朱鳳丹 尹秀杉

四川省南充市中心醫(yī)院檢驗科 637000

自身免疫性疾?。ˋutoimmune diseases，AID）是由機體免疫功能異常引起的，這類疾病患者體內常伴有如抑制性T細胞功能低下、體液免疫功能亢進等免疫功能的異常，同時還可出現(xiàn)最具診斷與鑒別意義的自身抗體。筆者采用間接免疫熒光法（Indirect immunofluorescence，IIF）和免疫印跡法（Immumoblot test，IBT）檢 測 與AID相 關 的 自 身 抗體——抗核抗體（Antinuclear antibodies，ANA）、抗核抗體譜（Antinuclear antibodies spectrum，ANAs），并對近期檢測的2 317例樣本的結果資料進行回顧性分析，旨在探討分析兩種方法聯(lián)合檢測在診斷AID的價值，為臨床減少漏診，提供實驗室依據。

1 對象與方法

1.1 研究對象 收集我院2013年1月－2014年6月間門診、住院、健康體檢等人群的自身免疫性疾病篩查或診斷資料2 317例，其中男845例，女1 472例，年齡0～93歲。按年齡分為0～12歲、13～18歲、19～35歲、36～55歲、≥56歲組。

1.2 IIF檢測 ANA，以Hep－2細胞和猴肝切片作為抗原基質，血清采用1∶100，1∶320，1∶1 000滴度系列，起始滴度為1∶100；檢測抗雙鏈DNA抗體（anti－double strand DNA antibody，dsDNA），以綠蠅短毛蟲天然DNA作為抗原基質，血清采用1∶10，1∶20，1∶40滴度系列，起始滴度為1∶10。商品試劑由德國歐蒙（杭州）醫(yī)學實驗診斷有限公司生產。

1.3 IBT檢測 ANAs，包括抗nRP／Sm、抗Sm、抗SSA、抗Ro52、抗SSB、抗Scl－70、抗PM－Scl、抗Jo－1、抗CNEP B、抗PCAN、抗核小體、抗組蛋白、抗核糖體P蛋白、抗AMA M2、抗dsDNA抗體共15項（德國歐蒙醫(yī)學實驗診斷股份公司）。血清標本作1∶100稀釋。全自動免疫印跡儀（奧地利Tecan公司），實驗結束后膜條用Lide 100掃描儀（日本佳能公司）掃描，EUROLineScan自動判別軟件（德國歐蒙醫(yī)學實驗診斷股份公司）自動判讀，再進行人工核對。

1.4 分組 2 317例受檢血清均同時檢測ANA和ANAs。為探討IIF和IBT對結締組織疾病的診斷效能，分為IIF組：僅用IIF檢測ANA；IBT組：僅用IBT檢測ANAs（IBT檢測ANAs，只要出現(xiàn)1條陽性反應帶，即定為陽性）；IIF＋IBT組：同時用IIF和IBT檢測ANA和ANAs。

1.5 統(tǒng)計學分析 采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行，兩組間率比較用χ2檢驗分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 2 317例受檢者中，ANA（＋）和／或ANAs（＋）共914例，其中女710例，男204例；36歲及以上年齡段，女458例，男147例。女性患自身免疫性疾病的可能性或發(fā)病率明顯高于男性，隨著年齡的增長，男性和女性患病概率均呈增長趨勢。結果見表1。

表1 不同性別、不同年齡段ANA和／或ANAs陽性例數〔n（%）〕

2.2 2 317例血清ANA和ANAs檢測結果中，ANA陽性740例（31.9%），ANAs陽性723例（31.2%），ANA和ANAs均陽性549例，ANA（＋）和ANAs（＋）符合率74.2%，ANA（－）和ANAs（－）符合率89.0%，總體符合率84.2%。結果見表2。

表2 2 317例樣本ANA和ANAs檢測結果〔n（%）〕

2.3 740例ANA陽性結果，以顆粒型為主（占56.08%），其次為均質性、胞漿顆粒型。結果見表3。

表3 740例ANA主要熒光核型

2.4 ANA（＋）／ANAs（＋）標本不同核型中各特異性抗體分析。顆粒型多為SSA，Ro52，nRP／Sm抗體，均質型多為SSA，Ro52和抗核小體抗體，胞漿顆粒型中多為SSA，Ro52和AMA－M2抗體，著絲點型多為CNEP B抗體。Ro52抗體是ANA譜中最活躍的抗體，幾乎可以見于各種核型，特異性較差。結果見表4。

