沈鈺珍，于海寧，張程程，曾思敏，沈生榮，*（.浙江大學(xué)，生物系統(tǒng)工程與食品科學(xué)學(xué)院食品生物科學(xué)技術(shù)研究所，浙江杭州30058；.浙江工業(yè)大學(xué)藥學(xué)院，浙江杭州3004）

濃縮魚油對前列腺細(xì)胞生長的影響

沈鈺珍1，于海寧2，張程程1，曾思敏1，沈生榮1，*
（1.浙江大學(xué)，生物系統(tǒng)工程與食品科學(xué)學(xué)院食品生物科學(xué)技術(shù)研究所，浙江杭州310058；2.浙江工業(yè)大學(xué)藥學(xué)院，浙江杭州310014）

探討了魚油對前列腺正常細(xì)胞（RWPE-1）和前列腺癌細(xì)胞（PC-3）生長和代謝的影響。經(jīng)魚油處理，MTT法及流式細(xì)胞術(shù)考察魚油對以上兩細(xì)胞生長的影響，氣相色譜法分析處理前后脂肪酸組成，酶聯(lián)免疫法檢測細(xì)胞炎性因子（TNF-α，IL-6，LXA4）的表達(dá)。結(jié)果顯示，本實(shí)驗(yàn)所用濃縮魚油基本不影響前列腺正常細(xì)胞RWPE-1的生長，而50倍稀釋魚油作用48h可使PC-3細(xì)胞存活率降至70.34%，凋亡率上升至15.47%±0.64%；魚油作用后PC-3細(xì)胞內(nèi)γ-亞麻酸、花生四烯酸、EPA和DHA比例明顯增加，而在RWPE-1細(xì)胞內(nèi)并無明顯增加；RWPE-1細(xì)胞的LXA4表達(dá)量基本不變，IL-6和TNF-α表達(dá)量逐漸上升，而PC-3細(xì)胞的LXA4表達(dá)量呈明顯上升趨勢，IL-6、TNF-α的表達(dá)量卻顯著下降。本實(shí)驗(yàn)所用濃縮魚油對RWPE-1和PC-3細(xì)胞的生長、代謝具有不同的影響。

魚油，前列腺癌，細(xì)胞凋亡，脂肪酸組成，炎性因子

流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，攝入一定量的魚油可以降低前列腺癌癥的發(fā)病率[1]。魚油中含大量的多不飽和脂肪酸，其中EPA和DHA是深海魚油的特征脂肪酸。n-3多不飽和脂肪酸在多種疾病的預(yù)防及治療方面得到了廣泛的應(yīng)用[2-3]。研究發(fā)現(xiàn)，n-3多不飽和脂肪酸對機(jī)體下調(diào)炎癥細(xì)胞因子表達(dá)，如IL-l、IL-6、TNF-α，起到免疫調(diào)節(jié)的作用[4]，而且對很多癌癥具有預(yù)防、治療作用。近來，越來越多的研究表明n-3多不飽和脂肪酸（DHA、EPA）在腫瘤治療方面有著重要的作用[5]，其中有研究證明n-3和n-6多不飽和脂肪酸有降低前列腺癌風(fēng)險的作用[6-7]。同時，有關(guān)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，n-3多不飽和脂肪酸（如DHA、EPA）可以抑制前列腺癌細(xì)胞增殖并聯(lián)合化療藥物達(dá)到化療增敏的作用[8]。細(xì)胞內(nèi)脂肪酸比例變化會影響細(xì)胞的生存狀態(tài)，膳食或細(xì)胞中n-6/n-3的比值發(fā)生變化將會影響細(xì)胞生存，并引起很多細(xì)胞功能發(fā)生變化[9]。魚油中存在天然配比的n-3，n-6多不飽和脂肪酸，在降低癌癥及心血管疾病方面有著獨(dú)特的優(yōu)勢。Saw等研究證明魚油對高脂飲食下的前列腺癌小鼠有一定的保護(hù)作用[10]。

