付志彬，鐘 山，朱 濤

（1．成都軍區(qū)機(jī)關(guān)醫(yī)院急診科，四川 成都610000；2．四川大學(xué)華西醫(yī)院呼吸病學(xué)研究室／呼吸內(nèi)科，四川 成都610041）

目前慢性阻塞性肺疾?。╟hronic obstructive pulmonary disease，COPD）在人類(lèi)所有疾病中發(fā)病率位列第4位，并具有病程長(zhǎng)、發(fā)病率高和致殘致死率高等特點(diǎn)［1～3］。導(dǎo)致COPD發(fā)生與發(fā)展的根本原因和基本病因是吸煙等有害煙霧和顆粒導(dǎo)致的以慢性持續(xù)性氣道炎癥為中心的全身系統(tǒng)性炎癥反應(yīng)。血必凈主要成分為紅花、赤芍、川芎、丹參和當(dāng)歸的提取物，紅花黃色素A是其主要成分［4］。有研究發(fā)現(xiàn)，血必凈具有較強(qiáng)的炎癥抑制作用，已廣泛應(yīng)用于膿毒血癥、急性呼吸窘迫綜合癥、膿毒性休克和支氣管哮喘等疾病的治療。本研究目的是進(jìn)一步探討血必凈在慢性阻塞性肺疾病急性發(fā)作期（AECOPD）治療中的價(jià)值和其潛在的藥理機(jī)制，擬為進(jìn)一步臨床研究奠定基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1．1 一般資料 按照2010版慢性阻塞性肺疾病全球倡議（global initiative for chronic obstructive lung disease，GOLD）標(biāo)準(zhǔn)［1］，將我院2012年5月～2013年12月收治的80例D級(jí)AECOPD患者，隨機(jī)分為干預(yù)組（血必凈＋常規(guī)治療組）和對(duì)照組（常規(guī)治療組）各40例。干預(yù)組中男19例，女21例，年齡70．2～86．2歲；對(duì)照組中男22例，女18例，年齡69．4～86．3歲。COPD病史皆大于15年。兩組患者年齡、病程和病情等差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05）。

1．2 治療方法 兩組患者均給予抗感染、抗炎、吸氧及平喘藥等常規(guī)治療。干預(yù)組在常規(guī)治療的基礎(chǔ)上再使用血必凈注射液（國(guó)藥準(zhǔn)字Z20040033，天津紅日藥業(yè)股份有限公司）50ml加0．9%生理鹽水100ml靜脈滴注，1h／次，一天2次。

1．3 觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法 ①血?dú)夥治觯喊╬H、PO2和PCO2。②時(shí)間肺活量：在吸入沙丁胺醇200μg 15min后測(cè)定FEV1占預(yù)計(jì)值%。③血中低氧誘導(dǎo)因子－1α（TNF－α）水平：取患者治療0天與10天時(shí)清晨空腹靜脈血，按ELISA試劑盒（R＆D Systems，USA）說(shuō)明書(shū)方法檢測(cè)血中TNF－α水平。④血細(xì)胞中 HIF－1α活性：患者治療0天和10天時(shí)用western blot法檢測(cè)血細(xì)胞中HIF－1α蛋白的表達(dá)水平。按試劑盒操作要求，先提取血液中總蛋白，并進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS－PAGE），然后轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素濾膜上，用脫脂奶粉封閉1小時(shí)，分別加入兔抗人單克隆抗體anti－HIF－1α（1∶600）和anti－β－actin（1∶1200），4℃孵育過(guò)夜，洗膜后加入相應(yīng)的辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗（1∶1000），用ECL進(jìn)行顯色，凝膠成像分析系統(tǒng)進(jìn)行掃描，用 HIF－1α／β－actin條帶灰度比值作為HIF－1α蛋白的相對(duì)表達(dá)量。

