李建玲，蘇 震，劉海旺，李春輝

(承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，河北承德 067000)

Cx43、Smad1蛋白在胃癌中的表達(dá)及意義

李建玲，蘇 震，劉海旺，李春輝△

(承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，河北承德 067000)

目的:探討Cx43、Smad1蛋白在胃癌中的表達(dá)及意義。方法:采用免疫組織化學(xué)染色法檢測Cx43和Smad1在胃癌和癌旁組織中的表達(dá)情況。結(jié)果:胃癌組織Cx43的陽性表達(dá)率明顯低于正常胃組織，Smad1的陽性表達(dá)率明顯高于正常胃組織(P＜0.05)。胃癌組織Smad1、Cx43蛋白的表達(dá)與年齡、性別無關(guān)，與分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和浸潤深度有關(guān)(P＜0.01，P＜0.05)。胃癌組織Cx43與Smad1的表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)(P＜0.01)。結(jié)論:Cx43、Smad1蛋白的異常表達(dá)可能在胃癌的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。

其中抑癌因子、促癌因子相互作用失衡最終導(dǎo)致了胃癌的發(fā)生[1-2]?？p隙連接是相鄰細(xì)胞間的膜通道結(jié)構(gòu)，由縫隙連接蛋白構(gòu)成，其中包括Cx43，相鄰細(xì)胞之間通過縫隙連接通訊進(jìn)行著信息和能量的傳遞，對細(xì)胞的增殖、分化及機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定起到調(diào)控作用[3]。Smad1是Smad蛋白家族成員之一，它能夠把骨形態(tài)發(fā)生蛋白(bone norphogenetic protein,BMP)與其相應(yīng)受體作用后的信號傳至細(xì)胞核內(nèi)。本研究觀察了胃癌組織Cx43和Smad1蛋白的表達(dá)情況，探討二者在胃癌發(fā)生以及浸潤和轉(zhuǎn)移中的作用，以期對臨床胃癌的靶向治療和預(yù)后判斷提供指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2012年6月-2013年10月手術(shù)切除并經(jīng)病理證實(shí)的胃癌組織60例，以及癌旁胃組織(距腫瘤＞10cm)30例，所有患者術(shù)前未接受放化療。標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片，厚4μm。60例胃癌患者，男34例、女26例，平均年齡58.5±4.0歲;高、中分化28例，低分化32例;無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移23例，有轉(zhuǎn)移37例;浸潤漿膜層者48例，浸潤肌層者12例。30例癌旁組織，男19例、女11例，平均年齡(55.0±6.0)歲。

1.2 免疫組化染色及結(jié)果判定 鼠抗人Cx43抗體、兔抗人Smad1抗體，購自武漢博士德生物工程有限公司，

1:200稀釋。采用SP免疫組化染色法，DAB顯色，蘇木素復(fù)染細(xì)胞核。以PBS代替一抗作為陰性對照，以標(biāo)準(zhǔn)陽性切片作為陽性對照。Cx43、Smad1蛋白以胞漿或胞膜出現(xiàn)棕色或棕褐色顆粒為陽性反應(yīng)。每例標(biāo)本隨機(jī)選取5個高倍鏡視野(×400)，每個視野計(jì)數(shù)200個細(xì)胞，陽性細(xì)胞百分率≥50%為陽性表達(dá)、＜50%為陰性表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，計(jì)數(shù)資料的比較采用卡方檢驗(yàn)，相關(guān)分析采用Spearman等級相關(guān)分析，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同胃組織Cx43的表達(dá)情況及其與胃癌臨床病理特征的關(guān)系 正常胃組Cx43的陽性表達(dá)率為76.67%(23/30)，胃癌組織Cx43的陽性表達(dá)率為33.33%(20/60)，胃癌組織Cx43的陽性表達(dá)率明顯低于正常胃組織(P＜0.05)。胃癌Cx43蛋白的表達(dá)與年齡、性別無關(guān)(P＞0.05);與分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和浸潤深度有關(guān):低分化明顯低于高、中分化，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移明顯低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，浸潤漿膜層者明顯低于浸潤肌層者(P＜0.01，P＜0.05)。見表1。

2.2 不同胃組織Smad1的表達(dá)情況及其與胃癌臨床病理特征的關(guān)系 正常胃組Smad1的陽性表達(dá)率為16.67%(5/30)，胃癌組織Smad1的陽性表達(dá)率為51.67%(31/60)，胃癌組織Smad1的陽性表達(dá)率明顯高于正常胃組織(P＜0.05)。胃癌Smad1蛋白的表達(dá)與年齡、性別無關(guān)(P＞0.05);與分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和浸潤深度有關(guān):低分化明顯高于高、中分化，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，浸潤漿膜層者明顯高于浸潤肌層者(P＜0.01，P＜0.05)。見表1。

