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        開啟顯微成像的“納米時代”

        2014-02-20 10:21:04孫育杰
        大眾科學(xué) 2014年11期
        關(guān)鍵詞:諾貝爾化學(xué)獎微觀世界高分辨率

        文- 孫育杰

        今年諾貝爾化學(xué)獎三位獲獎人,打破了光學(xué)成像中長期存在的衍射極限,將熒光顯微成像的分辨率帶入“納米時代”,為生命科學(xué)研究帶來巨大變化

        10月8日,2014 年諾貝爾化學(xué)獎授予了美國科學(xué)家埃里克·白茲格(Eric Betzig)、威廉姆·莫納(William Moerner)和德國科學(xué)家施泰方·海爾(Stefan Hell),以表彰他們在超高分辨率熒光顯微技術(shù)領(lǐng)域的貢獻(xiàn)。正如官方頒獎文中描述,這類技術(shù)從方法實現(xiàn)到在科學(xué)研究中大展身手雖然不過十幾年時間,但已對多個領(lǐng)域產(chǎn)生顯著推動,并且可以預(yù)言在未來將給生命科學(xué)研究帶來巨大的變化。

        諾貝爾化學(xué)獎評選委員會在當(dāng)天的聲明中說,長期以來,光學(xué)顯微鏡的分辨率被認(rèn)為不會超過光波波長的一半,這被稱為“阿貝分辨率”。借助熒光分子的幫助,今年獲獎?wù)邆兊难芯砍晒擅畹乩@過了經(jīng)典光學(xué)的這一“束縛”,他們開創(chuàng)性的成就使光學(xué)顯微鏡能夠窺探納米世界。如今,納米級分辨率的顯微鏡在世界范圍內(nèi)廣泛運用,人類每天都能從其帶來的新知識中獲益。

        諾貝爾化學(xué)獎評選委員會還指出,得獎?wù)叩难芯吭试S人類觀察病毒以至細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì),對了解有關(guān)物質(zhì)的功能作出重大貢獻(xiàn),例如可用于觀察帕金森癥、腦退化癥和亨廷頓病患者體內(nèi)的蛋白變化等。

        埃里克·貝齊格

        斯特凡·黑爾

        威廉·莫納

        打破衍射極限

        我們?nèi)搜垡话阕钚∧芸匆姶蠹s0.1毫米的東西,而生物的基本單元——細(xì)胞的直徑平均約為20微米或0.02毫米,所以對生物微觀世界的觀察需要使用光學(xué)顯微鏡。光學(xué)顯微技術(shù)有很多優(yōu)點,不但能放大微觀世界,同時還對樣品沒有損害,并且可以特異地觀察目標(biāo)對象。這種特異性一般是通過熒光顯微技術(shù)實現(xiàn)的。熒光是物質(zhì)吸收光照后發(fā)出的光,一般發(fā)射光波長比吸收光波長更長,因此可以單獨檢測熒光,對目標(biāo)實現(xiàn)高靈敏度的檢測。

        然而,光學(xué)顯微鏡的分辨率是有限的。由于光的衍射,即使一個無限小的光點在通過透鏡成像時也會形成一個彌散圖案,俗稱“艾里斑”。這樣即便兩個物點相距較遠(yuǎn),其彌散斑卻可能很近,以致無法區(qū)分。

        基于此原理,早在1873年,德國科學(xué)家恩斯特阿貝(ErnstAbbe)提出阿貝光學(xué)衍射極限,并作為重要成就刻于其墓碑上。根據(jù)這一極限,光學(xué)顯微鏡的分辨率約為檢測光波長的一半,300納米左右(可見光的波長為400~700納米),或是我們頭發(fā)直徑的1/300。超高分辨率熒光顯微技術(shù)通過一系列物理原理和化學(xué)機(jī)制“打破”了這一衍射極限,把光學(xué)顯微鏡的分辨率提高了幾十倍,使我們以前所未有的視角觀察生物微觀世界。

        探測微觀世界

        發(fā)展超高分辨率熒光顯微技術(shù),對生物學(xué)研究意義非常重大。

        目前的超高分辨率熒光顯微技術(shù)大體分為三類:受激發(fā)射損耗、結(jié)構(gòu)光照明技術(shù)和單分子技術(shù)。其歷史可以追溯到上個世紀(jì)80年代。這次獲得諾貝爾化學(xué)獎的三位科學(xué)家是這個方向的先驅(qū)人物。

        1994年,此次獲獎的德國科學(xué)家施泰方·海爾當(dāng)時還是博士后,他最先提出用受激發(fā)射損耗的方法(簡稱STED)打破光學(xué)衍射極限,并最終在2000年的實驗中得以實現(xiàn)。