研究表明，n-3和n-6多不飽和脂肪酸對前列腺癌癥有預(yù)防、治療作用[11-12]，但其在正常細(xì)胞和癌細(xì)胞中的代謝差異研究并不多。本文選取市售濃縮魚油研究其對前列腺正常細(xì)胞（RWPE-1）和前列腺癌細(xì)胞（PC-3）的生長、代謝的影響，希望通過本研究能更好地闡釋魚油在防治前列腺癌癥方面的作用。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3、前列腺上皮正常細(xì)胞RWPE-1 中科院細(xì)胞生物所；MTT Sigma公司；RPMI 1640培養(yǎng)基、胎牛血清、雙抗 Gibco公司；SOD、CAT、GSH-Px、MDA試劑盒和蛋白測定試劑盒 南京建成生物工程研究所；TNF-α、IL-6酶聯(lián)免疫試劑盒 武漢博士德生物工程有限公司；LXA4酶聯(lián)免疫試劑盒 上海源葉生物科技有限公司；正己烷 國產(chǎn)色譜純；濃縮魚油軟膠囊。

W201型恒溫水浴鍋 上海申順生物科技有限公司；LDIX-40BI型立式自動電熱壓力蒸汽滅菌鍋 上海申安醫(yī)療器械廠；L500型低速離心機(jī) 湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司；二氧化碳培養(yǎng)箱SheLLba MSA公司；MD29SpectraMax190型酶標(biāo)儀

芬蘭；7890-A型安捷倫氣相色譜 安捷倫公司；FC500MCL型流式細(xì)胞儀 美國Beckman Coulter。

1.2 氣相色譜法測定魚油中脂肪酸的組成[13]

取1mL魚油置于具塞玻璃試管內(nèi)，快速加入5%鹽酸甲醇（w/v）3mL，密封后立即放入100℃恒溫箱甲酯化3h，取出冷卻至室溫，加入等體積高純水，用3mL正己烷分3次萃取，將正己烷相合并后加入等體積高純水洗滌，回收正己烷相，過濾后用氮?dú)獯蹈?，用正己烷定容?mL，取1μL進(jìn)樣，分流比為1∶10。氣相色譜條件：進(jìn)樣口溫度250℃，檢測器溫度260℃，色譜柱為DB-23（0.25mm，60m，安捷倫，美國），程序升溫條件：130℃保留1min，6.5℃/min升至170℃，然后2.75℃/min升至225℃并保留10min。用動物源脂肪酸甲酯混標(biāo)（FAME Mix，Supelco）進(jìn)行脂肪酸外標(biāo)法定量。

1.3 MTT法檢測魚油對RWPE-1和PC-3細(xì)胞存活率的影響

用無水乙醇溶解魚油形成10倍稀釋液，實(shí)驗(yàn)前用細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋魚油成200、150、100、50倍的魚油稀釋液。RWPE-1和PC-3培養(yǎng)條件：RPMI 1640培養(yǎng)液中加10%胎牛血清和雙抗（青霉素和鏈霉素各100U/mL），37℃，5%CO2。將對數(shù)生長期的RWPE-1和PC-3細(xì)胞分別以5×104個/mL和1×105個/mL密度接種于96孔板，每組設(shè)6個平行，每孔設(shè)培養(yǎng)液對照。24h后加入不同稀釋倍數(shù)的魚油，無水乙醇為溶劑對照，繼續(xù)培養(yǎng)。分別于24、48、72h后取出，甩掉孔內(nèi)培養(yǎng)液，每孔加入20μL MTT（5mg/mL），CO2培養(yǎng)箱內(nèi)放置4h后，每孔加入150μL DMSO，水平振蕩器搖勻直至藍(lán)紫色結(jié)晶溶解完全，用酶標(biāo)儀測定各孔在490nm處的吸光度值。魚油對照孔與溶劑對照孔的吸光度百分比為細(xì)胞存活率，存活率計(jì)算公式如下：

1.4 流式細(xì)胞術(shù)分析魚油作用下RWPE-1和PC-3細(xì)胞凋亡變化

取對數(shù)生長期細(xì)胞（RWPE-1：5×104個/mL，PC-3：1×105個/mL）接種于6孔板，24h后加入稀釋魚油處理48h。處理完成后，收集細(xì)胞并用預(yù)冷PBS洗滌細(xì)胞兩次，Annexin V結(jié)合液懸浮細(xì)胞，細(xì)胞密度約為10個/mL，按1∶80加入Annexin V-FITC染色液，輕輕混勻后于4℃避光染色15min，按1∶40加入PI染色液（50μg/mL），輕輕混勻后于4℃避光染色5min，1h內(nèi)用流式細(xì)胞儀檢測。

