-微波輔助提取-高效液相色譜法同時檢測羊肉組織中4種非甾體抗炎藥物殘留［J］.色譜，2010（11）：1 056-1 060.

Optim ization for pretreatment condition of flunixin meglum ine in meat by LC-MS/MS

SONG Jin-cui*YANGCheng LIU Yan-rong
（National quality and supervision center ofsubsidiary agricultural products and spirit，food quality supervision and inspection academy of Shanxi province，Shanxi Taiyuan 030012，China）

The pretreatment condition of flunixin meglumine was optimized.The content of flunixin meglumine was determined by LC-MS/MS,the recoveryof flunixin meglumine as a main index.The pretreatment method was as follows: flunixin meglumine was extracted with acetonitrile and ethyl acetate（1:1，V/V），purified by PCX column,washed with Hexane-ethyl acetate(9:1,V/V),eluted with methanol-aminomethanol（5:95，V/V）and diluted with 0.1% formic acid(containing0.5mmol/Lammonium acetate).The recoverywas 85.0%～110.0%and RSD was below 6.0%.

flunixin meglumine；extract；purify；meat product；liquid chromatographic-tandem mass spectrometric method（LC-MS/MS）

TS207.3

A

1673-6044（2014）03-0052-03

10.3969/j.issn.1673-6044.2014.03.016

*宋金翠，女，1970年出生，2005年畢業(yè)于沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)專業(yè)，碩士，高級工程師。

2014-04-12