劉 亮，丁麗娜，萬(wàn)路平，陳東林△，陳榮華，吳永秀

(1.遵義醫(yī)藥高等專科學(xué)校，貴州遵義 563002;2.遵義市果蔬工作站)

苗藥觀音草總皂苷水提取工藝的研究*

劉 亮1，丁麗娜1，萬(wàn)路平1，陳東林1△，陳榮華2，吳永秀2

(1.遵義醫(yī)藥高等專科學(xué)校，貴州遵義 563002;2.遵義市果蔬工作站)

目的:優(yōu)化觀音草總皂苷的水提取工藝。方法:采用正交試驗(yàn)法，以總皂苷的含量為考察指標(biāo)。結(jié)果:薯蕷皂苷的線性范圍是4-24μg/ml，r=0.9995。各因素對(duì)總皂苷得率的影響順序?yàn)樘崛〈螖?shù)＞液料比(ml/g)＞提取溫度＞提取時(shí)間，其中液料比和提取次數(shù)對(duì)總皂苷得率具有顯著影響(P＜0.05)。結(jié)論:觀音草中總皂苷的最佳提取工藝為:提取溫度70℃，提取時(shí)間30min，液料比12:1(ml/g)，提取次數(shù)3次。

觀音草;總皂苷;提取工藝

觀音草Reineckia carnea (Andr.) Kunth是百合科植物吉祥草的帶根全草，是苗族地區(qū)常用藥之一，是著名的苗族藥，也是我省“十二五”重點(diǎn)發(fā)展的六大苗藥品種之一。苗醫(yī)理論認(rèn)為觀音草藥性冷，質(zhì)征為氣微味甜，入熱經(jīng)，走肺、肝二架，表、中、里三關(guān)。目前，觀音草主要作為止咳化痰藥使用，具有清肺止咳、理血、解毒的功效。我省百靈企業(yè)集團(tuán)制藥有限公司以觀音草為主藥，生產(chǎn)的百靈牌“咳速停糖漿”和“咳速停膠囊”享譽(yù)全國(guó);由遵義萬(wàn)才藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的“復(fù)方吉祥草含片”、由貴州和仁堂制藥有限公司生產(chǎn)的“咳清膠囊”也是以觀音草為主藥的苗藥品種。這些藥物在市場(chǎng)上反應(yīng)良好，占有一定的市場(chǎng)份額。通過(guò)查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，觀音草尚無(wú)水提取工藝優(yōu)選方面的研究，而藥廠一般以水為提取溶劑提取觀音草中的總皂苷。本研究旨在為水提取法提取觀音草中總皂苷在工業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用積累參數(shù)，為觀音草的進(jìn)一步開發(fā)、利用提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1 儀器與試藥

Aquelix 5型實(shí)驗(yàn)室高純水系統(tǒng)(重慶市金富科技發(fā)展有限公司)，UV2501紫外分光光度計(jì)(日本島津公司)，DKS-26型電熱恒溫水浴鍋(寧波江南儀器廠)，F(xiàn)A2004B型電子天平(上海越平科學(xué)儀器有限公司)，Senco R系列旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海申生科技有限公司)，予華牌SHZ-DⅢ型循環(huán)水真空泵(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司)，F(xiàn)W200型高速萬(wàn)能粉碎機(jī)(北京科偉永興儀器有限公司)。

薯蕷皂苷對(duì)照品，上海華壹生物科技有限公司(批號(hào):19057-60-4);觀音草藥材采于貴州遵義，經(jīng)遵義醫(yī)藥高等專科學(xué)校張學(xué)愈副教授鑒定為百合科植物觀音草Reineckia carnea (Andr.) Kunth;其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 本研究以觀音草中總皂苷的含量為指標(biāo)，在查閱文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上[1-6]，選擇影響水提率的提取溫度、提取時(shí)間、液料比、提取次數(shù)四個(gè)因素為考察指標(biāo)，采用L9(34)正交表進(jìn)行試驗(yàn)。正交試驗(yàn)因素水平見表1:

2.2 供試品溶液的制備 精密稱取觀音草粗粉1g，分別按正交表L9(34)在恒溫水浴鍋中進(jìn)行提取，提取液抽濾，合并濾液并轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中加水稀釋至刻度，搖勻。準(zhǔn)確吸取10ml于分液漏斗中，用水飽合正丁醇分3次萃取，每次15ml，正丁醇萃取液再用水飽和正丁醇20ml洗滌，減壓回收正丁醇至干，殘?jiān)眉状既芙獠⒍ㄈ萦?5ml容量瓶中，作為供試品溶液。

2.3 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取薯蕷皂苷對(duì)照品1.2mg，置于10ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 分別精密移取薯蕷皂苷對(duì)照品溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0和1.2ml置于10ml具塞試管內(nèi)，揮干甲醇，再分別加入5%香草醛冰醋酸溶液0.2ml和高氯酸0.8ml，搖勻，密塞。60℃水浴顯色15min，取出后立即用冰水冷卻5min，再加入5ml冰醋酸稀釋，搖勻，靜置10min，于460nm處測(cè)定吸光度。以吸光度(A)為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度(C)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸?；貧w方程為A=0.019121C＋0.006133，r=0.9995，結(jié)果表明，薯蕷皂苷在4-24μg/ml范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