1．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 11．0軟件進(jìn)行分析，有效率比較用t檢驗(yàn)，P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 血?dú)夥治龊头喂δ軠y(cè)定 治療10天后兩組患者的動(dòng)脈血?dú)猓ˋBG）參數(shù)（pH、PO2和PCO2），以及FEV1占預(yù)計(jì)值%均有明顯改善，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0．05）；且干預(yù)組患者 ABG參數(shù)（pH、PO2和PCO2），以及FEV1占預(yù)計(jì)值%改善水平較對(duì)照組更加明顯，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0．05），見(jiàn)表1。

2．2 血漿中TNF－α水平測(cè)定 兩組患者治療10天后血中TNF－α水平較治療前均有顯著降低，且干預(yù)組患者血中TNF－α水平較對(duì)照組下降更加明顯，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0．05），見(jiàn)表2。

表1 血?dú)夥治龊虵EV1 比較（±s，n＝40）Table 1 Arterial gas analysis（ABG）and lung function analysis

表1 血?dú)夥治龊虵EV1 比較（±s，n＝40）Table 1 Arterial gas analysis（ABG）and lung function analysis

注：與治療前比較，①P＜0．05；與對(duì)照組比較，②P＜0．05

組別 pH PO2（mmHg） PCO2（mmHg）FEV1占預(yù)計(jì)值%對(duì)照組7．11±2．2 42．2±11．4 86．7±8．5 26．4±10．5 7．25±1．8① 61．3±9．2① 49．3±5．7① 53．2±16．7①干預(yù)組 7．12±1．9 43．9±12．5 85．6±10．9 25．1±11．6 7．35±1．3①② 66．5±8．1①② 42．5±3．6①② 64．9±9．8①②

2．3 血細(xì)胞HIF－1α蛋白表達(dá)水平 兩組患者治療10天后血細(xì)胞中HIF－1α蛋白表達(dá)水平較治療前均有顯著降低，且干預(yù)組患者血細(xì)胞HIF－1α蛋白表達(dá)水較對(duì)照組下降更明顯，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0．05），見(jiàn)表2、圖1。

表2 血漿TNF－α水平和HIF－1α蛋白表達(dá)水平變化（±s，n＝40）Table 2 The serum level of TNF－αand the protein expression of HIF－1α

表2 血漿TNF－α水平和HIF－1α蛋白表達(dá)水平變化（±s，n＝40）Table 2 The serum level of TNF－αand the protein expression of HIF－1α

注：與治療前比較，①P＜0．05；與對(duì)照組比較，②P＜0．05

分組 TNF－α（ng／ml） HIF－1α／β－actin 比值對(duì)照組2．67±0．58 0．92±0．08 1．89±0．31① 0．65±0．11①干預(yù)組 2．72±0．64 0．94±0．07 1．52±0．27①② 0．43±0．06①②

圖1 HIF－1α蛋白的表達(dá)western blot結(jié)果Figure 1 The Western blot results of HIF－1αin each group

3 討論

COPD是臨床最常見(jiàn)的呼吸系統(tǒng)疾病，也是導(dǎo)致人類(lèi)死亡的4大疾病之一［1～3］。目前認(rèn)為COPD的發(fā)生、發(fā)展是由于有害氣體和顆粒導(dǎo)致的慢性持續(xù)性以中小氣道為中心的全身性炎癥反應(yīng)［4］。反復(fù)炎癥反應(yīng)和組織修復(fù)致肺泡組織不可逆損傷是導(dǎo)致COPD通氣功能下降的基礎(chǔ)。目前發(fā)現(xiàn)COPD相關(guān)的氣道和全身炎癥反應(yīng)與該病的臨床癥狀和肺功能下降等有顯著的相關(guān)性［1～3，4］。COPD的治療除控制戒煙和遠(yuǎn)離污染環(huán)境等觸發(fā)因素外，大體可分為抗炎治療和舒張支氣管兩個(gè)方面，其中炎癥調(diào)節(jié)治療是COPD治療的核心。COPD急性發(fā)作期（AECOPD）是指在原有的維持治療基礎(chǔ)上患者臨床癥狀出現(xiàn)加重，包括咳嗽、咳痰、發(fā)熱和呼吸困難等癥狀的出現(xiàn)和或較前更加明顯。抑制炎癥反應(yīng)是AECOPD治療的關(guān)鍵。

