韓雪蓮

（江蘇省安全生產(chǎn)科學(xué)研究院，江蘇 南京 210042）

白藜蘆醇（resveratrol，Res）于1940年由日本Tokaoka首次從毛葉藜蘆的根部分離得到并被命名，至今已經(jīng)在21個(gè)科、31個(gè)屬的72種植物中得以發(fā)現(xiàn)。在葡萄、虎杖等植物中含量較為豐富。目前人們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)Res具有多種生理活性，包括抗癌、心血管保護(hù)、抗菌、神經(jīng)保護(hù)、免疫調(diào)節(jié)、肝細(xì)胞保護(hù)，以及抗肝纖維化、抗衰老、治療休克、美容減肥等多種作用。由于 Res 的生物利用度較低，Res的衍生物和類似物研究也得到了廣泛開展。

1 Res的結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)

1.1 Res的結(jié)構(gòu)

Res為蒽醌萜類（非黃酮類）多酚化合物，又稱芪三酚，別名虎杖苷元，化學(xué)名 3,5,4'-三羥基-反-二苯代乙烯（3,5,4'-trihy-droxy- trans-stilbene），分子式C14H12O3，相對(duì)分子質(zhì)量228.25，具有酚和芪的特性。關(guān)于Res及其衍生物的晶體結(jié)構(gòu)實(shí)驗(yàn)和從頭計(jì)算闡述了其結(jié)構(gòu)特征對(duì)于生物活性的重要性。Res分子結(jié)構(gòu)顯示反式二苯乙烯骨架具有相對(duì)的共面性，而在固態(tài)時(shí)，3個(gè)羥基與鄰近苯基上的氧原子交替形成和打破氫鍵，從而顯示出廣泛的氫鍵網(wǎng)絡(luò)。氫鍵的交替形成和破壞，賦予了Res分子中3個(gè)羥基中氫原子的流動(dòng)性，即可以轉(zhuǎn)移到鄰近的高電子密度的活性氧原子[1]。見圖1、圖2。

1.2 Res的理化性質(zhì)

Res為白色針狀晶體，無(wú)味，難溶于水，易溶于有機(jī)溶劑。自然界中 Res有順、反兩種結(jié)構(gòu)，植物中主要以反式形式存在，一般認(rèn)為反式異構(gòu)體的生物活性更為廣泛。高純度的Res對(duì)光不穩(wěn)定，自然條件下，Res僅有少量以游離態(tài)存在，常與葡萄糖結(jié)合以苷的形式存在，在腸道中糖苷酶作用下，白藜蘆醇糖苷釋放出Res[2]。

2 Res的抗腫瘤作用機(jī)制

2.1 Res的分子靶點(diǎn)

圖1 晶體X射線衍射獲得的反式Res分子結(jié)構(gòu)

圖2 晶體X射線衍射顯示反式Res分子間廣泛的氫鍵網(wǎng)絡(luò)

Res對(duì)多種體外培養(yǎng)癌細(xì)胞和移植瘤表現(xiàn)出抑制或延緩作用，關(guān)于Res抗腫瘤作用機(jī)制的研究結(jié)果也極為豐富，數(shù)量眾多，但結(jié)果頗不相同。包括抑制氧活性自由基、抑制細(xì)胞色素 P450對(duì)致癌物的活化、阻斷蛋白激酶C介導(dǎo)的信號(hào)通路、免疫調(diào)節(jié)、激素調(diào)節(jié)、引起細(xì)胞周期阻滯并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等均被認(rèn)為是其可能的機(jī)制。關(guān)于其分子靶點(diǎn)更是多種多樣，pRb、MEK1、AP-1、c-Myc、Caspases 3/9、p53、p21、 p27、Bax、Bcl-2、 cyclin B/D1/E、Cdk1/4、pCdc2（tyr15）、ATM/ATR、chk1/2、pCdc25C、MMP-2、MMP-9、MKP5、P53、 p53（ser15）、MAKP、p21、 AMPK、ROS、PI3K、pAKT、Src-Stat3、ROS、caspase-2、ATF3、M IC-1、NO、BCL6、Myc、pAKT、pp70S6K、Cyclin B、PKC、PKCα等均被認(rèn)為是Res發(fā)揮抗腫瘤作用的可能靶點(diǎn)[3-7]。

