劉永瓊，李 金，張爽爽,肖 芳，余 佩

1.武漢工程大學(xué)化工與制藥學(xué)院，湖北 武漢 430074；2.湖北省新型反應(yīng)器與綠色化學(xué)工藝重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(武漢工程大學(xué))，湖北 武漢 430074；3.國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局行政受理服務(wù)中心，北京 100036

0 引 言

硫胺素又稱維生素B1或抗神經(jīng)炎素，在體內(nèi)的活性形式為焦磷酸硫胺素(TPP)，TPP是脫羧酶、脫氫酶的輔酶，參與物質(zhì)(特別是糖類)代謝中的氧化脫羧分解反應(yīng)，具有促進(jìn)糖代謝、為神經(jīng)活動(dòng)提供能量、抑制膽堿酯酶活性保護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)和利尿維持體內(nèi)水分平衡等多種生理功能[1-3].維生素B1作為營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑已廣泛應(yīng)用于食品及飲料行業(yè)中[4]，我國(guó)“食品營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑衛(wèi)生使用標(biāo)準(zhǔn)”[5]規(guī)定了維生素B1的使用限量，因此有必要測(cè)定食品及飲料中維生素B1的含量，國(guó)家頒布的“GB/T 5009.84-2003食品中硫胺素的測(cè)定”[6]方法廣譜，但操作復(fù)雜，費(fèi)時(shí)，精密度不高，為了簡(jiǎn)單、高效并有針對(duì)性的測(cè)定固體飲料中維生素B1的含量，并為研制的泡騰片(固體飲料)提供科學(xué)合理的質(zhì)量控制方案，以現(xiàn)有研究[7-9]為基礎(chǔ)，采用高效液相色譜法對(duì)泡騰片中維生素B1含量進(jìn)行測(cè)定，并對(duì)其進(jìn)行方法學(xué)研究.

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器

高效液相色譜儀(DIONEX，P680 HPLC PUMP)；色譜柱(C18粒徑5 μm，4.6×250 mm，Dionex)；KQ5200DB型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；臺(tái)式干燥箱(中外合資重慶四達(dá)實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)；電熱鼓風(fēng)干燥箱(重慶銀河試驗(yàn)儀器有限公司)；RUPT-20型超純水機(jī)(滕州新瑞分析儀器有限公司)；PB203-N電子天平(上海Mettler-toledo公司).

1.2 材料與試劑

維生素B1對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院)；泡騰片(自制，批號(hào)：20110920、20110921、20110922)；甲醇(色譜純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；磷酸二氫鉀(分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；鹽酸(分析純，天津博迪化工有限公司)；超純水(實(shí)驗(yàn)室自制).

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 溶液的制備

2.1.1 溶劑的配制 取9.0 mL鹽酸，加蒸餾水至1 000 mL，即得0.1 mol/L鹽酸.

2.1.2 維生素B1對(duì)照品溶液的配制 精密稱取維生素B1對(duì)照品10 mg于100 mL容量瓶中，加少量溶劑使其完全溶解，用溶劑稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm濾膜過濾，精密移取續(xù)濾液1.4 mL于10 mL容量瓶，用溶劑定容，即得質(zhì)量濃度為14 mg/L的對(duì)照品溶液.

2.1.3 空白溶液的配制 按泡騰片配方比例，精密稱取配方量所對(duì)應(yīng)的輔料適量，于100 mL容量瓶中，加少量溶劑使之完全溶解，用溶劑稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm濾膜過濾，精密移取續(xù)濾液1.4 mL于10 mL容量瓶，用溶劑定容，即得.

2.1.4 供試品溶液的制備 取泡騰片(批次號(hào)：20110920)10片(排除偶然片劑差異的影響)，碾成粉末，精密稱取約相當(dāng)于維生素B110 mg的粉末適量，于100 mL容量瓶中，加一定量溶劑使其溶解完全，用溶劑稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm濾膜過濾，精密移取續(xù)濾液1.4 mL于10 mL容量瓶，用溶劑定容，即得.

2.2 色譜條件

色譜柱：Diamondsil C185 μm×250 mm×4.6 mm；流動(dòng)相：0.05 mol/L KH2PO4(pH=7)∶甲醇=90∶10；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：20 μL；檢測(cè)波長(zhǎng)：238 nm；柱溫：室溫；理論塔板數(shù)應(yīng)≥1 500.