1.5 魚油作用下測定RWPE-1和PC-3細(xì)胞SOD、CAT及GSH-Px活力和MDA含量

取對數(shù)生長期細(xì)胞（RWPE-1：5×104個/mL，PC-3：1×105個/mL）接種于6孔板，24h后用稀釋魚油處理48h。收集細(xì)胞，PBS洗滌細(xì)胞兩次，重懸于200μL PBS中，于冰浴中超聲破碎細(xì)胞，細(xì)胞破碎液用于SOD、MDA、CAT及GSH-Px含量測定，測定方法參照試劑盒說明書。蛋白測定參照蛋白測定試劑盒說明書進(jìn)行。SOD、CAT及GSH-Px活性表示為U/mg protein，MDA含量表示為nmol/mg protein。

1.6 魚油作用下分析RWPE-1和PC-3細(xì)胞內(nèi)脂肪酸組成[14]

RWPE-1和PC-3細(xì)胞分別以5×104個/mL和1×105個/mL密度接種于細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)，24h后用稀釋魚油處理48h，同時做空白對照。魚油處理后，胰酶消化細(xì)胞并離心收集細(xì)胞，PBS洗滌細(xì)胞兩次，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到具塞玻璃試管內(nèi)，甲酯化及萃取方法同1.2，最后用正己烷定容至100μL，取1μL進(jìn)樣，不分流。氣相色譜條件與1.2所述一致。

1.7 魚油作用下測定RWPE-1和PC-3細(xì)胞內(nèi)炎性因子（TNF-α，IL-6，LXA4）的表達(dá)[15]

取對數(shù)生長期細(xì)胞RWPE-1和PC-3接種于6孔板中，密度分別為5×104個/mL和1×105個/mL，24 h后加入稀釋魚油處理48h，收集細(xì)胞培養(yǎng)液用于細(xì)胞內(nèi)炎性因子（TNF-α，IL-6，LXA4）的測定，檢測前將細(xì)胞培養(yǎng)液離心去除死細(xì)胞，測定方法參照試劑盒說明書。細(xì)胞懸浮液用于蛋白測定，參照試劑盒說明書進(jìn)行。炎性因子表達(dá)量表示為ng/mg protein。本文最終以各處理下炎性因子表達(dá)量相對于空白對照組的百分含量表示魚油處理后炎性因子表達(dá)的變化。

1.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析采用SAS 9.1，繪圖采用Excel 2003，數(shù)據(jù)表示為平均值±SD。

2 結(jié)果分析

2.1 魚油中的脂肪酸組成

魚油中含有豐富的多不飽和脂肪酸，本文所用魚油為濃縮魚油，產(chǎn)品標(biāo)簽上顯示每粒重量為1g，其中含EPA 300mg，DHA 200mg。圖2為魚油的氣相色譜圖，根據(jù)氣相分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)該魚油中含有多種脂肪酸，其中EPA占35.08%，DHA占24.46%（如表1所示），與魚油標(biāo)簽上所示基本一致。從表1可以看出魚油中含有多種脂肪酸，反亞油酸和亞油酸比例分別高達(dá)4.28%和5.49%，γ-亞麻酸、花生酸的含量也分別達(dá)到4.83%、4.19%。

圖1 脂肪酸甲酯混標(biāo)標(biāo)樣GC色譜圖Fig.1 GC chromatography of Fatty Acid Methyl Ester Mix

圖2 魚油氣相色譜圖Fig.2 GC chromatography of fish oil

表1 魚油中的脂肪酸組成Table 1 Fatty acid compositions of fish oil

2.2 魚油對RWPE-1和PC-3細(xì)胞存活率的影響

如圖3所示，隨著魚油濃度（200、150、100、50倍稀釋）增加，RWPE-1細(xì)胞存活率呈上升趨勢，并隨培養(yǎng)時間的延長而逐漸升高。而PC-3細(xì)胞的存活率隨魚油濃度上升呈下降趨勢（圖4），且在50倍稀釋濃度下存活率有較大幅度的下降，48h時細(xì)胞存活率為70.34%，72h時細(xì)胞存活率僅為44.02%。由此可以看出，魚油對RWPE-1細(xì)胞基本沒有殺傷力，對PC-3細(xì)胞有一定的殺傷作用。

圖3 魚油對RWPE-1細(xì)胞存活率的影響Fig.3 Effect of fish oil on cell viability of RWPE-1 cells