2.2 Res對(duì)細(xì)胞周期的影響

包括對(duì)白血病、結(jié)腸癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌和食道癌細(xì)胞等多種人類腫瘤細(xì)胞株的研究認(rèn)為，Res可以引起細(xì)胞周期阻滯，并誘導(dǎo)分化或凋亡。Res可以誘導(dǎo)CDK2及Cyclin E表達(dá)增加，抑制肝癌細(xì)胞HepG2及結(jié)腸癌SW 480細(xì)胞系癌細(xì)胞從S期進(jìn)入G2/M期，并存在劑量依賴關(guān)系；通過(guò)ATM/Chk途徑誘導(dǎo)多發(fā)性骨髓瘤IM 9細(xì)胞S期細(xì)胞周期阻滯并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；通過(guò)增加 G1/S和G2/M 調(diào)節(jié)因子相關(guān)激酶的表達(dá)，引起人乳腺癌MCF-7細(xì)胞S期阻滯和細(xì)胞凋亡；通過(guò)引起G0/G1期阻滯、下調(diào)bcl-2基因、上調(diào)bax基因表達(dá)誘導(dǎo)前列腺癌細(xì)胞PC-3細(xì)胞凋亡[8-10]。目前有越來(lái)越多的觀點(diǎn)傾向于Res主要通過(guò)細(xì)胞S期或G0/G1期阻滯和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡而起到抗腫瘤作用。

鑒于實(shí)驗(yàn)結(jié)果的多種多樣，可能Res并不是通過(guò)單一機(jī)制發(fā)揮抗腫瘤作用，而是通過(guò)多種途徑、多種層次的生化途徑產(chǎn)生作用。Res作用于細(xì)胞整個(gè)通路，而不是單個(gè)的酶，因此作用更為緩和（副作用較少），并且能夠取得更好的療效和動(dòng)態(tài)平衡。

3 Res的毒性

3.1 Res的遺傳毒性

高濃度Res（200μmol/L）能夠?qū)κ驦5178Y淋巴瘤細(xì)胞產(chǎn)生毒性，產(chǎn)生微核和中期染色體位移，在V79中國(guó)倉(cāng)鼠細(xì)胞中，同樣能看到微核的產(chǎn)生。Ferry-Dumazet等[11]采用細(xì)菌反向突變?cè)囼?yàn)（Ames試驗(yàn)）、體外染色體畸變（CA）實(shí)驗(yàn)、體外微核（MN）實(shí)驗(yàn)和姐妹染色單體交換（SCE）試驗(yàn)測(cè)試了 Res對(duì)CHL中國(guó)倉(cāng)鼠肺細(xì)胞遺傳毒性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Ames試驗(yàn)陰性，但 Res能夠造成結(jié)構(gòu)性 CAs（2.5～20μg/m L）和微核細(xì)胞，并顯示輕微的非整倍體傾向。另外，Res的 SCE作用具有劑量依賴性，在10mg/m L濃度下，Res能夠產(chǎn)生6倍的SCE作用，相當(dāng)于絲裂霉素。Res對(duì)白血病細(xì)胞和正常造血細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制IC50分別是12μmol/L和59μmol/L。關(guān)于肝癌 Bel-7404細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，Res濃度＞25μmol/L時(shí)可抑制 Bel-7404細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)凋亡，濃度＞100μmol/L時(shí)正常肝細(xì)胞 L02 的增殖也受到抑制，并產(chǎn)生凋亡。Helene Ferry-Dumazet 等[11]發(fā)現(xiàn)Res對(duì)未激活的淋巴細(xì)胞無(wú)影響，但是在低濃度下（IC50＜8μmol/L）即可降低正常健康志愿者細(xì)胞周期內(nèi)的外周血淋巴細(xì)胞活性，并誘導(dǎo)其凋亡。同時(shí)還可以以劑量依賴性方式（IC50=60μmol/L）誘導(dǎo)正常CD34+造血干細(xì)胞凋亡并降低集落生成熟。說(shuō)明Res通過(guò)復(fù)雜的信號(hào)通路產(chǎn)生作用，而且對(duì)正常細(xì)胞也有抗增殖和誘導(dǎo)凋亡活性。