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 溶劑及輔料的干擾實(shí)驗(yàn) 依次將空白溶液、對(duì)照品溶液、供試品溶液按2.2項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測(cè)定.

2.3.2 檢測(cè)線 取維生素B1對(duì)照品溶液，逐級(jí)稀釋，按2.2項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，直至主峰峰高為基線噪音的3倍，此時(shí)對(duì)照品溶液的質(zhì)量濃度即為檢測(cè)限.

2.3.3 降解產(chǎn)物干擾實(shí)驗(yàn) 酸破壞實(shí)驗(yàn)酸溶液的配制：取8.3 mL 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為37%的濃鹽酸加蒸餾水至100 mL.同2.1.4準(zhǔn)確稱取供試品適量(約相當(dāng)于維生素B110 mg)，置100 mL容量瓶中，加2 mL酸溶液，靜置，避光放置24 h，加少量溶劑使完全溶解，用溶劑稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm濾膜過濾，精密移取續(xù)濾液1.4 mL于10 mL容量瓶，用溶劑定容，按2.2項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測(cè)定.

堿破壞實(shí)驗(yàn)的堿溶液配制：取4 g左右NaOH加蒸餾水至100 mL.同法加2 mL堿溶液，靜置，避光放置24 h，加少量溶劑使完全溶解，用溶劑稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm濾膜過濾，精密移取續(xù)濾液1.4 mL于10 mL容量瓶，用溶劑定容,按2.2項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測(cè)定.

高溫實(shí)驗(yàn)：同法于60 ℃溫度下10 d，按2.2項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測(cè)定.

光破壞實(shí)驗(yàn)：同法于4 500 Lx條件下光照10 d，按2.2項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測(cè)定.

2.3.4 線性關(guān)系考察實(shí)驗(yàn) 精密稱取維生素B1適量，配制系列標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度分別為8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48 mg/L，依次由低質(zhì)量濃度到高質(zhì)量濃度按2.2項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以濃度和峰面積做圖，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差.

2.3.5 精密度實(shí)驗(yàn) 取標(biāo)準(zhǔn)品溶液按2.2項(xiàng)下的色譜條件重復(fù)測(cè)定6次.

2.3.6 回收率實(shí)驗(yàn) 取泡騰片(批次：20110922)40片(排除偶然片劑差異的影響)，碾成粉末，分別精密稱取三批適量樣品粉末于100 mL容量瓶中，加少量溶劑使完全溶解，用溶劑稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm濾膜過濾，精密移取續(xù)濾液1.4 mL于10 mL容量瓶，用溶劑定容，即得含維生素B1質(zhì)量濃度分別為14、24、34 mg/L的樣品溶液，依次由低質(zhì)量濃度到高質(zhì)量濃度按2.2項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，并按如下公式進(jìn)行計(jì)算.

其中W——回收率；C′——測(cè)定值；C0——空白值；C——加入量.

2.4 含量測(cè)定

取20110920、20110921、20110922三個(gè)不同批次的?；撬岫嗑S泡騰片照2.1.4進(jìn)行配制，按2.2項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，得出試樣中維生素B1的質(zhì)量分?jǐn)?shù).

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 方法學(xué)考察結(jié)果

3.1.1 溶劑及輔料的干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果 由圖1可知，溶液中輔料不干擾樣品測(cè)定，此法的專屬性好.

3.1.2 檢測(cè)限實(shí)驗(yàn)結(jié)果 按照主峰峰高為基線噪音的3倍計(jì)算，檢測(cè)限為0.4 mg/L.

3.1.3 降解產(chǎn)物干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果 由圖2可知，維生素B1在酸、堿、高溫、光照等環(huán)境下較穩(wěn)定，且降解產(chǎn)物能與維生素B1很好地分離，說明在該色譜條件下能有效地測(cè)定本品的有關(guān)物質(zhì).