圖4 魚油對PC-3細(xì)胞存活率的影響Fig.4 Effect of fish oil on cell viability of PC-3 cells

2.3 魚油對RWPE-1和PC-3細(xì)胞凋亡的影響

通過流式細(xì)胞儀可將正常細(xì)胞、早期凋亡細(xì)胞、晚期凋亡細(xì)胞和死細(xì)胞區(qū)分開來。從表2中可以看到，RWPE-1和PC-3在未經(jīng)魚油處理時（CK組）表現(xiàn)出良好的生長狀態(tài)，死細(xì)胞、早期凋亡細(xì)胞、晚期凋亡細(xì)胞的比例幾乎為零。魚油作用下，RWPE-1和PC-3都發(fā)生了一定程度的凋亡，且PC-3的凋亡、死亡情況較RWPE-1嚴(yán)重。100倍稀釋魚油作用下，RWPE-1早凋和晚凋的細(xì)胞分別占5.77%±0.25%、1.84%±0.15%，而PC-3中對應(yīng)比例為6.76%±0.34%和5.32%±0.22%；50倍稀釋魚油作用下，檢測到6.07%± 0.19%和2.84%±0.18%的RWPE-1分別發(fā)生了早凋、晚凋現(xiàn)象，而在PC-3中對應(yīng)比例分別達(dá)到8.68%± 0.31%和6.79%±0.33%。與RWPE-1相比，魚油對PC-3的凋亡影響更大。

2.4 魚油對RWPE-1和PC-3細(xì)胞SOD、CAT及GSH-Px活力和MDA含量的影響

從圖5～圖8可以看出，經(jīng)100、50倍稀釋魚油作用48h后，RWPE-1內(nèi)SOD和GSH-Px的活力基本維持在一個水平；而PC-3內(nèi)SOD活力明顯下降，GSH-Px活力卻有較大幅度的上升，特別是在50倍稀釋魚油作用下（圖5和圖8）。與此同時，經(jīng)魚油處理后，RWPE-1內(nèi)的MDA含量有所上升，但相對PC-3還是處于一個較低的水平（圖6）；圖7顯示魚油作用下RWPE-1和PC-3的CAT活力有很大幅度的下降。表明魚油對RWPE-1和PC-3的抗氧化系統(tǒng)均有一定程度的損傷。

表2 魚油處理后RWPE-1和PC-3細(xì)胞凋亡中B1、B2、B3、B4區(qū)所占比例變化Table 2 Percentage changes of B1，B2，B3，B4 area in apoptosis of RWPE-1 and PC-3 cells treated with fish oil

圖5 魚油對RWPE-1和PC-3細(xì)胞SOD活力的影響Fig.5 Effect of fish oil on SOD activity of RWPE-1 and PC-3 cells

圖6 魚油對RWPE-1和PC-3細(xì)胞MDA含量的影響Fig.6 Effect of fish oil on MDA contents in RWPE-1 and PC-3 cells

圖7 魚油對RWPE-1和PC-3細(xì)胞CAT活力的影響Fig.7 Effect of fish oil on CAT activity of RWPE-1 and PC-3 cells

圖8 魚油對RWPE-1和PC-3細(xì)胞GSH-Px活力的影響Fig.8 Effect of fish oil on GSH-Px activity of RWPE-1 and PC-3 cells

圖9 魚油對PC-3細(xì)胞內(nèi)飽和脂肪酸、n-9、n-6、n-3多不飽和脂肪酸比例變化的影響Fig.9 Effect of fish oil on proportion changes of saturated fatty acids，n-9，n-6，n-3 PUFAs in PC-3 cells

2.5 魚油作用下RWPE-1和PC-3細(xì)胞內(nèi)脂肪酸組成變化

從圖9、圖10和表3、表4可以看出，RWPE-1和PC-3細(xì)胞內(nèi)的脂肪酸組成存在顯著差異。與PC-3相比，RWPE-1內(nèi)棕櫚烯酸（1.22%±0.15%）、γ-亞麻酸（7.24%±0.67%）、花生四烯酸（1.64%±0.21%）含量明顯較高。魚油作用后，RWPE-1和PC-3內(nèi)飽和脂肪酸的比例均呈上升趨勢，50倍稀釋魚油處理下其比例均接近50%。從圖9可以看出，隨著魚油濃度的上升，PC-3內(nèi)n-9 PUFAs的比例逐漸下降，對照組、100倍魚油處理組、50倍魚油處理組分別為80.07%±7.00%、70.22%±11.02%、22.77%±6.01%，n-3 PUFAs的比例從對照組的2.72%±0.51%上升至50倍稀釋魚油組的21.45%±9.91%。而RWPE-1內(nèi)n-9和n-3 PUFAs的比例沒有發(fā)生顯著變化，但n-6 PUFAs的比例卻從對照組的11.81%±0.41%下降到100倍魚油稀釋組的3.07% ±1.01%和50倍稀釋組的2.88%±0.047%。

