江和基 曾新斌 羅 剛 黃志堅(jiān)

（福建農(nóng)林大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院 福建省動(dòng)物藥物工程實(shí)驗(yàn)室，福州 350002）

夏季高溫應(yīng)激下牡蠣粗多糖對(duì)公豬生精功能的影響

江和基 曾新斌 羅 剛 黃志堅(jiān)＊

（福建農(nóng)林大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院 福建省動(dòng)物藥物工程實(shí)驗(yàn)室，福州 350002）

夏季高溫情況下，選擇某豬場(chǎng)8頭種公豬，隨機(jī)分為2組，即牡蠣粗多糖試驗(yàn)組、對(duì)照組，對(duì)試驗(yàn)期間公豬的精液量、精子活力進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，并采集試驗(yàn)前后精液，檢測(cè)精子密度、精子畸形率、精液抗氧化MDA、SOD、GSH-PX指標(biāo)。結(jié)果：牡蠣粗多糖試驗(yàn)組公豬的射精量、精子活力比對(duì)照組都有一定水平提高，但差異不顯著(P＞0.05)；牡蠣粗多糖試驗(yàn)組的精子密度增加0.32億個(gè)/mL，差異不顯著（P＞0.05），精子畸形率減少了4.26%，差異顯著（P＜0.05）；試驗(yàn)組精液 SOD、GSH-PX顯著提高（P＜0.05）；MDA含量極顯著降低（P＜0.01）。結(jié)論：在夏季高溫情況下，牡蠣粗多糖對(duì)精液抗氧化指標(biāo)和種公豬的生精功能有較明顯改善作用。

牡蠣粗多糖 豬 生精功能

母豬的繁殖性能與豬場(chǎng)的生產(chǎn)成績(jī)息息相關(guān)，當(dāng)代養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展已經(jīng)朝著規(guī)?；?、集約化方向發(fā)展，目前規(guī)模豬場(chǎng)普遍都采用人工授精方式進(jìn)行母豬的配種，因此，種公豬的精液品質(zhì)至關(guān)重要。在夏季高溫應(yīng)激情況下，種公豬的精液質(zhì)量會(huì)不同程度受到影響。試驗(yàn)以牡蠣粗多糖為試驗(yàn)原料，以種公豬為試驗(yàn)動(dòng)物，探討牡蠣粗多糖對(duì)改善精液抗氧化指標(biāo)和公豬生精功能的影響，為養(yǎng)豬生產(chǎn)服務(wù)。

1 材 料

1.1 試驗(yàn)試劑 丙二醛、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽測(cè)定試劑盒，購(gòu)置南京建成生物工程研究。

1.2 主要儀器 移液槍；恒溫水浴鍋；UV-3200紫外可見分光光度計(jì)；普通顯微鏡；倒置顯微鏡；載玻片；染色液等。

2 方 法

2.1 試驗(yàn)分組 選擇福建南平某豬場(chǎng)8頭公豬，隨機(jī)分成2組，每組4頭。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼料，試驗(yàn)組在基礎(chǔ)飼料中添加飼喂0.8%牡蠣粗多糖，試驗(yàn)期為60 d（2010年6月下旬到9月），數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)從飼喂15 d后開始進(jìn)行。

2.2 日常管理方法 按照豬場(chǎng)生產(chǎn)程序，每2～3 d采集公豬精液1次，并于試驗(yàn)前后采集各組3頭公豬的精液。

2.3 測(cè)定方法 丙二醛、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽測(cè)定試劑盒按南京建成試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行；其他指標(biāo)的檢測(cè)按以下方法進(jìn)行。

2.3.1 精液量 統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)組及對(duì)照組每頭公豬每次的射精量。

2.3.2 精子活力 顯微鏡載物臺(tái)、載玻片及蓋玻片在檢查前預(yù)熱至37～39℃，用取樣器取10 μL或15 μL精液，注在預(yù)熱后的載玻片中間，并蓋上蓋玻片。用100倍或400倍顯微鏡檢測(cè)精子活力。精子活力評(píng)分方法見表1。

表1 精子活力5級(jí)評(píng)分方法

2.3.3 精子密度 精子密度的測(cè)定采用血球計(jì)數(shù)板法，首先將計(jì)數(shù)板放在載物臺(tái)上，用取樣器吸取25 μL稀釋后精液（稀釋40倍），滴入到計(jì)數(shù)板上，再用蓋玻片進(jìn)行推片，最后置于顯微鏡下找到計(jì)算室，選擇有代表性的五個(gè)方格，依下列已簡(jiǎn)化的公式計(jì)算原精子密度：精子密度（億個(gè)/mL）＝五個(gè)方格總精子數(shù)×0.02。

