吳丕業(yè)， 賴小燕 ，湯清華 ，戴 鵬 ，查高峰*

1．武漢工程大學(xué)材料科學(xué)與工程學(xué)院，湖北 武漢430200；2武漢理工大學(xué)化學(xué)化工與生命科學(xué)學(xué)院，湖北武漢 430070

0 引 言

磷酸奧司他韋(Oseltamivir，phosphate) 化學(xué)名為(3R，4R，5S)- 3 -(1-乙基丙氧基)-4-乙酰胺-5-氨基-1-環(huán)己烯-1-羧酸乙酯磷酸鹽(1)，由瑞士羅氏制藥公司研制，在臨床上是用于預(yù)防和治療甲型和乙型流感的選擇性神經(jīng)氨酸酶抑制劑，是治療禽流感最為有效的藥物[1-4].美國藥典38 版提出了1中的2 個有關(guān)物質(zhì)A、B ( 圖1)并對其進(jìn)行了限度控制.

圖1 1和雜質(zhì)A、B結(jié)構(gòu)式

其中有關(guān)物質(zhì)A是1的水解物 ，化學(xué)名為(3R，4R，5S)-3-(1-乙基丙氧基)-4-乙酰胺-5-氨基-1-環(huán)己烯-1-羧酸，已有多種合成方法被報道.其中，根據(jù)Fujiko Konno[5]等人所采用的方法，嘗試在100 ℃下進(jìn)行水解反應(yīng)，發(fā)現(xiàn)原料大量分解，不利于產(chǎn)品純度及產(chǎn)率優(yōu)化.而根據(jù)Bischofberger[6]的方法，利用四氫呋喃作溶劑，在室溫下進(jìn)行反應(yīng)，能得到需要的反應(yīng)物，但其使用制備液相法進(jìn)行分離純化，無法獲得較大量的樣品，也不利于大規(guī)模推廣應(yīng)用.因此對其優(yōu)化后處理工藝進(jìn)行了監(jiān)控，使用常規(guī)分離手段得到了高純度的雜質(zhì)A，合成收率為86.6% ( 圖2).

圖2 雜質(zhì)A的合成路線

有關(guān)物質(zhì)B是美國藥典38 版所載磷酸奧司他韋中的另一個雜質(zhì)，化學(xué)名為3-羥基-4-乙酰氨基苯甲酸乙酯，為非疊氮合成工藝合成磷酸奧司他韋時產(chǎn)生的工藝雜質(zhì)，目前沒有相關(guān)的合成報道.因此制備高純度的雜質(zhì)B，對于該品種的生產(chǎn)、貯存和檢驗均具有現(xiàn)實意義.實驗[7-9]設(shè)計了雜質(zhì)B的合成路線：以3-羥基-4-氨基-苯甲酸為原料，在醋酸鈉和鹽酸存在下經(jīng)乙酸酐雙乙?；磻?yīng)得到3-乙酰氧基-4-乙酰胺基-苯甲酸2，再在堿性條件下選擇性水解得到3-羥基-4-乙酰胺基-苯甲酸3，3在碳酸氫鈉催化下與溴乙烷進(jìn)行乙酯化得到雜質(zhì)B，總收率為52.1% ( 圖3).

圖3 雜質(zhì)B的合成路線

1 實驗部分

1.1 分析儀器與試劑

Avance HD III 500NMR核磁共振儀(瑞士Bruker公司，TMS為內(nèi)標(biāo))；質(zhì)譜儀(Thermo-LTQXL)；磷酸奧司他韋((3R，4R，5S)- 3 -(1-乙基丙氧基)-4-乙酰胺-5-氨基--1-環(huán)己烯-1-羧酸乙酯磷酸鹽)來自宜昌長江藥業(yè)有限公司，純度為99.9%；3-羥基-4-氨基-苯甲酸購自aladdin試劑，純度98.0%； 氫型732陽離子交換樹脂(國藥試劑)；氫氧化鈉、氫氧化鉀、鹽酸、碳酸氫鈉、四氫呋喃、N,N-二甲基甲酰胺、乙酸乙酯、甲醇、醋酸鈉、乙酸酐、溴乙烷等均為分析純.

1.2 磷酸奧司他韋雜質(zhì)A的合成

向100 mL反應(yīng)瓶中投入磷酸奧司他韋(1.00 g)、乙酸乙酯(20 mL)、水(10 mL)，室溫下攪拌，滴加1 mol/L的碳酸鈉溶液，待水層pH值至7～8時，停止滴加，分層，水層使用乙酸乙酯萃取2次(每次20 mL)，合并有機(jī)層，用蒸餾水(5 mL)攪拌洗滌1次，有機(jī)層加入無水硫酸鈉干燥8 h,濃縮得白色固體.向濃縮物中加入四氫呋喃(40 mL)、1 mol/L氫氧化鉀溶液3.6 mL，控溫15～20 ℃下攪拌反應(yīng)2 h，TLC監(jiān)測反應(yīng)結(jié)束后，加入氫型732陽離子交換樹脂約0.9 g，攪拌10 min后，檢測pH值應(yīng)為5～6，濾去樹脂，并使用少量四氫呋喃淋洗，合并洗濾液濃縮至干，加入石油醚降溫至0～5 ℃攪拌結(jié)晶2 h，過濾，減壓干燥得白色固體0.60 g(收率86.6%).1H-NMR (500 MHz, DMSO) 6.37 (s, 1H,2-CH), 4.11 (d, 1H，3-CH), 3.69 (dd, J = 19.8, 9.1 Hz, 1H，4-CH), 3.40～3.28 (m, 1H，6-CH), 3.15 (dd, J = 16.2, 10.8 Hz, 1H,6-CH), 2.84～2.73 (m, 1H,5-CH), 2.26～2.15 (m, 1H,1'-CH), 1.84 (s, 3H，CO-CH3), 1.50～1.27 (m, 4H，—CH2-,—CH2-), 0.83 (t, J=7.3 Hz, 3H，—CH3), 0.78 (t, J = 7.3 Hz, 3H，—CH3). MS(ESI)：m/z 286.1 (M+1).