圖10 魚油對RWPE-1細(xì)胞內(nèi)飽和脂肪酸、n-9、n-6、n-3多不飽和脂肪酸比例變化的影響Fig.10 Effect of fish oil on proportion changes of saturated fatty acids，n-9，n-6，n-3 PUFAs in RWPE-1 cells

表3 PC-3細(xì)胞內(nèi)主要脂肪酸比例變化Table 3 Proportion changes of major fatty acids in PC-3 cells

魚油作用后，PC-3內(nèi)γ-亞麻酸（從0.58%±0.01%上升到0.60%±0.08%、2.68%±0.17%）、花生四烯酸（從0.88%±0.02%上升至1.47%±0.17%、4.15%±0.57%）、EPA（從1.05%±0.09%上升至2.76%±0.47%、10.50%± 0.89%）、DHA（從N.D上升至5.18%±0.34%、16.16%± 1.03%）比例均明顯增加（表3），說明魚油進(jìn)入PC-3細(xì)胞后可代謝成不同種類的脂肪酸。相同濃度的魚油作用下，RWPE-1內(nèi)γ-亞麻酸、花生四烯酸、EPA和DHA比例的增加并不明顯（表4），而這四種脂肪酸的比例在PC-3內(nèi)卻將顯著升高。

表4 RWPE-1細(xì)胞內(nèi)主要脂肪酸比例變化Table 4 Proportion changes of major fatty acids in RWPE-1 cells

圖11 魚油對RWPE-1細(xì)胞炎性因子（LXA4，IL-6和TNF-α）表達(dá)的影響Fig.11 Effect of fish oil on contents of inflammatory factors（LXA4，IL-6 and TNF-α）in RWPE-1 cells

2.6 魚油對RWPE-1和PC-3細(xì)胞內(nèi)炎性因子（TNF-α，IL-6，LXA4）表達(dá)的影響

脂肪酸是細(xì)胞代謝過程中的重要參與者。細(xì)胞內(nèi)的脂肪酸代謝存在多種途徑，隨之產(chǎn)生不同類型的代謝產(chǎn)物，促進(jìn)或抑制細(xì)胞內(nèi)的炎癥反應(yīng)。TNF-α，IL-6，LXA4都是細(xì)胞內(nèi)重要、典型的炎性因子。從圖11可以看出，經(jīng)魚油作用后，RWPE-1的LXA4表達(dá)量基本在同一個水平，而隨著魚油濃度的增加，IL-6和TNF-α表達(dá)量都逐漸上升。圖12顯示，PC-3的LXA4表達(dá)量隨魚油濃度的增加表現(xiàn)出明顯的上升趨勢，而IL-6、TNF-α的表達(dá)量卻顯著下降。表明RWPE-1和PC-3經(jīng)魚油作用后炎性因子（TNF-α，IL-6，LXA4）的表達(dá)水平存在很大的差異。

圖12 魚油對PC-3細(xì)胞炎性因子（LXA4，IL-6和TNF-α）表達(dá)的影響Fig.12 Effect of fish oil on contents of inflammatory factors（LXA4，IL-6 and TNF-α）in PC-3 cells