血必凈注射液的主要成分為紅花、赤芍、丹參、當(dāng)歸和川芎5味中藥，紅花黃色素A、川芎嗪、丹參素、阿魏酸和芍藥苷是其主要的藥理成份［4］?；A(chǔ)和臨床研究證實(shí)，血必凈可有效抑制多種致炎因子誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。改善重癥肺炎患者血中IL－6和IL－10水平和臨床指標(biāo)，抑制支氣管哮喘患者的氣道炎癥水平，目前已廣泛地應(yīng)用于膿毒血癥、ARDS、膿毒性休克和支氣管哮喘等炎癥性疾病的臨床治療［5～8］。本研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)重度AECOPD患者給予積極地抗感染、抗炎、吸氧及平喘藥等10天治療后，患者臨床癥狀、ABG參數(shù)（pH、PO2和PCO2），以及FEV1占預(yù)計(jì)值%均有明顯改善（均P＜0．05）。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，在常規(guī)治療基礎(chǔ)上加用血必凈治療的患者ABG指標(biāo)（pH、PO2和PCO2）和FEV1占預(yù)計(jì)值百分比較干預(yù)組改善更明顯（均P＜0．05），提示血必凈具有改善AECOPD患者臨床癥狀和肺功能的作用。

TNF－α 是 重 要 的 促 炎 介 質(zhì) （pro－inflammatory mediator），主要由巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞等炎癥細(xì)胞合成分泌［9］。TNF－α作為炎癥介質(zhì)可通過(guò)與相應(yīng)組織細(xì)胞表明的TNFR1和TNFR2兩種受體結(jié)合發(fā)揮多種生物學(xué)效應(yīng)，包括直接誘導(dǎo)組織細(xì)胞損傷、激活細(xì)胞凋亡信號(hào)通路、誘導(dǎo)自噬的發(fā)生和刺激其他炎癥細(xì)胞的活化和增殖等。臨床研究也證實(shí)，血和氣道分泌物中TNF－α濃度與COPD患者氣道和全身系統(tǒng)性炎癥反應(yīng)的嚴(yán)重程度有顯著的相關(guān)性，可用于COPD的病情評(píng)價(jià)和藥物反應(yīng)性評(píng)價(jià)［2，3，10］。我們的研究也發(fā)現(xiàn)，患者在給予積極治療10天后血中TNF－α水平較治療前有顯著降低，同時(shí)干預(yù)組患者血中TNF－α水平較對(duì)照組下降更加明顯。表明血必凈可有效抑制AECOPD患者的炎癥反應(yīng)水平。

HIF－1α是重要的核轉(zhuǎn)錄因子，在炎癥和缺氧狀態(tài)下對(duì)多種組織細(xì)胞的基因表達(dá)均有廣泛的調(diào)節(jié)作用。有研究證實(shí)，HIF－1α的活化和表達(dá)與COPD炎癥程度及COPD相關(guān)的肺動(dòng)脈高壓的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。我們用western blot法對(duì)HIF－1α蛋白表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)分析后發(fā)現(xiàn)，血必凈可有效抑制AECOPD患者血細(xì)胞中HIF－1α表達(dá)水平，且有可能是通過(guò)下調(diào)HIF－1α表達(dá)水平進(jìn)而改善AECOPD的炎癥反應(yīng)。同時(shí)在臨床研究過(guò)程中未發(fā)現(xiàn)與血必凈治療相關(guān)的嚴(yán)重不良反應(yīng)。

4 結(jié)論

我們的研究結(jié)果表明，血必凈注射液可能是通過(guò)下調(diào)HIF－1α的表達(dá)抑制AECOPD相關(guān)的炎癥反應(yīng)，改善患者的臨床癥狀和肺功能，對(duì)AECOPD具有輔助治療價(jià)值，可在臨床推廣應(yīng)用。

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