黃澤豪，郭家欣，沈賢娟

（福建中醫(yī)藥大學藥學院，福建福州350108）

十二時辰來源于毛茛科植物重瓣鐵線蓮Clematis florida var.Plena D.Don.，其根（或帶有少量根莖）在福安民間供藥用。據(jù)《福安畬醫(yī)畬藥》記載，其性溫，味辛，具有通行十二經(jīng)脈，祛風除濕，活血止痛，理氣通便，解毒等功效［1］，是頗具地方特色的一味民族藥。據(jù)考證其最早是以“鐵線牡丹”之名收載于《滇南本草》［2］，但《滇南本草》中所述之功效與《福安畬醫(yī)畬藥》中的功效并不完全相同。近年來，該藥不僅在當?shù)貜V泛應用，還高價銷往江浙等省區(qū)，常常供不應求。不管是從藥用價值還是從市場前景看，十二時辰都是十分值得關注的一味特色畬藥。然而迄今為止，對于十二時辰或其原植物重瓣鐵線蓮的研究都很少見報道，僅見關于重瓣鐵線蓮組織培養(yǎng)的文獻［3-4］，對于十二時辰的化學成分更是一無所知。木文擬對其揮發(fā)油組分進行分析，為保證該藥臨床應用的安全有效提供參考。

1 實驗部分

1.1 樣品及揮發(fā)油提取供試藥材采集于福建省福安市賽岐鎮(zhèn)高水筧畬族村，由該村駐村干部劉培欽提供，經(jīng)作者鑒定為毛茛科植物重瓣鐵線蓮Clematis florida var.Plena D.Don.的根及根莖，憑證標本保存于福建中醫(yī)藥大學中藥鑒定室。干燥的藥材粉碎得粗粉450 g，室溫下以95%乙醇反復冷浸及超聲提取數(shù)次后，減壓回收溶劑，得到浸膏，浸膏懸浮于蒸餾水中，水蒸氣蒸餾，用《中華人民共和國藥典》（2010版）規(guī)定的揮發(fā)油提取方法提取5 h，以無水硫酸鈉干燥得到揮發(fā)油部分。

1.2 儀器及分析條件6890N GC/5975 MS氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國安捷倫公司）；色譜柱為安捷倫DB-1石英毛細管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；進樣口溫度250℃，接口溫度230℃；載氣為氮氣，流速為0.9 mL/min；柱壓為80 kPa，分流比40∶1，進樣量1.0 μL；升溫程序及柱溫如下：60℃（50℃/min）→115℃（1℃/min）→145℃（10℃/min）→230℃，可達到較好分離效果。質(zhì)譜條件：電子轟擊源EI；電子能量70 eV；雙燈絲，掃描范圍40～400 m/z，掃描間歇1.0 s。峰面積歸一法計算各化合物的相對含量。

1.3 GC-MS測定取供試品溶液1 μL，以分流方式進樣，測得其氣相色譜-質(zhì)譜總離子流色譜圖。所得各色譜峰經(jīng)純度檢查，歸一化法測得各峰的相對含量。利用Class 5000色譜軟件及NIST05.L版質(zhì)譜譜庫進行檢索，并結合圖譜解析對色譜峰進行了鑒定。

2 結果

提取得到揮發(fā)油為白色固態(tài)，經(jīng)GC-MS檢測，其總離子流見圖1；經(jīng)分析得其揮發(fā)油的組分構成見表1。共鑒定出了其中的18種化合物，占總萃取物含量的69.62%。主要成分有棕櫚酸（33.46%）、十六酸乙酯（15.93%）、油酸乙酯（4.09%）、棕櫚酸甲酯（2.20%）、亞油酸乙酯（1.73%）、（Z）-6-十八烯酸（1.47%）、正二十一烷（1.37%）、十五烷酸（1.12%）。

圖1 十二時辰揮發(fā)油GC-MS總離子流圖

3 討論

鐵線蓮屬植物的揮發(fā)油已有較多的研究，如柱果鐵線蓮、粗齒鐵線蓮、青海粉綠鐵線蓮等。與文獻的研究結果比較，幾種鐵線蓮屬植物的揮發(fā)性成分較為相似，如東北鐵線蓮果的揮發(fā)油主要成分為二十二烷（9.57%）、十六烷酸（8.79%）、13-二烯酸（5.89%）、酞酸二丁酯（5.89%）、十六酸乙酯（5.50%）等［5］。柱果鐵線蓮揮發(fā)油的主要成分是亞油酸（29.69%），其次是棕櫚酸（12.37%）等［6］。青海粉綠鐵線蓮的揮發(fā)油主要成分為十六酸乙酯（24.06%）、9，12，15-十八三烯酸乙酯（9.75%）、亞油酸乙酯（5.10%）等［7］。粗齒鐵線蓮揮發(fā)油主要成分有棕櫚酸（52.75%）、植醇（13.89%）、9（Z），12（Z）-十八碳二烯酸（10.20%）、亞麻酸（7.39%）等［8］?？梢?，十二時辰的揮發(fā)油組分與同屬植物十分相似，以棕櫚酸等脂肪酸或酯類為主。

根據(jù)十二時辰的揮發(fā)油組分來看，主含棕櫚酸及棕櫚酸甲酯、乙酯等。據(jù)《國外醫(yī)藥：植物藥分冊》報道，棕櫚酸甲酯治療胃腸功能失調(diào)，這可能是其具有治療反胃嘔吐功效［2］的有關成分。

畬醫(yī)認為十二時辰味辛，性溫，具有通經(jīng)活絡、祛風除濕、活血止痛之功效，用于治療跌打損傷、關節(jié)腫痛等［1］。中藥藥理研究表明，類似通經(jīng)活絡、祛風除濕、活血止痛之功效的“辛味藥”多與所含揮發(fā)油或其它脂溶性成分有關，或者其起藥效作用的成分為非揮發(fā)性成分。當然，鑒于對十二時辰的研究才剛剛開始，其揮發(fā)性成分與其藥效的相關性還有待進一步的研究探討。

表1 十二時辰的揮發(fā)油組分

［1］ 鐘隱芳.福安畬醫(yī)畬藥［M］.福州：海風出版社，2010：109-110.

［2］ 蘭茂.滇南本草［M］.昆明：云南科學技術出版社，2004：675-676.

［3］ 周瓊，張麗瓊，屈國勝，等.重瓣鐵線蓮組織培養(yǎng)研究［J］.陜西農(nóng)業(yè)科學，2008，54（5）：92-93.

［4］ 張濤，周瓊，張麗瓊，等.重瓣鐵線蓮愈傷組織誘導研究［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學，2008，36（22）：9402，9542.

［5］ 楊美林，仲崇林，朱惠京，等.東北鐵線蓮果的揮發(fā)油化學成分研究［J］.中草藥，1997，28（4）：204.

［6］ 王祥培，黃婕，靳鳳云，等.柱果鐵線蓮揮發(fā)油化學成分分析［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學，2008，36（25）：10936-10937.

［7］ 劉正信，高海翔，鄭培清，等.粉綠鐵線蓮揮發(fā)油成分分析［J］.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2001，13（5）：25-27.

［8］ 張雯，張紅梅，宋龍.粗齒鐵線蓮揮發(fā)油化學成分分析［J］.醫(yī)學信息，2011，24（3）：1211-1212.