劉叔敏，范玉磊，梁婷婷，孫 影△

(1.河北聯(lián)合大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理學(xué)系，河北唐山 063000;2.承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院普外科)

Pokemon、c-myc在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及意義

劉叔敏1、2，范玉磊1，梁婷婷1，孫 影1△

(1.河北聯(lián)合大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理學(xué)系，河北唐山 063000;2.承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院普外科)

目的:探討結(jié)直腸癌組織Pokemon和c-myc蛋白表達(dá)的變化和意義。方法:SP免疫組化法檢測(cè)60例結(jié)直腸癌組織和癌旁正常組織Pokemon和c-myc蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果:結(jié)直腸癌組織Pokemon和c-myc蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于正常組織(P＜0.01);結(jié)直腸癌組織Pokemon和c-myc蛋白的陽(yáng)性表達(dá)與分化程度、Dukes分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.01，P＜0.05);結(jié)直腸癌組織中，Pokemon和c-myc蛋白的表達(dá)呈顯著正相關(guān)(r=0.615，P＜0.05)。結(jié)論:Pokemon和c-myc對(duì)結(jié)直腸癌的診斷和預(yù)后評(píng)判具有一定的價(jià)值。

Pokemon基因;c-myc基因;結(jié)直腸癌

Pokemon(POK erythroid ontogenic factor)基 因 是近期新發(fā)現(xiàn)的原癌基因，在細(xì)胞分化中具有重要作用，可能位于許多腫瘤抑制基因和原癌基因的上游[1]。c-myc是一種原癌基因，在多種惡性腫瘤中均呈高表達(dá)狀態(tài)，從而參與腫瘤的形成與發(fā)展[2]。本研究采用免疫組化法檢測(cè)了Pokemon和c-myc在人結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及相關(guān)性，探討二者在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用及機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 2010年1月至2012年12月承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院60例結(jié)直腸癌手術(shù)切除標(biāo)本，均經(jīng)術(shù)后組織病理學(xué)確診;同時(shí)選取距瘤緣＞5cm的癌旁組織作為對(duì)照。60例中，男28例、女32例，年齡35-85歲(平均66.5歲)。組織學(xué)分級(jí):高分化21例，中分化28例，低分化11例;Dukes分期:Ⅰ期4例，Ⅱ期20例，Ⅲ期31例，Ⅳ期5例。所有患者術(shù)前均未行放射治療和化學(xué)治療。

1.2 免疫組化染色 采用SP免疫組化染色法，一抗為鼠抗，工作濃度為1:100，DAB顯色，蘇木素復(fù)染細(xì)胞核。以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，以試劑盒自帶已知染色陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判斷 Pokemon蛋白以細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色細(xì)顆粒為陽(yáng)性表達(dá)，c-myc蛋白以細(xì)胞質(zhì)和核周出現(xiàn)黃色和棕黃色顆粒為陽(yáng)性表達(dá)。采用二級(jí)計(jì)分法判定結(jié)果:①陽(yáng)性細(xì)胞百分率:在5個(gè)高倍視野下(10×40)計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞百分率，＜5%為0分，5%-25%為1分，26%-50%為2分，51%-75%為3分，＞75%為4分。②染色強(qiáng)度:無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞為0分，淡黃色為1分，黃或深黃色為2分，褐色或棕褐色為3分。以①、②的乘積判定最終結(jié)果:0分為(-)，1-2分為(+)，3-4分為(++)，5-12分為(+++)。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)，相關(guān)分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Pokemon和c-myc蛋白在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)情況結(jié)直腸癌組織Pokemon蛋白和c-myc蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率分別為71.7%(43/60)和86.7%(52/60)，均明顯高于正常組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。見表1。

表1 Pokemon和c-myc蛋白在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)情況(n=60)

2.2 Pokemon和c-myc蛋白表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 結(jié)直腸癌組織中，Pokemon和c-myc蛋白的表達(dá)與年齡、性別、浸潤(rùn)深度無(wú)關(guān)(P＞0.05);與分化程度、Dukes分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.01，P＜0.05):低分化明顯高于高中分化，Dukes分期Ⅲ+Ⅳ期明顯高于Ⅰ+Ⅱ期，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。見表2。

表2 Pokemon和c-myc蛋白表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.3 結(jié)直腸癌組織Pokemon和c-myc蛋白表達(dá)的相關(guān)性 52例c-myc陽(yáng)性表達(dá)的病例中，42例Pokemon的表達(dá)也呈陽(yáng)性，同時(shí)陽(yáng)性表達(dá)率為70.0%(42/60);在17例Pokemon陰性表達(dá)的病例中，7例c-myc也呈陰性表達(dá)，同時(shí)陰性表達(dá)率為11.7%(7/60)。結(jié)直腸癌組織中，Pokemon和c-myc蛋白的表達(dá)呈顯著正相關(guān)(r=0.615，P＜0.05)。見表3。