2.3 胃癌組織Cx43與Smad1表達(dá)的相關(guān)性 見表2。胃癌組織Cx43與Smad1的表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.54，P＜0.01)。

表2 胃癌組織Cx43與Smad1表達(dá)的相關(guān)性

3 討論

縫隙連接是細(xì)胞間進(jìn)行信息交流的一種特殊的膜結(jié)構(gòu)，由胞膜上的縫隙連接蛋白亞單位(Cx)構(gòu)成，發(fā)生腫瘤時常常出現(xiàn)Cx的異常表達(dá)。Cx中的Cx43是縫隙鏈接通道的組成部分，在細(xì)胞間信號傳遞中發(fā)揮重要作用，參與了多種疾病和腫瘤的發(fā)生[4]。研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤細(xì)胞存在Cx43表達(dá)的缺失，導(dǎo)致了癌細(xì)胞中最重要的細(xì)胞間接觸抑制的消失，從而促進(jìn)了癌組織的生長[5]。本研究證實(shí)了這一點(diǎn)，胃癌組織Cx43的陽性表達(dá)率明顯低于正常胃組織，提示Cx43表達(dá)下調(diào)導(dǎo)致的細(xì)胞縫隙連接通訊(GJIC)異常或消失可能參與了胃癌的發(fā)生過程。

Smad1作為Smads家族中受體調(diào)節(jié)型蛋白，是細(xì)胞內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子，它通過直接與DNA結(jié)合作為轉(zhuǎn)錄因子，或者與其它的轉(zhuǎn)錄因子以及細(xì)胞活化因子相互作用把BMP信號通路轉(zhuǎn)移至細(xì)胞內(nèi)[6]。Hatakeyama等[7]認(rèn)為，BMP可作為一種細(xì)胞生長因子參與細(xì)胞內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，通過調(diào)節(jié)下游癌基因和抑癌基因(DNA-BP，β-catenin/ TCF)的表達(dá)促進(jìn)細(xì)胞增殖、抑制細(xì)胞凋亡，從而參與腫瘤的發(fā)生。而Smad1是BMP通路的關(guān)鍵組件和調(diào)節(jié)因子，它的異常表達(dá)可使BMP信號傳遞中斷，細(xì)胞逃脫BMP的生長抑制作用，進(jìn)而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生[8-9];同時，Smad1也可形成異源聚合體移進(jìn)細(xì)胞核，影響B(tài)MP通路基因的轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致BMP信號通路的異常變化[10]。本研究發(fā)現(xiàn)，胃癌組織Smad1的陽性表達(dá)率明顯高于正常黏膜，且Smad1的陽性表達(dá)與胃癌的分化程度、浸潤深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)有關(guān)，表明Smad1可能通過影響B(tài)MP通路參與胃癌的發(fā)生發(fā)展。

本研究亦發(fā)現(xiàn)，胃癌組織Cx43的陽性表達(dá)與Smad1呈顯著負(fù)相關(guān)，提示在胃癌發(fā)生過程中Cx43和Smad1的相互作用可能具有重要意義，有待深入研究。

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EXPRESSION AND SIGNIFICANCE OF CX43 AND SMAD1 IN GASTRIC CANCER

LI Jian-ling, SU Zhen, LIU Hai-wang, et al
(The Affiliated Hospital of Chengde Medical College, Hebei Chengde 067000, China)

Objective:To investigate the expression and clinical signif i cance of Cx43 and Smad1 in gastric cancer.Methods:Immunohistochemical staining was used to detect the expression of Cx43 and Smad1 in gastric cancer and paracarcinoma tissue.Results:The positive expression rate of Cx43 in gastric cancer was obviously lower than normal gastric tissue, while the positive rate of Smad1 was obviously higher (P＜0.05). In gastric cancer, the positive expression of Cx43 and Smad1 were irrelevant to age and sex, but associated with differentiation degree, lymph node metastasis and invasion depth (P＜0.01, P＜0.05). In gastric cancer, the expression of Cx43 showed signif i cant negative correlation with Smad1 expression(P＜0.01).Conclusions:Abnormal expression of Cx43 and Smad1 may play important role in development of gastric cancer.

Gastric cancer; Cx43; Smad1; Immunohistochemistry胃癌的發(fā)生發(fā)展是一個多因素，多步驟的漸進(jìn)過程，

R735.2

A

1004-6879(2014)03-0195-03

2013-11-04)

△ 通訊作者

【關(guān)鍵詞】胃癌;Cx43;Smad1;免疫組織化學(xué)