圖2 酸破壞(a)、堿破壞(b)、高溫破壞(c)和光破壞(d) 的實(shí)驗(yàn)色譜圖Fig.2 Chromatograms of examination of degradation products interference of acid(a),alkali(b),High-temperature(c) and light(d)

3.1.4 線性關(guān)系考察結(jié)果 以維生素B1的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(X)，所得峰面積為縱坐標(biāo)(Y)作圖，得線性方程：Y=0.562 4X+3.233(R2=0.999 1，n=11)，可知維生素B1在8～48 mg/L的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，色譜峰面積(Y)與進(jìn)樣質(zhì)量濃度(X)線性關(guān)系良好.

3.1.5 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果 由表1可知，RSD小于5%，精密度良好.

3.1.6 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果 由表2可知，其回收率均在98%～105%之間，表明此法準(zhǔn)確度高，符合定量分析的要求.

表1 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 1 Analytical results of precision

表2 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 2 Analytical results of recovery

3.2 樣品含量檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

由表3可知，三批樣品中維生素B1質(zhì)量分?jǐn)?shù)均在98%～102%范圍之內(nèi)，說明所建立的色譜條件可用于本品的含量測(cè)定.

表3 樣品質(zhì)量分?jǐn)?shù)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 3 Analytical results of content determination

4 結(jié) 語

a.方法學(xué)考察實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在該色譜條件下，降解產(chǎn)物對(duì)維生素B1含量測(cè)定無干擾，系統(tǒng)適用性好，專屬性強(qiáng)，線性關(guān)系良好，精密度、回收率均好.

b.所建立的高效液相色譜條件對(duì)泡騰片中維生素B1進(jìn)行含量測(cè)定，方法可行、準(zhǔn)確度高，輔料無干擾，且操作簡(jiǎn)便；不同批的泡騰片含量測(cè)定結(jié)果表明，維生素B1含量穩(wěn)定，可用于質(zhì)量控制.

致 謝

感謝武漢工程大學(xué)提供的實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，并感謝本實(shí)驗(yàn)室其他成員給予的支持與幫助！

[1] 錢文．維生素的分類和特性[J].食品與健康，2001(2)：14.

QIAN Wen.The classification and characteristics of vitamin[J].Food and health,2001(2):14.(in Chinese)

[2] WAKE T,KUNISAWA J,HASHIMOTO E,et al.Vitamin B1is an essential survival factor for naive B cells but not IgA-secreting plasma cells[J].Journal of Immunology,2012,188:32-34.

[3] LECERF J M.100 years of an old lady:Vitamin B1[J].Correspondances en Metabolismes Hormones Diabetes et Nutrition,2012,16(1/2):6-10.

[4] 徐興光．一種零熱量的多味維生素飲料:中國(guó)，A23L2/38; A23L1/09[P].2011-02-02.

XU Xing-guang.A zero-calorie flavored multi-vitamin drink:Chinese.A23L2/38; A23L1/09[P].2011-02-02.(in Chinese)

[5] 中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn).GB14880-2012食品營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑衛(wèi)生使用標(biāo)準(zhǔn)[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2013.

National food safety standard.14880-94 Hygienic standard for the use of nutritional fortification substances in foods[S].Beijing: Standards press of China,2013.(in Chinese)

[6] 中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn).GB/T5009.84-2003食品中硫胺素的測(cè)定[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2004.

National food safety standard.5009.84-2003.Determination of thiamine (vitamin B1) in foods[S].Beijing: Standards press of China,2004 (in Chinese)

[7] 陳向明．反相高效液相色譜法測(cè)定維生素B1的含量[J].福建分析測(cè)試,2012,21(1)： 51-52.

CHEN Xiang-ming.Determination of vitamin B1content by high performance liquid chromatography[J].Fujian Analysis & Testing,2012,21(1):51-52.(in Chinese)

[8] THOMAS S,KUMAR R,SHARMA A,et al.Stability-indicating HPLC method for determination of vitamins B1,B2,B3and B6in pharmaceutical liquid dosage form[J].Indian Journal of Chemical Technology,2008,15: 598-603.

[9] 肖芳，周霽，嚴(yán)少康，等.HPLC法測(cè)定癸氧喹酯固體分散體有關(guān)物質(zhì)及其含量[J].武漢工程大學(xué)學(xué)報(bào)，2011(8):56-59.

XIAO Fang,ZHOU Ji,YAN Shao-kang,et al.Determination of decoquinate dispersions of solid by HPLC method[J].J Wuhan lnst Tech,2011(8):56-59.(in Chinese)