李瓊, 張海先, 王爽, 伍桂友, 曾銳

(西南民族大學(xué)民族醫(yī)藥研究院, 四川 成都 610041)

正交試驗(yàn)優(yōu)選糖網(wǎng)合劑的提取工藝

李瓊, 張海先, 王爽, 伍桂友, 曾銳

(西南民族大學(xué)民族醫(yī)藥研究院, 四川 成都 610041)

目的：優(yōu)選糖網(wǎng)合劑的水提工藝. 方法: 采用L9(34)正交試驗(yàn), 以桂皮醛含量和干膏率為評(píng)價(jià)指標(biāo), 以加水量、煎煮次數(shù)和煎煮時(shí)間為考察因素, 確定糖網(wǎng)合劑的最佳水提工藝.結(jié)果:最佳優(yōu)化工藝條件為加12倍水, 提取三次, 每次0.5小時(shí).結(jié)論:優(yōu)選出的提取工藝合理可行, 質(zhì)量可控.

正交試驗(yàn); 糖網(wǎng)合劑; 提取工藝; 桂皮醛

糖網(wǎng)合劑由生蒲黃、益母草、肉桂等九味藥組成, 具有溫陽(yáng)滋腎、活血利水、化瘀散結(jié)的功效. 用于增殖期糖尿病視網(wǎng)膜病變(尚未出現(xiàn)視網(wǎng)膜脫離), 糖尿病性黃斑水腫陰陽(yáng)兩虛患者. 該方原為臨床經(jīng)驗(yàn)方, 根據(jù)臨床用藥的需要, 擬制成合劑. 為控制提取工藝, 采用正交試驗(yàn), 以制劑中肉桂的桂皮醛含量和干膏率為評(píng)價(jià)指標(biāo), 確定最佳水提工藝.

1 儀器與試藥

Waters 2695型高效液相色譜儀、Waters 2996型紫外檢測(cè)器、Odyssil C18色譜柱(4.6mm ×250mm, 5μm)、3Dikma Easy Guard Ⅱ通用HPLC保護(hù)柱、ZDHW型調(diào)溫電熱套(北京中興偉業(yè)儀器有限公司)、ESJ200-4型電子天平(沈陽(yáng)龍騰電子有限公司).

桂皮醛(批號(hào): 110710-201016、供含量測(cè)定用, 純度: 98.6%), 購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所、肉桂等藥材均購(gòu)于四川新荷花中藥飲片股份有限公司、色譜乙腈(瑞典歐森巴克環(huán)境化學(xué)公司)、樂(lè)百氏純凈水(樂(lè)百氏(鄭州)食品飲料有限公司)、其余所用試劑均為分析純.

2 方法與結(jié)果

2.1 水提正交設(shè)計(jì)

加水量、煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)是影響煎煮效果的主要因素. 采用L9(34)正交試驗(yàn), 根據(jù)預(yù)試, 確定因素水平,如表1

表1 因素水平表

2.2 評(píng)價(jià)指標(biāo)的選擇

蒲黃為方中君藥, 因其有效成分的溶解性, 適于單獨(dú)醇提. 而肉桂具有補(bǔ)火助陽(yáng)、溫經(jīng)通脈的功效[1], 其中

的桂皮醛具有解熱鎮(zhèn)痛抗炎[2]、對(duì)實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠創(chuàng)面成纖維細(xì)胞具有增殖作用[3], 故以桂皮醛含量及其干膏率為評(píng)價(jià)指標(biāo).

2.3 樣品溶液的準(zhǔn)備

按處方比例稱(chēng)取干益母草、肉桂等藥材, 共60g, 加鱉甲藥渣及其煎液, 共9份. 根據(jù)L9(34)正交試驗(yàn)因素水平表回流提取, 濾液合并, 且定容至一定體積.

2.4 干膏率測(cè)定

精密吸取各正交樣品溶液10ml, 分別置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿, 樣品溶液水浴蒸干, 于105℃干燥3小時(shí),置干燥器中冷卻30min, 精密稱(chēng)定, 計(jì)算干膏率.

2.5 桂皮醛含量測(cè)定

2.5.1 色譜條件

Odyssil C18色譜柱( 4.6mm ×250mm , 5μm); 以乙腈-水(40:60)為流動(dòng)相[4-5]; 柱溫為30℃; 檢測(cè)波長(zhǎng)為290nm; 進(jìn)樣量為20μl.

2.5.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)取桂皮醛對(duì)照品適量, 加甲醇制成濃度為19.47μg/ml的桂皮醛對(duì)照品溶液.

2.5.3 供試品溶液的制備

取正交試驗(yàn)各樣品溶液1ml, 用甲醇定容至10ml, 濾過(guò), 取續(xù)濾液作為供試品溶液.