3 討論

流行病學(xué)研究表明飲食中脂肪酸的攝入是前列腺癌發(fā)生發(fā)展的一個重要誘因。Paul Terry等通過對6272位男性的魚攝入情況進(jìn)行30年的跟蹤調(diào)查，發(fā)現(xiàn)攝入魚少的男性其前列腺癌發(fā)病率是其他人的2～ 3倍，說明飲食中攝入一定量的魚有助于降低患前列腺癌癥的風(fēng)險[16]。菜油中多含n-6多不飽和脂肪酸，而魚油中含有豐富的n-3多不飽和脂肪酸，特別是EPA和DHA，Sangita Manna等研究發(fā)現(xiàn)魚油可抑制乳腺癌細(xì)胞的增值，保護(hù)DNA免受損傷，以及抑制HER-2/neu和c-Myc蛋白的表達(dá)[17]。很多研究結(jié)果顯示魚油在防治癌癥方面有一定的作用，但至今為止，有關(guān)魚油和多不飽和脂肪酸影響前列腺癌發(fā)生發(fā)展的復(fù)雜機(jī)理還不清楚。n-6 PUFAs和n-3 PUFAs是兩類主要的多不飽和脂肪酸，但不能在哺乳動物體內(nèi)重新合成，哺乳動物必須從飲食中攝入這些脂肪酸，并在體內(nèi)進(jìn)行相應(yīng)的代謝轉(zhuǎn)化。本文主要研究濃縮魚油（EPA∶DHA=3∶2）在前列腺癌細(xì)胞PC-3及其對應(yīng)的正常細(xì)胞RWPE-1中的代謝問題，尤其是脂類代謝相關(guān)的炎性因子的表達(dá)。氣相色譜結(jié)果顯示本文所用的濃縮魚油中EPA和DHA的含量較高，EPA占35.08%，DHA占24.46%，其中還有很多其他種類的脂肪酸，但含量普遍較低。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明魚油對RWPE-1細(xì)胞基本沒有殺傷作用，反而促進(jìn)RWPE-1細(xì)胞生長；低濃度的魚油對PC-3的殺傷力也不大，但50倍稀釋濃度下對PC-3細(xì)胞有較大的殺傷作用。而且在相同處理下PC-3的凋亡率遠(yuǎn)高于RWPE-1，RWPE-1活細(xì)胞的比例均在90%以上，這與MTT法的結(jié)果相符合。通過SOD、MDA、CAT、GSH-Px四種抗氧化指標(biāo)的測定也表明魚油對PC-3抗氧化系統(tǒng)的損傷大于RWPE-1。綜上所述，魚油對PC-3生存狀態(tài)和細(xì)胞功能的損傷較RWPE-1大。

脂肪酸是細(xì)胞生命活動中重要的能量物質(zhì)，脂肪酸在細(xì)胞內(nèi)的代謝活動可以直接影響細(xì)胞的生存狀態(tài)。脂肪酸進(jìn)入細(xì)胞后可通過去除飽和酶、環(huán)氧化酶、脂氧合酶等轉(zhuǎn)化成其他脂肪酸，研究已證明癌細(xì)胞與正常細(xì)胞在代謝上存在差異。因此，我們利用氣相色譜法分析了魚油作用PC-3和RWPE-1后細(xì)胞內(nèi)的脂肪酸組成，結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩種細(xì)胞內(nèi)的脂肪酸組成均發(fā)生了變化，包括飽和脂肪酸、n-9 PUFAs、n-6 PUFAs、n-3 PUFAs的比例以及細(xì)胞內(nèi)不同種類脂肪酸的含量，且RWPE-1和PC-3內(nèi)的脂肪酸組成存在很大的差異，相同濃度魚油作用后兩種細(xì)胞內(nèi)脂肪酸比例增加的幅度也存在很大的差異。分析細(xì)胞內(nèi)γ-亞麻酸、花生四烯酸、EPA和DHA組成發(fā)現(xiàn)魚油作用下PC-3內(nèi)這四種多不飽和脂肪酸的比例大幅上升，而在RWPE-1內(nèi)卻沒有明顯增加。分析兩種細(xì)胞內(nèi)飽和脂肪酸、n-9、n-6、n-3 PUFAs總比例的變化，發(fā)現(xiàn)魚油作用下PC-3內(nèi)n-3 PUFAs的比例明顯上升，而RWPE-1內(nèi)這一比例反而有所下降，說明PC-3和RWPE-1內(nèi)的脂肪酸合成途徑存在很大差異，PC-3在利用魚油中的脂肪酸方面較RWPE-1更具優(yōu)勢，特別是n-3 PUFAs（EPA和DHA）。因?yàn)轸~油中含有大量的EPA和DHA，魚油作用后PC-3內(nèi)EPA和DHA的比例顯著上升。

