祝艷華，陳 顥，張國(guó)斌，張 忠

（1.甘肅畜牧工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院，武威 733006；2.甘肅省綿羊繁育技術(shù)推廣站）

幾種不同措施對(duì)高寒牧區(qū)羔羊大腸桿菌病的防治效果研究

祝艷華1，陳 顥2，張國(guó)斌2，張 忠1

（1.甘肅畜牧工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院，武威 733006；2.甘肅省綿羊繁育技術(shù)推廣站）

應(yīng)用幾種不同防治措施對(duì)不同年齡階段羔羊的大腸桿菌病進(jìn)行預(yù)防及臨床治療試驗(yàn)。結(jié)果表明：中西藥結(jié)合法對(duì)羔羊大腸桿菌病的防治效果均最佳，與單獨(dú)使用抗菌素或中藥相比，差異顯著（P≤0.05）；益生菌制劑雖治療效果不佳，但預(yù)防效果與單獨(dú)使用抗菌素、中藥相比，差異顯著（P≤0.05）。

中西藥；益生菌；羔羊；大腸桿菌；防治

大腸桿菌病是由大腸桿菌引起的家畜腸道傳染性疾病，本病不僅是條件性病原菌，常因環(huán)境、氣候以及飼養(yǎng)管理的改變而引起動(dòng)物發(fā)病，而且還可通過病畜的排泄物，主要是糞便污染飲水、飼料等經(jīng)消化道感染，羊不分年齡大小都易感，臨床上以嚴(yán)重腹瀉和敗血癥為特征［1］。自2002年以來在甘肅省肅南高寒地區(qū)該病頻繁發(fā)生，且羔羊發(fā)生較多［2］。特別在2002—2004年期間甘肅省綿羊繁育技術(shù)推廣站及周邊牧區(qū)羔羊大腸桿菌病的發(fā)病率達(dá)15%，致死率高達(dá)95%［2］。羊大腸桿菌病的發(fā)生造成羔羊數(shù)量、種用和商品價(jià)值降低，嚴(yán)重影響了當(dāng)?shù)啬撩?/p>

的收入［3］。為了降低該病造成的損失，本試驗(yàn)通過幾種不同防治方案的比較分析，最終篩選出最佳防治方案,以期為進(jìn)一步提高本病的防治效果提供臨床參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥物 抗菌素類（環(huán)丙沙星、卡那霉素）、中藥方劑（配方：白頭翁10g，黃連10g，秦皮12g，生山藥50g，山萸肉12 g，訶子肉10 g，伏苓10 g，白術(shù)15 g，白芍10 g，干姜5 g，甘草6 g）、益生菌制劑（購(gòu)自楊凌益佳泰生物科技有限公司）。

1.1.2 動(dòng)物 甘肅省綿羊繁育技術(shù)推廣站羊場(chǎng)不同日齡的羔羊。

1.1.3 儀器 生化培養(yǎng)箱（型號(hào)：SPX-250Y）、超凈工作臺(tái)（型號(hào)：BHC-1000IIB2）、高壓滅菌器（型號(hào)：LDZX-30FBS）、顯微鏡（OLYMPUS型號(hào)：CX31-12C04）、冰箱（型號(hào)：DW-40L525）、離心機(jī)（型號(hào)：DT5-2B）等。

1.1.4 培養(yǎng)基 肉湯培養(yǎng)基，營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，麥康凱瓊脂培養(yǎng)基，三糖鐵培養(yǎng)基（TSI），伊紅-美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基（EMB）。

1.2 方法

1.2.1 預(yù)防試驗(yàn)

1.2.1.1 分組 2009年4月—2010年6月隨機(jī)從甘肅省綿羊繁育技術(shù)推廣站羊場(chǎng)選擇1周齡以內(nèi)、1～3周齡和3～6周齡各階段臨床健康的羔羊進(jìn)行預(yù)防試驗(yàn)，共計(jì)375只。根據(jù)試驗(yàn)先后分別記為A～E組，每組內(nèi)分別設(shè)3個(gè)年齡階段組。試驗(yàn)分組情況見表1。

表1 羔羊大腸桿菌病臨床預(yù)防試驗(yàn)分組 只

1.2.1.2 給藥方法 A組（中藥組）：每只羔羊灌服5 mL，2次/d，連用3 d；B組（西藥組）：健康羔羊肌肉注射乳酸環(huán)丙沙星0.2 mL/kg體重，2次/d，連用3 d；C組（中西結(jié)合組）：給藥方法是將A、B組的方法同時(shí)使用；D組（益生菌制劑組）：在飼料中添加10%的益生菌制劑（活菌總數(shù)≥50×108cfu/g）；E組（空白對(duì)照組）：不使用任何藥物。