2.5 供試品溶液的測(cè)定 分別精密吸取供試品溶液1.0ml，按2.4的操作方法顯色，于460nm處測(cè)定吸光度。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及數(shù)據(jù)處理結(jié)果見表2，方差分析結(jié)果見表3。

表2 L9(34)正交試驗(yàn)結(jié)果

表3 方差分析表

2.6 結(jié)果與方差分析 由表2分析可知，觀音草總皂苷最佳的提取工藝為A3B1C3D3。由表3方差分析可知，各因素對(duì)總皂苷得率的影響順序?yàn)镈＞C＞A＞B，其中液料比和提取次數(shù)對(duì)總皂苷得率具有顯著影響(P＜0.05)。因此，考慮節(jié)約成本等實(shí)際情況，提取工藝調(diào)整為A1B1C3D3，即提取溫度70℃，提取時(shí)間30min，液料比12:1(ml/g)，提取次數(shù)3次。

3 討論

皂苷分子結(jié)構(gòu)中無(wú)共軛雙鍵，在紫外可見光區(qū)無(wú)特征性吸收峰，可以利用顯色反應(yīng)后在可見光范圍產(chǎn)生的特征性吸收峰。根據(jù)前期研究文獻(xiàn)，結(jié)合紫外法的顯色特點(diǎn)，本研究以薯蕷皂苷為對(duì)照品，采用香草醛-高氯酸法顯色，對(duì)觀音草中總皂苷的含量進(jìn)行測(cè)定，顯色過(guò)程中嚴(yán)格控制溫度和時(shí)間。

常用的提取皂苷的方法有水提法，醇提法。本研究在查閱文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，綜合考慮總皂苷的提取率、成本及環(huán)保等因素，最終決定以水為提取溶劑進(jìn)行正交試驗(yàn)，優(yōu)化觀音草總皂苷的提取工藝。結(jié)果表明，液料比及提取次數(shù)對(duì)總皂苷的含量有顯著影響，考慮節(jié)約成本等實(shí)際情況，確定最佳的工藝為提取溫度70℃、提取時(shí)間30min、液料比12:1(ml/g)、提取次數(shù)3次。

[1]王桂紅，肖伊，胡俊杰，等.理氣消癭片水提取工藝研究[J].湖北中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，13(1):23-26.

[2]劉向前.三七總皂苷水提取工藝的優(yōu)化試驗(yàn)[J].中國(guó)藥師，2006，9(3):215-216.

[3]王店云，單進(jìn)軍，韓新民.正交試驗(yàn)法優(yōu)選安神定志靈的水提取工藝[J].遼寧中醫(yī)雜志，2014，41(6):1249-1251.

[4]賀葵邦，王英姿，張春泥，等.正交試驗(yàn)優(yōu)選地龍水提取工藝[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19(6):33-35.

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[6]李霞，梁惠珍，門九章.正交試驗(yàn)優(yōu)選雄芍顆粒的水提取工藝[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19(5):40-41.

(基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)欄目編輯:陳志宏)

STUDY ON WATER EXTRACTION TECHNIQUE OF TOTAL SAPONINS IN REINECKIA CARNEA (ANDR.) KUNTH

LIU Liang, DING Li-na, WAN Lu-ping, et al
(Zunyi Medical and Pharmaceutical College, Guizhou Zunyi 563002, China)

Objective:To optimize the water extraction technique of total saponins in Reineckia carnea (Andr.) Kunth.Methods:The orthogonal optimization experiment was used in this study with the total saponins content in Reineckia carnea (Andr.) Kunth as the index.Results:The linear range of dioscin was 4-24μg/ml (r=0.9995). The sequence of every factor for rate of the total saponins in Reineckia carnea (Andr.) Kunth was extraction times＞liquid-to-solid ratio (ml/g)＞extraction temperature＞extraction duration. Among them, the liquid-to-solid ratio and extraction times had significant influence on total saponins yield.Conclusions:The best extraction technique of total saponins in Reineckia carnea (Andr.) Kunth is extraction temperature 70℃, extraction duration 30 minutes,liquid-to-solid ratio 12:1 (ml/g), extraction 3 times.

Reineckia carnea (Andr.) Kunth; Total saponins; Extraction technique

R917

A

1004-6879(2014)06-0470-02

*遵義市科技局、遵義醫(yī)藥高等專科學(xué)校聯(lián)合科技計(jì)劃項(xiàng)目(遵市科合社字【2012】18號(hào))，遵義市紅花崗區(qū)科學(xué)技術(shù)項(xiàng)目(遵紅科合社字【2012】06號(hào))

△ 通訊作者

2014-04-29)