3.2 Res的急慢性毒性

關(guān)于 TSGp53雜合子基因敲除小鼠的研究發(fā)現(xiàn)，連續(xù)6個(gè)月灌胃給藥4000mg/(kg·d)，并沒有改變腫瘤的發(fā)生率，除了腎積水和尿路上皮增生，沒有發(fā)現(xiàn)其他明顯的改變。小鼠血漿游離Res濃度（給藥劑量4000mg）最高可達(dá)20～40μmol/L，代謝產(chǎn)物濃度可達(dá)10倍。這證明Res不具有致癌性，但同時(shí)說(shuō)明Res具有一定的腎及膀胱毒性，并將限制其在體內(nèi)的用量[12]。

同時(shí)，也有實(shí)驗(yàn)證據(jù)說(shuō)明Res對(duì)正常細(xì)胞無(wú)毒性或者具有較大的安全性。大鼠的最大耐受劑量達(dá)300mg/kg；小鼠口服較高劑量的 Res，4周后檢測(cè)各項(xiàng)血液生化指標(biāo)，均未發(fā)現(xiàn)異常改變。細(xì)胞水平研究表明，Res不影響小鼠成纖維細(xì)胞（3T3）的生長(zhǎng)增殖活性，但明顯抑制HepG2、HL-60細(xì)胞及膽囊癌 GBC細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖[13-15]。目前，關(guān)于 Res毒性報(bào)道并不一致，因?qū)嶒?yàn)所采用的濃度、細(xì)胞類型、細(xì)胞狀態(tài)等不同而不同。總體來(lái)說(shuō)，多數(shù)報(bào)道傾向于Res對(duì)正常細(xì)胞無(wú)毒或低毒。

4 Res的代謝動(dòng)力學(xué)

4.1 Res的吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)及體內(nèi)分布

對(duì)人結(jié)腸腺癌 Caco-2細(xì)胞的體外研究表明，Res可被大量吸收，而數(shù)項(xiàng)動(dòng)物及人體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證明，Res的腸道吸收率極低。同時(shí)，由于迅速代謝，其半衰期極短（約8～14m in），峰濃度極低[16]。健康受試者通過(guò)不同介質(zhì)（白葡萄酒，葡萄汁，蔬菜汁/勻漿）口服后，30m in達(dá)峰值，血漿峰濃度 10～40nmol/L。靜脈注射給藥后，Res在體內(nèi)廣泛分布，主要分布于肝、肺、脾、腎、胃和腸，其中以肝臟分布最多，腎次之，提示Res的抗腫瘤作用可能與其組織分布特點(diǎn)有關(guān)，即在特定的靶組織高濃度分布。人體內(nèi)靜脈注射30min后，Res大部分轉(zhuǎn)化為硫酸鹽。目前口服后詳細(xì)的血漿代謝過(guò)程還不清楚，血清和尿液中主要以葡萄糖醛酸和硫酸結(jié)合物存在。在血漿中，Res可與脂蛋白、白蛋白結(jié)合，白蛋白是其主要的血漿載體。Res必須和蛋白結(jié)合和/或轉(zhuǎn)化才能保持高濃度，其療效與其和蛋白結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)的能力（選擇性和親和力）有關(guān)[17-19]。