表3 結(jié)直腸癌組織Pokemon和c-myc蛋白表達(dá)的相關(guān)性

3 討論

2005年，Meada等發(fā)現(xiàn)Pokemon在多種人類實(shí)體腫瘤，尤其是在腺癌和鱗狀細(xì)胞癌中異常高表達(dá)[1，3]。本研究顯示，結(jié)直腸癌組織Pokemon蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于癌旁組織(P＜0.01);并且發(fā)現(xiàn)，結(jié)直腸癌組織Pokemon蛋白的陽(yáng)性表達(dá)與分化程度、Dukes分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。這與周瑩群等的研究結(jié)果一致[4]。上述研究結(jié)果均提示，pokemon基因在誘導(dǎo)腫瘤分化中可能具有重要作用。

c-myc基因是一種常見的原癌基因，在生長(zhǎng)信號(hào)的作用下，c-myc的過(guò)表達(dá)會(huì)幫助增殖;但當(dāng)生長(zhǎng)刺激信號(hào)缺失時(shí)，c-myc的過(guò)表達(dá)則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞凋亡[5-6]。本研究顯示，結(jié)直腸癌組織c-myc蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率為86.7%，明顯高于癌旁正常組織，與Harnicarova等報(bào)道的約70%的結(jié)直腸癌出現(xiàn)c-myc的過(guò)表達(dá)的結(jié)果一致，提示在結(jié)直腸癌發(fā)生過(guò)程中c-myc的過(guò)表達(dá)是一頻發(fā)事件[7]。

研究發(fā)現(xiàn)，pokemon的Poz結(jié)構(gòu)域可與c-myc發(fā)生相互作用，這種分子間的作用能增加細(xì)胞核內(nèi)c-myc的表達(dá)水平并維持其穩(wěn)定性，從而作為上游基因調(diào)控c-myc基因的轉(zhuǎn)錄[8]。本研究相關(guān)分析結(jié)果顯示，結(jié)直腸癌組織Pokemon蛋白的表達(dá)與c-myc蛋白的表達(dá)呈顯著正相關(guān)，說(shuō)明Pokemon基因不但在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮作用，而且可能是通過(guò)促進(jìn)原癌基因c-myc蛋白的表達(dá)實(shí)現(xiàn)的。而且本研究還發(fā)現(xiàn)，Pokemon與c-myc蛋白的表達(dá)均隨腫瘤分化程度的降低、Dukes分期的增高及出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移而增高，不僅表明二者與直結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，而且提示這兩種基因在結(jié)直腸癌的診斷尤其是預(yù)后的評(píng)估中可能具有一定的意義。

[1]Maeda T, Hobbs RM, Merghoub T, et al. Role of the protooncogene Pokemon in cellular transformation and ARF repression [J]. Nature,2005, 433(7023):278-288.

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[3]Choi WI,Jeon BN, Yun CO, et al. Proto-oncogene FBI-1 represses transcription of p21CIP1 by inhibition of transcription activation by p53 and Sp1[J]. J Biol Chem, 2009, 284(19):12633-12644.

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EXPRESSION AND CLINICAL SIGNIFICANCE OF POKEMON AND C-MYC IN COLORECTAL CANCER

LIU Shu-min, FAN Yu-lei, LIANG Ting-ting, et al
(Department of Pathology, Basic Medical Science College of Hebei United University, Hebei Tangshan 063000, China)

Objective:To investigate the expression and clinical significance of Pokemon and c-myc in human colorectal cancer.Methods:SP immunohistochemical staining was used to detect the expression of Pokemon and c-myc in 60 cases colorectal cancer and matched para-carcinoma tissues.Results:The positive expression rate of Pokemon and c-myc in colorectal cancer were obviously higher than that in normal tissue (P＜0.01). In colorectal cancer, the positive expression of Pokemon and c-myc were related with differentiation degree, Dukes stage and lymph node metastasis (P＜0.01, P＜0.05). The positive expression of Pokemon in colorectal cancer was positively correlated with c-myc expression (r=0.615, P＜0.05).Conclusions:Pokemon and c-myc have certain value for diagnosing and prognosis of colorectal cancer.

Pokemon gene; C-myc gene; Colorectal cancer

R735.3

A

1004-6879(2014)03-0198-02

2013-10-24)

△ 通訊作者