試驗(yàn)結(jié)束后，繼續(xù)觀察1周。試驗(yàn)期間記錄各組的發(fā)病數(shù)、死亡數(shù)，并對(duì)病、死羔羊進(jìn)行癥狀觀察、尸體剖檢、細(xì)菌分離鑒定、動(dòng)物試驗(yàn)等大腸桿菌病的確診。

1.2.2 臨床治療試驗(yàn)

1.2.2.1 診斷方法

1.2.2.1.1 細(xì)菌培養(yǎng) 無(wú)菌采集病死羊心、肝、脾、淋巴結(jié)等組織接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上，經(jīng)37℃培養(yǎng)36 h后生長(zhǎng)出圓形光滑、隆起且濕潤(rùn)的紅色菌落。伊紅美蘭瓊脂平板長(zhǎng)出金屬光澤的菌落。

1.2.2.1.2 顯微鏡檢查 無(wú)菌采取死羊的心、肝、脾、淋巴結(jié)及上述培養(yǎng)的單個(gè)純菌落分別進(jìn)行涂片再用美藍(lán)染色法染色鏡檢，可見大小一致的革蘭氏陰性短桿菌。

1.2.2.1.3 生化實(shí)驗(yàn) 將純培養(yǎng)物分別接種于各種糖培養(yǎng)基、甲基紅、枸櫞酸鹽、三硝酸鹽等生化培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)24～48 h。生化反應(yīng)結(jié)果：待檢菌在蔗糖、麥芽糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇培養(yǎng)基中產(chǎn)酸產(chǎn)氣，甲基紅、靛基質(zhì)試驗(yàn)陽(yáng)性，硫化氫、V-P、枸櫞酸鹽、硝酸鹽試驗(yàn)陰性。

通過上述實(shí)驗(yàn)室診斷方法可確診為大腸桿菌病。

1.2.2.2 試驗(yàn)分組及用藥方法 對(duì)163只患病羔羊分階段分組，在常規(guī)隔離消毒的基礎(chǔ)上，分別使用不同的給藥方案進(jìn)行治療，具體分組及主要治療方法如下：

Ⅰ組：患病羊肌肉注射乳酸環(huán)丙沙星0.2 mL/kg體重，2次/d，連用3 d。

Ⅱ組：患病羔羊用中藥治療，每只羔羊灌服10 mL，2次/d，連用3 d。

Ⅲ組：患病羊肌肉注射乳酸環(huán)丙沙星0.2 mL/kg體重，2次/d，連用3 d；同時(shí)患病羔羊灌服10mL中藥煎劑，2次/d，連用3d。

Ⅳ組：在發(fā)病羔羊的濃縮料中添加30%的益生菌制劑（活菌總數(shù)≥50×108cfu/g），連用3 d。

注意：混飼藥是自由采食，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.2.2.3 中藥制劑的制備 采用傳統(tǒng)水煎法，將藥物用蒸餾水洗凈，浸泡，加8～10倍量蒸餾水煎煮30 min，2次，合并濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀75℃濃縮至1 g/mL，滅菌，4℃保存［4］。

1.2.2.4 療效評(píng)價(jià)指標(biāo) 用藥后，記錄發(fā)病數(shù)、治愈率、死亡率等進(jìn)行療效評(píng)價(jià)。

1）死亡率：在治療期間，羔羊出現(xiàn)大腸桿菌病的典型癥狀并死亡，尸體剖檢有典型的特征性病變，并從心、肝、脾、淋巴結(jié)等組織中分離出大腸桿菌，判斷為感染死亡。

2）治愈率：凡在治療期間，經(jīng)用藥后病羊精神狀態(tài)、食欲恢復(fù)正常，下痢癥狀消失，體重增加，均屬治愈，根據(jù)治愈羊只數(shù)計(jì)算治愈率。