2.5.4 測(cè)定法

精密吸取上述對(duì)照品和供試品溶液各20μl, 注入色譜儀, 記錄峰面積, 計(jì)算桂皮醛含量.

2.6 結(jié)果與分析

試驗(yàn)結(jié)果采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行處理, 結(jié)果見(jiàn)表2、表3.

表2 正交試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果

表3 方差分析表

結(jié)果分析: 直觀分析表明, 煎煮次數(shù)>加水量>煎煮時(shí)間, 經(jīng)方差分析, 煎煮次數(shù)和加水量對(duì)提取有顯著影

響, 煎煮時(shí)間對(duì)提取無(wú)顯著影響, 故確定提取工藝為A3B3C1, 確定最佳優(yōu)化工藝條件為加12倍水, 提取三次,每次0.5小時(shí). 根據(jù)此條件, 驗(yàn)證3批.

2.7 驗(yàn)證試驗(yàn)

按處方比例稱(chēng)取藥材, 總共3份, 按篩選出的工藝進(jìn)行試驗(yàn). 測(cè)定桂皮醛含量、干膏收率. 結(jié)果見(jiàn)表4

表4 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果: 桂皮醛含量的平均值為18.9995mg/g, RSD為0.70%, 表明3次驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定, 該工藝穩(wěn)定可行.故確定益母草、肉桂等優(yōu)選的水提工藝為: 加水煎煮三次, 每次加12倍量水, 每次提取0.5小時(shí).

3 討論

(1) 本制劑制備過(guò)程中涉及肉桂、當(dāng)歸等芳香水的收集, 正交前的單因素考察中, 對(duì)肉桂煎液及芳香水中桂皮醛含量進(jìn)行測(cè)定, 結(jié)果肉桂藥材中, 桂皮醛在芳香水中的轉(zhuǎn)移率為19.93%, 在芳香水煎液中的轉(zhuǎn)移率為8.21%, 說(shuō)明桂皮醛大部分存在于揮發(fā)油中. 故正交時(shí)考慮結(jié)果的可靠性, 將肉桂及其水提部分藥材直接回流提取, 考察桂皮醛含量.

(2) 在進(jìn)行供試品溶液制備時(shí), 曾試過(guò)離心、濃縮、甲醇直接稀釋三種方法, 結(jié)果甲醇直接稀釋效果最好, 離心和濃縮均不同程度的降低桂皮醛含量, 故選擇甲醇直接稀釋提取液.

(3) 根據(jù)優(yōu)選出的最佳工藝, 進(jìn)行了三批中試放大生產(chǎn), 結(jié)果穩(wěn)定可行, 適宜于工業(yè)化生產(chǎn).

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)藥典一部[S]. 北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社, 2010.

[2] 馬悅穎, 李滄海, 李蘭芳, 等. 桂皮醛解熱鎮(zhèn)痛抗炎作用的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué), 2006, 11(12): 1336-1339.

[3] 李光善, 李萍, 盛巡, 等. 黃芪多糖、桂皮醛、川芎嗪對(duì)實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠創(chuàng)面成纖維細(xì)胞增殖作用的影響[J]. 中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志, 2004, 04: 20-22.

[4] 王 莉, 郭東, 聶慧生. 正交試驗(yàn)法優(yōu)選愈骨佳膠囊的提取工藝[J]. 陜西中醫(yī), 2012, 33(7): 894-896.

[5] 林德暉, 林綠萍, 程 怡, 等. 戒癮解毒膠囊的薄層鑒別及桂皮醛的含量測(cè)定[J]. 北方藥學(xué), 2012, 9(3): 3-4.

Study on the optimization extraction process from Tangwang Mixture by orthogonal experimental design

LI Qiong1, ZHANG Hai-xian2, ZENG Rui3
(Ethnic Pharmaceutical Institute of Southwest University, Chengdu 610041, P.R.C.)

Objective:To optimize extraction technology from Tangwang Mixture.Methods:The optimal water extraction process is selected with the orthogonal table L9(34). The contents and yield of cinnamaldehyde are used as the factor level, and the water volume, extraction time and times, as the examine factors.Results:The optimal process conditions are as follows: with 12 times the amount of water, extracted with water for 3 times, and extraction time 0.5h each time.Conclusion:The optimized preparation process is reasonable and feasible, and the quality is controllable.

orthogonal experiment; Tangwang Mixture; extraction process; cinnamaldehyde

R28

A

1003-4271(2014)01-0063-03

10.3969/j.issn.1003-4271.2014.01.13

2013-05-16

曾銳(1976-), 男, 四川德陽(yáng)人, 副教授, 研究方向: 藥物制劑、藥物分析及民族藥學(xué)工作; E-mail:Mackzeng@gmail.com.

課題得到“十二五”科技部支撐計(jì)劃(項(xiàng)目編號(hào): 2012BAI27B07)的資助.