1.3 磷酸奧司他韋雜質(zhì)B的合成

1.3.1 3-乙酰氧基-4-乙酰氨基-苯甲酸(2)的合成 向100 mL單口瓶中，加入2 mol/L鹽酸20 mL、再加入醋酸鈉10.0 g攪拌下使之溶解，降溫至0～5 ℃，加入3-羥基-4-氨基苯甲酸1.0 g，緩慢滴加乙酸酐10 mL，滴畢，保持0～5 ℃下攪拌30 min，升溫至15～25 ℃下反應(yīng)6 h，逐步析出大量棕色沉淀，TLC監(jiān)測反應(yīng)結(jié)束后，降溫至0～5 ℃結(jié)晶1 h，過濾，水洗，減壓干燥得淡棕色固體1.09 g，產(chǎn)率70.4%.1H-NMR (500 MHz, DMSO) δ 8.16 (d, J=8.6 Hz, 1H,5-H), 7.78 (dd, J=8.6, 1.6 Hz, 1H,6-H), 7.68 (d, J=1.6Hz, 1H,2-H), 2.34 (s, 3H,CH3COO—), 2.13 (s, 3H,CH3CON—).

1.3.2 3-羥基-4-乙酰氨基-苯甲酸(3)的合成 在100 mL的單口瓶中，加入30 mL水，再加入0.12 g氫氧化鈉,溶解后加入3-乙酰氧基-4-乙酰氨基苯甲酸0.6 g，控溫15～20 ℃攪拌反應(yīng)30 min，TLC監(jiān)測反應(yīng)結(jié)束后，用1 mol/L鹽酸調(diào)節(jié)pH值為2，有大量固體析出，降溫至0～5 ℃結(jié)晶1 h,過濾，水洗，減壓干燥得淡棕色固體0.44 g，產(chǎn)率89.1%.1H-NMR (500 MHz, DMSO) δ 8.05 (d, J = 8.4 Hz, 1H,5-H), 7.44 (d, J = 1.6 Hz, 1H,2-H), 7.38 (dd, J = 8.4, 1.6 Hz, 1H,6-H), 2.14 (s, 3H, CH3CON—).

1.3.3 3-羥基-4-乙酰氨基苯甲酸乙酯(雜質(zhì)B)的合成在25 mL單口瓶中，加入0.2 g 3-羥基-4-乙酰氨基苯甲酸、1 mL DMF、0.1 g碳酸氫鈉，在室溫下攪拌20 min，再向反應(yīng)中加入溴乙烷0.17 g，升溫至45～50 ℃反應(yīng)12 h，TLC監(jiān)測反應(yīng)結(jié)束后，降溫至室溫，加入20 mL水，加入乙酸乙酯萃取2次(每次20 mL)，合并有機(jī)層水洗1次，再加入水10 mL，攪拌下用1 mol/L的NaOH溶液調(diào)pH=8～9，分層，棄去有機(jī)層，水層加1 mol/L鹽酸調(diào)節(jié)pH=5～6，有大量固體析出，過濾，水洗，減壓干燥得淡棕色固體0.21 g，產(chǎn)率83.0%.1H-NMR (500 MHz, DMSO) δ 8.09 (d, J =8.4 Hz, 1H, 5-H), 7.46 (d, J=1.7 Hz, 1H, 2-H), 7.40 (dd, J=8.4, 1.6 Hz, 1H, 6-H). 4.27 (q, J=7.1 Hz, 2H,—OCH2), 2.14 (s, 3H,—CH3CON—), 1.30 (t, J=7.1 Hz, 3H,—CH2CH3). MS(ESI)：m/z 224.1 (M+1).

2 結(jié) 語

雜質(zhì)的存在在藥品中是不可避免的，而且對于雜質(zhì)的控制是藥品安全保證的關(guān)鍵，因此對于一種藥品進(jìn)行雜質(zhì)研究是一項重要的工作.

本研究對雜質(zhì)A的合成工藝進(jìn)行了改進(jìn)，改進(jìn)后工藝操作簡單，高收率的得到了雜質(zhì)A，驗證了雜質(zhì)A的產(chǎn)生機(jī)理，提示生產(chǎn)企業(yè)在貯存磷酸奧司他韋過程中保持干燥，其結(jié)果經(jīng)1H-NMR確證其結(jié)構(gòu).

雜質(zhì)B經(jīng)Scifinder檢索目前沒有其合成方法，本實驗探索性的合成了雜質(zhì)B,并對其進(jìn)行了條件優(yōu)化，整條路線的總收率為52.1%，雖然總的收率不高，但是三步操作較為簡單，成本較低，沒有引起環(huán)境污染，首次對該化合物進(jìn)行了合成研究，并經(jīng)1H-NMR確證其結(jié)構(gòu)，對于企業(yè)在生產(chǎn)磷酸奧司他韋的過程中對雜質(zhì)進(jìn)行控制有重要意義.

致 謝

感謝武漢理工大學(xué)化學(xué)化工與生命科學(xué)學(xué)院對本實驗的幫助.

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