2.3.4 精子畸形率統(tǒng)計(jì) 按常規(guī)方法染色，制作精液載玻片。將載玻片放在400倍顯微鏡下觀察若干個(gè)視野的150個(gè)精子，計(jì)算出精子畸形率，計(jì)算公式：畸形率（%）＝畸形精子數(shù)/150×100%。

2.4 數(shù)據(jù)處理與分析 對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果采用Office 2003 Excell以及SPSS16.0單因子方差 （One-Way ANOVA）軟件統(tǒng)計(jì)與分析，數(shù)據(jù)結(jié)果以±SE表示。

3 結(jié)果

3.1 夏季高溫應(yīng)激下牡蠣粗多糖對(duì)公豬射精量及精子活力的影響 對(duì)試驗(yàn)期內(nèi)試驗(yàn)組與對(duì)照組射精量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，評(píng)估精子活力，結(jié)果見表2。試驗(yàn)組與對(duì)照精液量及精子活力差異都不顯著 （P＞0.05），但是試驗(yàn)組與對(duì)照組比較，可以看出試驗(yàn)組的射精量、精子活力比對(duì)照組都有一定水平的提高，說(shuō)明牡蠣粗多糖對(duì)提高公豬的射精量及活力有一定的效果。

表2 夏季高溫應(yīng)激下牡蠣粗多糖對(duì)公豬射精量及精子活力的影響

3.2 夏季高溫應(yīng)激下牡蠣粗多糖對(duì)公豬精子密度、畸形率的影響 分別采集試驗(yàn)前后試驗(yàn)組與對(duì)照組精液，測(cè)定精子密度與畸形率，結(jié)果見表3、圖1。試驗(yàn)前，試驗(yàn)組與對(duì)照組的精子密度和精子畸形率差異均不顯著（P＞0.05）；試驗(yàn)結(jié)束后，試驗(yàn)組的精子密度比對(duì)照組增加了0.32億個(gè)/mL，但差異不顯著（P＞0.05），精子畸形率減少了4.26%，差異顯著 （P＜0.05）。從圖1可以看出，對(duì)照組（A、B）精子出現(xiàn)精子畸形（精子斷尾）的概率比試驗(yàn)組（C、D）大?？梢?，公豬飼喂牡蠣粗多糖后，對(duì)提高精子密度和降低精子畸形率都有一定積極影響。

表3 夏季高溫應(yīng)激下牡蠣粗多糖對(duì)公豬精子密度、畸形率的影響

圖1 試驗(yàn)組與對(duì)照組精子的比較

3.3 夏季高溫應(yīng)激下牡蠣粗多糖對(duì)公豬精液抗氧化指標(biāo)的影響 對(duì)試驗(yàn)前后試驗(yàn)組、對(duì)照組精子的抗氧化指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表4。試驗(yàn)前，試驗(yàn)組與對(duì)照組SOD、MDA、GSH-PX差異均不顯著 （P＞0.05）；試驗(yàn)結(jié)束后，試驗(yàn)組SOD、GSH-PX顯著提高（P＜0.05）；MDA含量較對(duì)照組極顯著降低（P＜0.01）。結(jié)果表明，公豬飼喂牡蠣粗多糖后，精液的抗氧化能力有一定的改善。

4 討 論

豬是體溫為39℃的恒溫動(dòng)物，研究表明，公豬在18～24℃、相對(duì)濕度為60%～75%的情況下最適宜飼養(yǎng)。夏季高溫（＞30℃）會(huì)使公豬血液中的ACTH含量升高，通過(guò)下丘腦-垂體-腺軸（腎上腺、甲狀腺、性腺）使垂體前葉促性腺激素減少，甲狀腺分泌減少，還可以抑制睪丸中類固醇的產(chǎn)生，導(dǎo)致公豬的交配欲減退，性欲降低；同時(shí)高溫刺激睪丸組織，使睪丸生精機(jī)能發(fā)生障礙，精細(xì)胞發(fā)生變性、死亡，最終導(dǎo)致公豬的射精量、精子活力、精子密度降低，畸形精子數(shù)比例增加[1-3]。在福建地區(qū)，每年的6、7、8、9月都處于環(huán)境溫度比較高的狀態(tài)，有時(shí)溫度高達(dá)40℃甚至以上。在臨床上常常發(fā)現(xiàn)每年的下半年母豬返情率提高、產(chǎn)仔數(shù)降低，究其原因可能就是夏季高溫導(dǎo)致種公豬的精液品質(zhì)下降。韓有元[4]通過(guò)對(duì)不同溫度下24頭杜洛克公豬的生精功能統(tǒng)計(jì)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)室溫越高，采精量、精子密度、精子活力越低，精子畸形率則越高；其中 30.7℃組平均采精量為208.7 mL，精子密度為2.82億個(gè)/mL，精子活力為80%，精子畸形率為15.4%；32.6℃組平均采精量為190.8 mL，精子密度為2.67億個(gè)/mL，精子活力為76%，精子畸形率為18.4%；35.1℃組平均采精量為169.5 mL，精子密度為2.48億個(gè)/mL，精子活力為69%，精子畸形率為27.6%，說(shuō)明溫度越高對(duì)精液品質(zhì)的影響越大。