4.2 Res的代謝場(chǎng)所和代謝產(chǎn)物

Res分子代謝廣泛，主要代謝場(chǎng)所為肝臟和腸道，肝細(xì)胞通過(guò)被動(dòng)吸收和載體介導(dǎo)兩種途徑攝取Res，但 Res的細(xì)胞內(nèi)蛋白靶點(diǎn)尚需進(jìn)一步研究。Res在肝細(xì)胞中的代謝產(chǎn)物為硫酸鹽和葡萄糖苷酸結(jié)合物，經(jīng)質(zhì)譜和核磁共振檢測(cè)，在體外培養(yǎng)的人類肝細(xì)胞中可以檢測(cè)出3種Res代謝產(chǎn)物，分別是trans-resveratrol-3-O-4'-O-disulfate（S1）、transresveratrol-4'-O-sulfate（S2）和 trans-resveratrol-3-O-sulfate （S3）。與人類重組磺酸基轉(zhuǎn)移酶（SULTs）共同孵育，發(fā)現(xiàn)S1幾乎全部由SULT1A1催化生產(chǎn)，只有極少部分由SULT1A2，1A3和1E1催化生成，S2選擇性地由SULT1E1催化生成，S3則因Res的濃度不同，由SULT1A1，SULT1E1，SULT1A2和1A3催化[20]。

而對(duì)單層培養(yǎng)的人結(jié)腸腺癌 Caco-2細(xì)胞檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，Res的代謝產(chǎn)物為 trans-resveratrol-4'-O-glucuronide （G1）、trans-resveratrol-3-O-glucuronide（G2）、trans-resveratrol-3-O-sulfate（S3），G1和G2的生成遵循米氏動(dòng)力學(xué)，而主要代謝產(chǎn)物S3的產(chǎn)生受Res濃度影響，高濃度Res抑制S3的產(chǎn)生。這可能是因?yàn)榇罅康腞es造成了代謝飽和或抑制，人體腸道可能存在同樣機(jī)制，因此影響了Res的吸收和生物利用度[21]。

4.3 Res的代謝與療效間的矛盾

盡管其生物利用度極低，Res在體內(nèi)的療效卻不可否認(rèn)，因此，有學(xué)者提出也許Res的代謝物才是其活性形式，盡管對(duì)藥物的修飾，包括轉(zhuǎn)化為葡萄糖苷酸和硫酸鹽，通常會(huì)降低細(xì)胞對(duì)藥物的通透性和有利于藥物的排出。然而，對(duì)CYPs的抑制作用被認(rèn)為是Res產(chǎn)生生理活性的途徑之一，而實(shí)驗(yàn)證明S3硫酸鹽卻并不能夠抑制CYPs[22]。

Res的血漿濃度極低（血漿峰濃度為 10～40nmol/L），而在體外實(shí)驗(yàn)中，能夠產(chǎn)生生物學(xué)活性需要的濃度為5～100μmol/L。因此在很多動(dòng)物試驗(yàn)中，Res的用量極大才能得出預(yù)期效果，甚至由于用量過(guò)大產(chǎn)生了毒性作用。由于代謝動(dòng)力學(xué)研究較為零星，對(duì)于Res療效的影響還缺乏說(shuō)服力，如將Res實(shí)際應(yīng)用于臨床，需要對(duì)其毒理學(xué)及代謝動(dòng)力學(xué)進(jìn)行系統(tǒng)的研究。

為了獲得生物利用度更高、療效更高的化合物，越來(lái)越多的學(xué)者致力于尋找Res的類似物或者對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行改造，以期小劑量應(yīng)用即可獲得理想效果。目前已通過(guò)化學(xué)合成、天然成分提取等方法發(fā)現(xiàn)了了多種Res類似物及衍生物，經(jīng)抗腫瘤活性實(shí)驗(yàn)，多種具有較強(qiáng)活性。

5 Res類似物和衍生物的抗腫瘤作用

5.1 羥基化類似物和衍生物的抗腫瘤作用

白皮杉醇（piceatannol，3,5,3',4'-四羥基反式二苯乙烯）是Res的3位羥基化類似物，最早發(fā)現(xiàn)于大戟屬植物lagascae中，也存在于葡萄、大黃等植物中，具有和Res類似的生物學(xué)作用。從結(jié)構(gòu)上看，piceatannol比Res多一個(gè)羥基，因而增加了水溶性；從功能上看，piceatannol對(duì)急性白血病和淋巴瘤細(xì)胞表現(xiàn)出細(xì)胞毒作用，對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞中也有抗增殖作用。對(duì)21例原發(fā)性兒童急性淋巴細(xì)胞性白血病的體外培養(yǎng)研究表明，piceatannol具有顯著地凋亡誘導(dǎo)作用，而Res則沒有顯示出抗增殖活性[24]。研究表明，在腫瘤細(xì)胞中過(guò)度表達(dá)的CYP1B1，可將Res催化羥化生成piceatannol和另外兩個(gè)尚未確證的單羥基和雙羥基白藜蘆醇類似物。說(shuō)明通過(guò)CYP1B1催化，Res可以轉(zhuǎn)化為具有化學(xué)預(yù)防作用和抗腫瘤活性的化合物[23]。