同樣，作為脂肪酸代謝中的重要產(chǎn)物，炎性因子（TNF-α，IL-6，LXA4）表達(dá)量的變化也能有力地反映魚油對RWPE-1和PC-3代謝的影響[18]。魚油中高含量的EPA和DHA是脂氧素的重要前體物質(zhì)，可提高細(xì)胞內(nèi)的脂氧素含量，從而表現(xiàn)出很強(qiáng)的抗炎作用。在眾多類型的脂氧素中，LXA4已被證實(shí)具有較強(qiáng)的抗炎活性。本研究中，我們發(fā)現(xiàn)魚油處理后RWPE-1的LXA4含量的上升幅度并不大，而在PC-3中卻顯著上升。有研究發(fā)現(xiàn)在癌癥發(fā)生過程中IL-6表達(dá)量會明顯上升[19]，IL-6是一種自分泌或旁分泌的多效性細(xì)胞因子，在前列腺正常上皮細(xì)胞和前列腺癌細(xì)胞中都有明顯的表達(dá)。我們研究發(fā)現(xiàn)魚油可使PC-3的IL-6、TNF-α表達(dá)量顯著下降，而在RWPE-1中卻表現(xiàn)出相反的結(jié)果。有研究發(fā)現(xiàn)TNF-α處理后，前列腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和遷移能力增強(qiáng)，這是因?yàn)門NF-α可以刺激選擇性糖基和巰基轉(zhuǎn)移酶基因的表達(dá)，從而增加選擇素配體的形成。因此TNF-α表達(dá)量的增加是癌癥發(fā)展進(jìn)程加快的標(biāo)志，本研究發(fā)現(xiàn)魚油作用后PC-3細(xì)胞對TNF-α的表達(dá)顯著下降，說明魚油對前列腺癌細(xì)胞有一定抑制效果。

4 結(jié)論

魚油在PC-3和RWPE-1細(xì)胞內(nèi)的代謝存在很多差異，可能是炎性因子表達(dá)上的差異、脂肪酸重新合成的路徑不同，或者前列腺癌細(xì)胞PC-3能更有效地利用魚油中的脂肪酸進(jìn)行代謝轉(zhuǎn)化。本研究對前列腺癌細(xì)胞和前列腺正常細(xì)胞內(nèi)的脂類代謝機(jī)制提供了新的見解，為魚油用于防治前列腺癌提供了一定的理論基礎(chǔ)。但對于魚油及其他脂肪酸在前列腺癌細(xì)胞和正常細(xì)胞內(nèi)的動態(tài)代謝過程有待進(jìn)一步探討。

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Effects of condensed fish oil on the growth of prostate cells in vitro

SHEN Yu-zhen1，YU Hai-ning2，ZHANG Cheng-cheng1，ZENG Si-min1，SHEN Sheng-rong1，*
（1.Department of Biosystem Engineering and Food Science，Zhejiang University，Hangzhou 310058，China；2.College of Pharmaceutical Science，Zhejiang University of Technology，Hangzhou 310014，China）

In order to elucidate the effects of fish oil on the growth and metabolism of prostate cells，in the present paper an epithelial cell（RWPE-1）and prostate cancer cell（PC-3）were employed.Effects of fish oil on cell growth and apoptosis were investigated by MTT assay and flow cytometry after treatment with fish oil. Also gas chromatography was used to analyse fatty acids composition and inflammatory factors（TNF-α，IL-6，LXA4 secreted by cells were detected using ELISA.Results showed that condensed fish oil used in our study had little damage to RWPE-1 cell growth，but the viability of PC-3 cells reduces to 70.34%and the apoptosis rate of PC-3 cells is up to 15.47%±0.64%after treated with fish oil for 48h which was diluted into 50 times.The proportions of GLA，AA，EPA and DHA in PC-3 cells increased markedly，which had no significant increase in RWPE-1 cells.For RWPE-1 cells，the secreted LXA4 maintains almost in a same level and the expression of IL-6 and TNF-α rises gradually.However，PC-3 cells resulted in higher levels of LXA4 and lower expressions of IL-6 and TNF-α when incubated with fish oil.Effects of condensed fish oil used in our study on the growth of these two kinds of prostate cells are quite different.

fish oil；prostate cancer；cell apoptosis；fatty acids composition；inflammatory factors

TS201.1

A

1002-0306（2014）12-0358-07

10.13386/j.issn1002-0306.2014.12.070

2013－10－24 *通訊聯(lián)系人

沈鈺珍（1989-），女，碩士研究生，研究方向：食品分子營養(yǎng)學(xué)。