馮文娟，劉圣鵬，徐澤平，馬杰

（黃河三角洲京博化工研究院有限公司，山東濱州256500）

高效液相色譜法測定亞油酸甲酯含量

馮文娟，劉圣鵬，徐澤平，馬杰

（黃河三角洲京博化工研究院有限公司，山東濱州256500）

建立一種高效液相色譜測定亞油酸甲酯含量的方法。采用Intertsil ODS-SP柱，紫外檢測器，檢測波長為243 nm，流動相為甲醇-水（體積比為95∶5）混合液，流速為0.8 mL/min，進樣體積為20 μL，柱溫為30℃。結(jié)果可知，亞油酸甲酯質(zhì)量濃度和峰面積的線性回歸方程是y=（2E+06）x-43 628，R2=0.999 9，線性范圍是0～4.16 g/L，平均加樣回收率為99.92%。

高效液相色譜；亞油酸甲酯；紫外檢測器

亞油酸甲酯是動植物油脂與甲醇經(jīng)酯交換反應(yīng)制得的脂肪酸甲酯中的一種產(chǎn)物，可作為一種替代化工柴油的可再生的環(huán)保能源而廣受關(guān)注[1-4]，而目前對其的檢測方法還存在著很多的問題和不足，用于檢測脂肪酸甲酯的方法大多采用氣相色譜法[5-6]，氣相色譜法雖然靈敏度高，但是對于測定相對分子質(zhì)量較大、沸點較高、不易揮發(fā)的物質(zhì)存在一定的局限性[7-10]?，F(xiàn)有的報道中一般都是采用高效液相色譜法測定脂肪酸[11]，采用高效液相色譜法測定脂肪酸甲酯的研究較少。李一哲等[12]采用高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）-蒸發(fā)光散射檢測器（evaporative light-scattering detector，ELSD）和C18色譜柱測定生物柴油中常見的脂肪酸及脂肪酸甲酯含量。劉濤等[13]利用HPLC-蒸發(fā)光檢測器及C18反相色譜柱，以乙腈和二氯甲烷的混合液為流動相，測定了混合樣中脂肪酸甘油酯的含量，沒有涉及脂肪酸甲酯的測定。本研究建立了一種HPLC-紫外檢測器（ultraviolet detector，UVD）測定亞油酸甲酯的方法，以甲醇和水的混合液為流動相，毒性較小，同時能夠彌補氣相色譜法的不足，能有效快速地對亞油酸甲酯進行定性定量分析。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

亞油酸甲酯（C19H34O2，純度≥99%）標(biāo)準(zhǔn)品：長沙晶康新材料科技有限公司；甲醇（色譜級）：天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

LC-20AT高效液相色譜：日本島津公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

準(zhǔn)確稱取0.50 g亞油酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解，配制成質(zhì)量濃度為5.00 g/L的亞油酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)液。然后用甲醇稀釋為0、0.83 g/L、1.67 g/L、2.50 g/L、3.33 g/L、4.16 g/L質(zhì)量濃度梯度的溶液，按照下述色譜條件進行液相色譜分析，以亞油酸甲酯質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計算獲得線性回歸方程。

1.3.2 色譜條件

色譜柱：Inertsil ODS-SP（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水（體積比為95∶5）混合液，二元高壓梯度洗脫；流速：0.8 mL/min；進樣體積：20 μL；柱溫：30℃；紫外檢測器：SPD-20A；檢測波長：243 nm。

1.3.3 精密度試驗

配制質(zhì)量濃度為3.33 g/L的亞油酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)液按照上述色譜條件重復(fù)測定5次。

1.3.4穩(wěn)定性試驗

質(zhì)量濃度為3.33 g/L的亞油酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)液在室溫條件下儲存1 h、2 h、3 h、4 h、5 h后按照上述色譜條件測定亞油酸甲酯的含量。

1.3.5 準(zhǔn)確性試驗

質(zhì)量濃度為3.33 g/L的亞油酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)液分別配制5次，按照上述色譜條件測定亞油酸甲酯的含量。

1.3.6 加樣回收率試驗

準(zhǔn)確稱取0.333 0 g亞油酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品于50 mL容量瓶中，以甲醇定容制得樣品溶液。以質(zhì)量濃度為3.33g/L的亞油酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)液為對照品。取0 mL、0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL的樣品溶液分別與2.0 mL、1.5 mL、1.0 mL、0.5 mL、0 mL的亞油酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)液混合均勻，243 nm處測定峰面積，計算亞油酸甲酯的質(zhì)量濃度。

2 結(jié)果與分析

2.1 亞油酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)曲線

分別以亞油酸甲酯質(zhì)量濃度（x）和峰面積（y）為橫坐標(biāo)和縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（如圖1所示），得到的回歸方程為y=（2E+06）x-43 628，R2=0.999 9。結(jié)果表明，在亞油酸甲酯質(zhì)量濃度為0～4.16 g/L范圍內(nèi)，亞油酸甲酯質(zhì)量濃度與峰面積有良好的線性關(guān)系，亞油酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)液的色譜圖見圖2。

圖1 亞油酸甲酯的標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 Standard curve of methyl linoleate

圖2 亞油酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)液的色譜圖Fig.2 Chromatogram of standard methyl linoleate

2.2 精密度試驗

對質(zhì)量濃度為3.33g/L的亞油酸甲酯溶液按色譜條件測定亞油酸甲酯的含量，由以下公式計算標(biāo)準(zhǔn)偏差（standard deviation，SD）和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation，RSD），結(jié)果見表1。