3 '-羥基Res能通過(guò)誘導(dǎo)神經(jīng)酰胺濃度增加而抑制無(wú)雄激素受體的前列腺癌細(xì)胞PC3增殖。與具有其他取代基的白藜蘆醇類似物相比，具有鄰羥基基團(tuán)的類似物具有3倍的HL-60白血病細(xì)胞增殖抑制活性，這可能是由于核苷酸還原酶抑制的解除以及dNTP的耗盡。

Matsuoka等[25]合成了6種Res類似物，進(jìn)行了CA、MN和SCE實(shí)驗(yàn)。其中3,4'-羥基反式二苯乙烯（3,4'-dihydroxy-trans-stilbene）和 4-羥基反式二苯乙烯（4-hydroxy-trans-stilbene）在3種實(shí)驗(yàn)中均顯示明顯的活性，兩種類似物的遺傳活性接近或者高于Res，而其他不具有4'羥基的類似物沒有活性。據(jù)此，Matsuoka等提出了結(jié)構(gòu)活性學(xué)說(shuō)，認(rèn)為 4'羥基是產(chǎn)生遺傳毒性所必需的基團(tuán)。Stivala等[26]則認(rèn)為反式結(jié)構(gòu)和4'位羥基均為Res增殖抑制及抗氧化作用所必需。

5.2 甲基化類似物和衍生物的抗腫瘤作用

順式 3,5,4'-三甲氧基二苯乙烯具有很強(qiáng)的抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖作用，能夠抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖、出芽、膠原浸入和形態(tài)形成（ID50=0.3～3.0μmol/L），其活性是Res的30～100倍，同時(shí)還能夠引起微管分解和微管蛋白解聚，是一個(gè)具有顯著血管靶向活性的抗血管生成劑[27]。Cardile等[28]對(duì)甲基化衍生物對(duì)DU-145人前列腺癌細(xì)胞的抑制生長(zhǎng)研究顯示，與Res相比，這些衍生物對(duì)細(xì)胞增殖抑制活性相當(dāng)或高于白藜蘆醇（GI50= 24.09μmol/L），對(duì)非致瘤性人的成纖維細(xì)胞顯示低或非常低的毒性，其中以Res的三甲基化產(chǎn)物活性最強(qiáng)。三甲氧基二苯乙烯類化合物 12（GI50=2.92μmol/L）和 19（GI50= 25.39μmol/L）的比較表明，取代基的位置對(duì)活性非常重要，這并不是因?yàn)榭臻g位阻的原因，而是因?yàn)槠浠瘜W(xué)性質(zhì)不同。

Zhang等[29]對(duì)其合成的Res甲氧基類似物的研究表明，與Res相比，具有鄰位甲氧基的類似物具有更強(qiáng)的醌還原酶（QR）的誘導(dǎo)活性，這與甲基能夠增加脂溶性并提高代謝穩(wěn)定性有關(guān)。此外，具有甲氧基的衍生物能同時(shí)激活輔酶Ⅰ和輔酶Ⅱ，而Res則很快被輔酶Ⅱ代謝失活。對(duì)系列甲氧基 Res衍生物的合成和活性研究表明，3,5-二甲氧基是二苯乙烯衍生物促凋亡活性的活性基團(tuán)。Pterosfilbene（紫檀芪，3,5-二甲氧基 4'-羥基二苯乙烯）是 Res的 3,5-二甲氧基天然類似物，具有抗氧化、抗細(xì)胞增殖、降血脂、抗炎、誘導(dǎo)凋亡、降血糖和抗真菌作用，其抗真菌活性為Res的5倍，對(duì)streptozotocen致糖尿病大鼠的降糖作用與二甲雙胍相近；Pterosfilbene能夠顯著抑制惡性黑色素瘤細(xì)胞B16M-F1增殖，抑制α-和λ- DNA聚合酶活性，并抑制猴病毒40（SV40）DNA的復(fù)制，其活性接近aphidicolin（蚜腸霉素）[30]。