表4 549例ANA（＋）／ANAs（＋）標本不同核型中各特異性抗體的檢測結果

3 討論

本文對2 317例自身免疫性疾病相關抗體檢測的結果資料進行了回顧性分析，筆者發(fā)現(xiàn)ANA和／或ANAs陽性人群中，女性占77.7%，男性占22.3%，男女比為1∶3.48，表明女性患自身免疫性疾病的可能性或發(fā)病率高于男性。由于男女性別之間的免疫環(huán)境和免疫強度存在差異，女性較男性有更強的體液和細胞免疫反應，即有更好的免疫反應能力；同時由于雌激素的作用使女性下丘腦－垂體－腎上腺軸（HPA）對應激的敏感性高于男性，HPA分泌的糖皮質激素不僅是機體應激應答必要的內分泌激素，而且還有抗炎和免疫抑制作用［1］，因此女性患自身免疫性疾病的概率明顯高于男性。從年齡段觀察，36～55歲的女性陽性率達34.2%，明顯高于其他年齡段，36歲及以上年齡段陽性率50.1%；而在男性人群，36歲及以上年齡段陽性率16.1%，相對于其他年齡段較高。由此可見，36歲以上人群，無論男女性別，自身免疫性疾病發(fā)生的可能性或發(fā)病明顯增高。

本文對2 317例受檢者血清同時檢測ANA和ANAs。按準斷效能分組判斷，IIF檢測ANA，陽性740例，占檢測總數的31.9%；IBT檢測ANAs，陽性723例，占檢測總數的31.2%，而同時檢測ANA和ANAs，陽性共914例，占檢測總數的39.4%。IIF檢測ANA可應用于大范圍的AID患者初篩并減輕患者經濟負擔及實驗室工作壓力，但僅檢測ANA或ANAs均可導致臨床患有AID或潛在AID患者的漏檢，聯(lián)合檢測則可顯著提高陽性檢出率，從而降低現(xiàn)癥及潛在AID患者的漏檢率［2］。本文結果顯示，聯(lián)合檢測ANA和ANAs，陽性檢出率明顯高于單獨ANA或ANAs檢測。筆者還對650例樣本同時用IIF和IBT檢測ds－DNA，其中IIF陽性14例（2.2%），IBT陽性24例（3.7%），兩組間比較，陽性檢出率差異有統(tǒng)計學意義（χ2＝8.9，P＜0.05）；而IIF和IBT同時陽性僅有8例，可見如果單獨用其中一種方法檢測，可能出現(xiàn)假陽性或假陰性，而兩種方法聯(lián)合起來可以最大限度的避免此類問題。

聯(lián)合ANA陽性熒光模型和ANAs出現(xiàn)的抗原多肽，是診斷和鑒別自身免疫性疾病的重要實驗室依據。ANA檢測以抗原譜完整的Hep－2細胞為基質，針對細胞靶抗原的特異抗體可產生特定的熒光模型，而后者與某些疾病有關［3～5］。本文結果顯示，740例ANA陽性樣本的熒光分型以核顆粒型最常見，占56.08%，其次是均質型，占19.32%，部分樣本還可見2種或2種以上核型，每種核型的代表性抗體各不相同，因此核型分型有助于縮小靶抗原確認的試實驗范圍；同時檢測ANAs，可發(fā)現(xiàn)在每一種ANA核型中，有一種或幾種靶抗原存在。本文中核顆粒型相對應的抗原多肽以抗SSA、抗Ro52、抗nRP／Sm出現(xiàn)的頻率最高，由此可以推論這3種靶抗原應該是核顆粒型的代表性多肽（靶）抗原，而其他核型的代表性多肽（靶）抗原也可以根據其抗原多肽出現(xiàn)的頻率進行推測。本文分析中發(fā)現(xiàn)有ANAs陽性者中出現(xiàn)核型不一致的情況，ANA陰性但出現(xiàn)ANAs特異性抗體陽性，這可能與血清中其他抗體效價較強，使不一致抗體在IIF分析中被遮蔽有關［6］；或者Hep－2細胞不是某些抗體的最佳檢測基質；如固定不當，SSA等可溶性抗原可被洗去而出現(xiàn)IIF分析的假陰性［7，8］。IBT檢測ANAs的特異性抗體，在反應膜條上平行包被多種高度純化或重組的抗原物質，一次可檢測多種與自身免疫性疾病診斷相關的特異性自身抗體。但同時抗核抗體譜免疫印跡法也存在著較高的漏檢率，其原因分析為，該譜只含有與常見自身免疫性疾病相關的抗核抗體，而不代表全部抗核抗體。此外，該免疫印跡法也存在一定的錯檢率，這可能與血清處理不當，產生非特異性吸附有關。

有學者提出ANA檢測選擇原則［9，10］，通 常首先采用以HEp－2細胞為抗原基質片的間接免疫熒光技術（IFA）進行篩查實驗，陰性結果結合臨床一般可以排除自身免疫性疾病的存在，若ANA陽性還必須進一步篩查ANAs和抗雙鏈DNA（ds－DNA），以期對疾病做出明確診斷。本文同時檢測了ANA抗體、dsDNA和ANAs，結果表明ANA檢測選擇原則是正確的，但筆者也認為，同時用IIF和IBT檢測ANA和ANAs，不僅可以減少陽性漏檢率，而且還可對臨床診斷提供更有力的實驗室證據。

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