式中：Sqr代表平方根，∑代表總和，xi代表每個亞油酸甲酯峰面積值，xˉ代表x的算術(shù)平均值，n代表測定次數(shù)。

表1 精密度試驗結(jié)果Table 1 Results of precision experiment

表1結(jié)果表明，溶液重復(fù)測定5次得到的結(jié)果的RSD值為0.17%，說明了此測定方法的精密度較高。

2.3 穩(wěn)定性試驗

質(zhì)量濃度為3.33 g/L的亞油酸甲酯在室溫條件下儲存1 h、2 h、3 h、4 h、5 h后按上述色譜條件測定其含量。表2結(jié)果表明，5組樣之間的RSD值為0.23%，說明亞油酸甲酯在室溫條件下5 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

表2 穩(wěn)定性試驗結(jié)果Table 2 Results of stability experiment

2.4 準(zhǔn)確性試驗

表3 準(zhǔn)確性試驗結(jié)果Table 3 Results of repeated experiment

分別配制5組質(zhì)量濃度為3.33 g/L的亞油酸甲酯溶液，并按照上述色譜條件測定其含量。表3結(jié)果表明，5組樣品之間的RSD值＜1%，說明了此測定方法準(zhǔn)確性較高。

2.5 平均加樣回收率試驗

表4 平均加樣回收率結(jié)果Table 4 Results of average adding recovery experiment

測定不同濃度的亞油酸甲酯樣品的平均加樣回收率，測定結(jié)果見表4。5個樣品的平均加樣回收率為99.92%，RSD值為0.49%，說明了此測定方法準(zhǔn)確度高。

3 結(jié)論

建立了一種高效液相色譜測定亞油酸甲酯含量的方法，該方法能夠檢測相對分子質(zhì)量較大、沸點較高、不易揮發(fā)的物質(zhì)，不需要昂貴的質(zhì)譜儀及內(nèi)標(biāo)物，分析迅速，彌補了氣相色譜的不足[14-15]。以甲醇和水的混合液為流動相，對人體的毒性較小。通過方法學(xué)驗證結(jié)果表明，高效液相色譜法測定亞油酸甲酯含量的方法精密度和準(zhǔn)確性較高，其RSD都在1%以內(nèi)。加樣回收率良好，為99.92%，RSD為0.49%，說明了HPLC-UVD法能有效快速地對亞油酸甲酯進行定性定量分析。

[1]SHASHIKANT V G,HIFJUR R.Biodiesel production from mahua (Madhuca indica)oil having high free fatty acids[J].Biomass Bioenerg,2005,28(6):601-605.

[2]DEMIRBAS A.Biodiesel from vegetable oils via transesterification in supercritical methanol[J].Energ Conver Manage,2002,43(17):2349-2356.

[3]滕虎，牟英，楊天奎，等.生物柴油研究進展[J].生物工程學(xué)報，2010，26（7）：892-902.

[4]夏金蘭，萬民熙，王潤民，等.微藻生物柴油的現(xiàn)狀與進展[J].中國生物工程雜志，2009，29（7）：118-126.

[5]倪婉星，張曉鳴.非水相脂肪酶催化合成生物柴油[J].食品與機械，2007，23（1）：25-28.

[6]郭守軍，楊永利，黃惠萍，等.烏欖種仁油的提取工藝及脂肪酸組成[J].食品與機械，2013，29（2）：88-92.

[7]李長秀，楊海鷹，王麗琴，等.氣相色譜法在生物柴油生產(chǎn)工藝研究中的應(yīng)用[J].色譜，2006，24（5）：524-528.

[8]沈曉真，張義俊，劉鵬，等.大豆油制備生物柴油中脂肪酸甲酯含量的氣相色譜法測定[J].河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2011，45（1）：112-115.

[9]王一冰，施愛平，曹京京，等.氣相色譜法測定生物柴油產(chǎn)率[J].中國油脂，2012，37（5）：73-75.

[10]王本庭，錢俊峰，劉森，等.雙液相萃取棉籽油制備脂肪酸甲酯[J].化工學(xué)報，2007，58（10）：2636-2640.

[11]劉志成，鄭穗平.HPLC法測定谷氨酸發(fā)酵中有機酸含量的方法研究[J].中國釀造，2009，28（3）：154-156.

[12]李一哲，包桂蓉，王華.超高效液相色譜法測定生物柴油中的11種脂肪酸及脂肪酸甲酯[J].色譜，2008，26（4）：494-498.

[13]劉濤，尹春華，譚天偉.高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測器測定脂肪酸和甘油酯的含量[J].中國油脂，2005，30（9）：52-55.

[14]孫貝貝，房文紅.高效液相色譜技術(shù)在食品檢測中的應(yīng)用[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，38（35）：20454-20456.

[15]孟祥河，章銀軍，毛忠貴.甘油酯的分析方法[J].中國油脂，2004，29（1）：44-46.

Determination of methyl linoleate by HPLC

FENG Wenjuan,LIU Shengpeng,XU Zeping,MA Jie
(Chambroad Chemical Industry Research Institute Co.,Ltd.,Binzhou 256500,China)

A method for methyl linoleate determination was established by HPLC.The chromatographic condition was as follows:Inertsil ODS-SP column,ultraviolet detection wavelength 243 nm,mixed solution of methanol and water(volume ratio 95∶5)as mobile phase,flow rate 0.8 ml/min,injection volume 20 μl,column temperature 30℃.Results showed that the regression equation of methyl linoleate content wasy=（2E+06）x-43 628, R2=0.999 9.The liner range was 0-4.16 g/L and the average recovery was 99.92%.

HPLC;methyl linoleate;ultraviolet detector

O657.7

A

0254-5071（2014）11-0155-03

10.11882/j.issn.0254-5071.2014.11.036

2014-10-16

山東省科技發(fā)展計劃項目（2013YD21001）

馮文娟（1986-），女，助理工程師，碩士，研究方向為食品工程。