3 '-hydroxypterostilbene（3'-羥基紫檀芪）是piceatannol的 3,5-二甲氧基天然類似物，在相同濃度下，其誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的能力遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò) Res，且對(duì)正常造血干細(xì)胞幾乎沒有任何細(xì)胞毒性。3,5-二甲氧基為其活性所必需[31]。

5.3 其他取代基類似物和衍生物的抗腫瘤作用

陳國(guó)良等[32]將Res的A環(huán)上3、5位羥基甲基化，B環(huán)上羥基用硝基、二甲胺基或吡啶等雜環(huán)替代合成了一些Res衍生物，發(fā)現(xiàn)大部分衍生物有較好的抗TPA促癌作用，其中3,5-二甲氧基-3',4'-亞甲氧基二苯乙烯的作用強(qiáng)于Res；Yang等[33]以磺胺基取代Res A環(huán)上的羥基，合成了6種化合物，其中兩種化合物對(duì)BT-549乳腺癌細(xì)胞和HT-29結(jié)腸癌細(xì)胞具有選擇抑制作用，同時(shí)結(jié)構(gòu)-活性研究還認(rèn)為，以磺胺基取代Res A環(huán)上的羥基，大大提高了Res的細(xì)胞毒性以及選擇性。

目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)多種Res類似物和衍生物，按照取代基不同，大致可分為甲基化、羥基化、其他取代基衍生物，每一類衍生物都發(fā)現(xiàn)了具有抗腫瘤作用的化合物，其中多種化合物抗腫瘤作用顯著強(qiáng)于Res，具有良好的開發(fā)前景。對(duì)于影響其生物活性的結(jié)構(gòu)性決定因素，也做了較多討論，包括4'羥基、甲氧基、分子內(nèi)氫鍵以及數(shù)量和位置、空間立體結(jié)構(gòu)等均被認(rèn)為可能影響其抗腫瘤活性，但究竟哪些結(jié)構(gòu)起到了關(guān)鍵作用尚不明確。

6 Res類似物和衍生物的抗腫瘤作用機(jī)制

Savioa等[34]的的研究發(fā)現(xiàn)，與Res相比，4,4'-二羥基反式二苯乙烯抗增殖活性高于 Res，而且具有不同的機(jī)制，4,4'-二羥基反式二苯乙烯顯著增加G1期細(xì)胞積累，而Res阻礙G1/S期過(guò)渡。在體外實(shí)驗(yàn)中，兩種化合物都能夠抑制DNA聚合酶δ的活性，但4,4'-二羥基反式二苯乙烯不影響DNA聚合酶 α活性。4,4'-二羥基反式二苯乙烯提高P21CDKN1A和p53蛋白水平，而Res導(dǎo)致S期限制點(diǎn)蛋白Chk1的磷酸化。

Chen等[35]合成了一種 Res脂肪酸，并發(fā)現(xiàn)，Res脂肪酸有效抑制TLR2的表達(dá)，并通過(guò)對(duì)TLR2抑制降低血清磷酸化Akt和磷酸化糖原合酶激酶3β（GSK3β）水平，因此阻斷TLR2介導(dǎo)的正常人胚胎腎HEK293細(xì)胞凋亡。因此認(rèn)為，Res脂肪酸通過(guò)抑制Akt/ GSK3β相關(guān)的TLR2途徑參與細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)。

Ciolino等[36]認(rèn)為，與Res類似，piceatannol通過(guò)抑制雌激素CYP1A1，CYP1A2 和CYP1B1活性發(fā)揮作用，而且其對(duì)CYP1B1的抑制作用更強(qiáng)。

目前對(duì)于Res類似物和衍生物的抗腫瘤作用機(jī)制研究相對(duì)較少，已有的研究結(jié)果顯示，不同的類似物和衍生物抗腫瘤作用機(jī)制與Res不盡相同，彼此間也各不相同。