2 結(jié)果與分析

2.1 預(yù)防試驗(yàn)結(jié)果

由表2可知，各用藥組與空白對(duì)照組相比，差異均顯著（P<0.05）。試驗(yàn)組中益生菌制劑組與中西藥結(jié)合組保

護(hù)率較高，中藥組次之，保護(hù)效果最差的是抗生素組。

表2 試驗(yàn)期間各組羔羊大腸桿菌病的發(fā)病率

2.2 治療試驗(yàn)結(jié)果

對(duì)163只患病羔羊采用不同的治療方法，經(jīng)過一定時(shí)間治療，各組的治療效果見表3。由表3可以得到以下結(jié)論：Ⅲ組治療效果最好，Ⅰ組較Ⅲ組效果差，Ⅱ組又較Ⅰ組效果差，而療效最差的是Ⅳ組。統(tǒng)計(jì)學(xué)表明，各組間差異均顯著（P<0.05）。

表3 各種治療方案的治療效果

3 討論與分析

1）預(yù)防試驗(yàn)結(jié)果表明，應(yīng)用中西醫(yī)結(jié)合和益生菌制劑對(duì)羔羊大腸桿菌病的預(yù)防效果優(yōu)于單純應(yīng)用中藥或西藥。中西醫(yī)結(jié)合預(yù)防動(dòng)物疾病的效果現(xiàn)已被業(yè)界一致認(rèn)可，并廣泛應(yīng)用于動(dòng)物臨床，但相比純中藥預(yù)防缺點(diǎn)在于藥物殘留對(duì)動(dòng)物及人易造成危害，產(chǎn)生耐藥性從而降低預(yù)防效果。故益生菌制劑的應(yīng)用是值得推廣的預(yù)防措施。

2）治療試驗(yàn)結(jié)果表明，采用中藥組方結(jié)合抗菌素（環(huán)丙沙星）治愈率高于單純應(yīng)用中藥或西藥，而預(yù)防效果最佳的益生菌制劑卻治愈率最低。說明益生菌在提高免疫力，維持消化腸道微生態(tài)平衡方面優(yōu)勢(shì)明顯，但在直接殺滅病原，尤其是發(fā)病后應(yīng)用效果不好。所以中西藥結(jié)合方式是當(dāng)?shù)馗嵫虼竽c桿菌病治療的優(yōu)選措施，西藥和中藥二者聯(lián)合互補(bǔ)、相互促進(jìn)，療效很好［5］。

3）本試驗(yàn)中選用的中藥方劑配合抗菌素在防治羔羊大腸桿菌病中起到了很好的效果，該組方中白頭翁、黃連、秦皮、訶子、白芍等對(duì)大腸桿菌有直接抑制作用，能增強(qiáng)機(jī)體對(duì)病原微生物的抵抗力［6-7］；山藥、山萸肉、白術(shù)、茯苓、甘草等有增強(qiáng)機(jī)體免疫力的作用［7］；干姜能抑制異常發(fā)酵［7］。以上中藥既起到了良好防治該病的作用，而且減少了抗菌素的用量，在一定程度上解決了大量單獨(dú)應(yīng)用抗菌素帶來的耐藥性、獸藥殘留問題，保證了動(dòng)物健康，提高了動(dòng)物福利，保障了養(yǎng)羊業(yè)健康發(fā)展。

4）益生菌制劑是當(dāng)前人類和動(dòng)物臨床研究的熱點(diǎn)，在維持正常消化功能、增強(qiáng)免疫力、抑制病原菌、提高動(dòng)物生產(chǎn)性能方面具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)［8］。本試驗(yàn)結(jié)果也表明，雖然益生菌制劑治療羔羊大腸桿菌病的效果不及其他藥物，但其預(yù)防效果非常好，所以規(guī)模化羊場(chǎng)應(yīng)用益生菌制劑預(yù)防大腸桿菌病，且具有廣闊的前景。

5）大腸桿菌病是危害養(yǎng)羊業(yè)的一種常發(fā)疾病，尤其是在已發(fā)生過該病的羊場(chǎng),大腸桿菌將成為常在菌，長(zhǎng)期存在，在一定的氣候條件下，尤其初春季節(jié)，發(fā)病率很高，危害嚴(yán)重。根據(jù)本試驗(yàn)結(jié)果，在羊場(chǎng)（舍）加強(qiáng)生物安全措施的同時(shí),合理應(yīng)用益生菌制劑預(yù)防羔羊大腸桿菌病，綜合優(yōu)勢(shì)明顯。一旦發(fā)病，仍需應(yīng)用敏感抗菌素配合中藥及時(shí)治療才能收到好的效果。

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S858.26

A

2095-3887（2014）04-0055-03

10.3969/j.issn.2095-3887.2014.04.014

2014-05-22

甘肅畜牧工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院院列專項(xiàng)（2013GMGY008）

祝艷華（1977-），女，講師，碩士。

張忠，Email：zhzh228@126.com。