表4 夏季高溫應(yīng)激下牡蠣粗多糖對(duì)抗氧化指標(biāo)的影響

研究認(rèn)為，精子的氧化損傷是多不飽和脂肪酸在活性氧族產(chǎn)生和清除活動(dòng)不平衡的結(jié)果，在正常情況下，射出精液中清除活性氧族作用的能力依賴于精漿的抗氧化物質(zhì)[5]，因此，精液的抗氧化能力與精液的質(zhì)量有一定的關(guān)系。Gadea J等[6-7]研究認(rèn)為，在冷凍稀釋液中添加1 mmol或5 mmol GSH，對(duì)解凍后的精子活力和成活率的提高及降低精子畸形數(shù)有一定的效果，其中以添加1 mmoL GSH對(duì)精子的保護(hù)效應(yīng)更好。Roca J等[8]研究認(rèn)為單獨(dú)添加SOD或混合添加SOD和過(guò)氧化氫酶都能夠提高解凍后的精子活率。Brezezinska等[9]對(duì)公豬連續(xù)7周給入1 000 IU/d水溶性維生素E類似物，精液中MDA含量顯著下降（P＜0.05），精漿中SOD和氧化型谷胱甘肽濃度也有所升高，精子濃度顯著提高（P＜0.05）。

目前人們已經(jīng)普遍認(rèn)識(shí)到夏季高溫對(duì)種公豬的危害，周偉良等[3]認(rèn)為在夏季高溫下，應(yīng)該從豬舍內(nèi)部與外部環(huán)境控制、營(yíng)養(yǎng)調(diào)控和飼養(yǎng)管理三個(gè)方面來(lái)減小熱應(yīng)激對(duì)公豬性能的影響。張曉霞等[10]認(rèn)為減輕熱應(yīng)激對(duì)公豬的影響，重視夏季高溫對(duì)種公豬環(huán)境溫度的控制，對(duì)于提高豬場(chǎng)的整體效益有著巨大的作用。在夏季高溫情況下，本試驗(yàn)通過(guò)在公豬飼料中添加牡蠣粗多糖，結(jié)果顯示，試驗(yàn)組精液量及精子活力比對(duì)照組都有所提升，但差異不顯著 （P＞0.05）；試驗(yàn)組的精子密度增加0.32億個(gè)/mL，差異不顯著 （P＞0.05），精子畸形率顯著減少4.26%（P＜0.05）；試驗(yàn)組SOD、GSH-PX顯著提高 （P＜0.05）；MDA含量較對(duì)照組極顯著降低（P＜0.01），其抗氧化能力與Brezezinska等[9]對(duì)公豬給入1 000 IU/d水溶性維生素E類似物的結(jié)果基本一致?？梢钥闯觯i飼喂牡蠣粗多糖后，對(duì)公豬精液品質(zhì)的改善有一定的作用。

5 小結(jié)

公豬質(zhì)量對(duì)于提高豬場(chǎng)整體的繁殖成績(jī)作用巨大，因此，熱應(yīng)激處理不當(dāng)將會(huì)給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大損失。本試驗(yàn)公豬飼喂牡蠣粗多糖后，對(duì)提高公豬精液量、精子活力、密度，降低精子畸形率有一定的作用，說(shuō)明牡蠣粗多糖應(yīng)用于種公豬，對(duì)提高種公豬精液品質(zhì)、改善公豬的生精功能有積極的作用。

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A

1003-4331（2014）03-0003-04

福建省科技廳農(nóng)業(yè)科技重點(diǎn)項(xiàng)目（2011N0001）資助。

江和基（1963.10-），男，福州人，高級(jí)獸醫(yī)師，從事臨床獸醫(yī)與實(shí)驗(yàn)室管理。E-mail:jhj5678@163. com。

＊通信作者：黃志堅(jiān)（1963.9-），男，福建惠安人，教授，從事動(dòng)物疾病控制與保健。E-mail:huangzj1999@sina. com。