7 Res及其類似物和衍生物的制備

7.1 從天然產(chǎn)物中提取

常見的提取方法包括：超聲波提取法、酶提取法、微波輔助提取法、纖維素酶提取法、超臨界流體萃取法等。提取出的Res及其類似物和衍生物為混合物，需要進(jìn)一步純化才能得到高純度的產(chǎn)物。常見的純化方法有：有機(jī)溶劑萃取、硅膠柱色譜、高效液相色譜、薄層色譜、大孔吸附樹脂等。近年來(lái)通過(guò)新的分離提純方法，得到了更多種類的天然Res類似物和衍生物。如，He等[37]采用高速逆流色譜法進(jìn)行分離純化，從葡萄中得到了3種Res寡聚體；Guebailia等[38]采用反相板制備HPLC并結(jié)合柱層析法分離得到了Res及5種衍生物。純化后的Res及其類似物和衍生物純度較高，為天然綠色產(chǎn)品，目前市場(chǎng)上出售的產(chǎn)品多數(shù)為天然產(chǎn)物提取物。

7.2 化學(xué)合成

由于從天然產(chǎn)物中提取Res及其類似物和衍生物產(chǎn)量低、成本高，同時(shí)也為了得到更多種類的衍生物和類似物，利用化學(xué)法合成Res及其類似物和衍生物得到了廣泛開展。主要包括：芳香醛和乙酸酐反應(yīng)合成肉桂酸（形成雙鍵）的Perkin反應(yīng)；羰基與膦葉立德（W ittig試劑）發(fā)生親核加成反應(yīng)、形成雙鍵的W ittig反應(yīng)以及用簡(jiǎn)單易得的膦酸酯代替磷葉立德的W ittig-Horner 反應(yīng)；在鈀催化下有機(jī)鹵化物或三氟磺酸酯和烯烴之間偶聯(lián)的 Heck 反應(yīng)；以及利用碳負(fù)離子與羰基化合物進(jìn)行縮合反應(yīng)等[39]。

化學(xué)法合成路線長(zhǎng)、產(chǎn)品收率相對(duì)低，而且所使用的原料多數(shù)為有毒有害物質(zhì)，目前基本處于實(shí)驗(yàn)室研究階段，但已經(jīng)發(fā)現(xiàn)多種合成Res類似物和衍生物具有較強(qiáng)的體外抗腫瘤作用，具有繼續(xù)研究的價(jià)值。

7.3 生物合成

生物合成是將細(xì)胞作為生物反應(yīng)器，通過(guò)調(diào)控細(xì)胞的代謝，提高Res及其衍生物和類似物含量，然后通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)獲得高產(chǎn)細(xì)胞，目前Res的生物合成大部分通過(guò)花生和葡萄細(xì)胞懸浮培養(yǎng)進(jìn)行。通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)將Res及其類似物和衍生物的合成酶基因?qū)氩缓铣蒖es及其類似物和衍生物的物種，如酵母菌、大腸桿菌、煙草、胡蘿卜等，培養(yǎng)高產(chǎn)植株，可以獲得更多產(chǎn)品[39]。

生物合成成本低，產(chǎn)量高，不破壞資源和環(huán)境，隨著生物技術(shù)的迅速發(fā)展，利用生物法獲得Res及其類似物和衍生物將具有更加廣闊的前景。

8 結(jié) 語(yǔ)

綜上所述，關(guān)于Res及其衍生物和類似物的研究范圍廣泛，數(shù)量龐大，也取得了豐富的成果，但關(guān)于其生物作用機(jī)制、結(jié)構(gòu)與活性的關(guān)系、毒理學(xué)、藥代動(dòng)力學(xué)研究結(jié)果仍不明確，動(dòng)物體內(nèi)試驗(yàn)資料缺乏。而且目前的研究雖然涉及的腫瘤細(xì)胞種類和化合物種類繁多，但均相對(duì)孤立，重復(fù)性差，難以互相印證，作為一類很有希望的的新型抗腫瘤藥物，還需要對(duì)Res及其衍生物和類似物開展更為系統(tǒng)的研究。

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