        STED方法利用了類似于產(chǎn)生激光的受激輻射原理,將一束形似于面包圈的激光光斑套在用于激發(fā)熒光的激光光斑外,這個面包圈激光可以抑制其區(qū)域內(nèi)熒光分子發(fā)出熒光,這樣通過不斷縮小面包圈的孔徑就可以獲得一個小于衍射極限的熒光發(fā)光點,并通過掃描實現(xiàn)超高分辨率的圖像,將光學(xué)顯微鏡分辨率提高了近10倍。

        施泰方·海爾現(xiàn)為德國哥根廷大學(xué)教授和德國馬克斯·普朗克生物物理化學(xué)研究所所長。從2000年開始,他不斷改進(jìn)STED技術(shù),使其更加適用于生物研究。另外,他還通過相似原理發(fā)明了一系列的超高分辨率技術(shù),統(tǒng)稱為可逆飽和熒光躍遷(RESOLFT),為超分辨率熒光顯微成像技術(shù)的發(fā)展做出了巨大貢獻(xiàn)。

        基于結(jié)構(gòu)照明原理的超高分辨率技術(shù)是美國科學(xué)家麥茨·古塔弗森(MatsGustafsson)在2000年發(fā)明的,非常適于細(xì)胞研究,可惜分辨率只提高了一倍。這個技術(shù)基于兩個高空間頻率的圖案重疊可以形成低頻率莫爾條紋的原理,通過解析莫爾條紋實現(xiàn)超高分辨率成像??上Ч潘ド?011年51歲時因癌癥去世,英年早逝,無緣分享這次的諾貝爾獎。

        超分辨熒光顯微鏡技術(shù)真正成熟并得以在生物研究中廣泛應(yīng)用,是2006年同時出現(xiàn)的兩種基于隨機(jī)重構(gòu)原理的超高分辨率光學(xué)成像技術(shù)。當(dāng)時是由哈佛大學(xué)莊小威教授(隨機(jī)光學(xué)重構(gòu)顯微術(shù)STORM技術(shù))、埃里克·貝齊格(光活化定位顯微術(shù)PALM技術(shù))及薩繆爾·海斯(SamuelHess,熒光活化定位顯微術(shù)fPALM技術(shù))三個研究組分別同時獨立發(fā)明的。它們的原理非常像,都是基于熒光分子的光轉(zhuǎn)化能力和單分子定位,通過用光控制每次僅有少量隨機(jī)離散的單個熒光分子發(fā)光,并準(zhǔn)確定位單個熒光分子艾里光斑的中心,把多張圖片疊加形成一幅超高分辨率圖像。

        STED顯微技術(shù)的原理

        這種“以時間換空間”的思路非常巧妙,把熒光成像的分辨率一下子提高了20倍左右。

        這次獲獎的威廉·莫納現(xiàn)為美國斯坦福大學(xué)講座教授,是單分子熒光技術(shù)的先驅(qū)人物。1989年,他任職于美國IBM研究中心時在世界上首次實現(xiàn)了單個分子的光吸收的測量。1997年,他與因為綠色熒光蛋白獲得2008年諾貝爾化學(xué)獎的錢永健合作發(fā)現(xiàn)了綠色熒光蛋白的光轉(zhuǎn)化效應(yīng)。

        而埃里克·白茲格是美國霍華德·休斯醫(yī)學(xué)研究所的教授,是熒光顯微技術(shù)領(lǐng)域的領(lǐng)軍人物。他最早在1992年就實現(xiàn)了近場超高分辨率熒光成像,其后在1994年提出了基于單分子信號實現(xiàn)超高分辨率成像的思想,并于2006年在實驗中得以實現(xiàn)。

        值得指出的是莊小威教授作為STORM超分辨技術(shù)的發(fā)明人,其研究團(tuán)隊一直領(lǐng)導(dǎo)并推進(jìn)著超高分辨率顯微技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用,是近8年來這個領(lǐng)域最活躍的研究團(tuán)隊。

        超高分辨率成像作為一類很新的技術(shù),突破了光學(xué)成像中的衍射極限,把傳統(tǒng)成像分辨率提高了10~20倍,好比一個近視眼的人突然戴上了合適的眼鏡,這一技術(shù)因此成為研究細(xì)胞結(jié)構(gòu)的利器。

        過去七八年間,超高分辨率成像技術(shù)不斷推進(jìn),先后實現(xiàn)了多色、三維和活細(xì)胞高速成像。其生物應(yīng)用也很廣泛,包括細(xì)胞膜蛋白分布、細(xì)胞骨架、線粒體、染色質(zhì)和神經(jīng)元突觸等。超高分辨率技術(shù)一經(jīng)出現(xiàn)就引起廣泛關(guān)注,先是在2006年被世界著名《科學(xué)》期刊評為年度十大技術(shù)突破,接著被生物醫(yī)學(xué)方法學(xué)最好的期刊《自然-方法》評為2008年度方法。在近期《自然-方法》十周年特刊評出的10年10大技術(shù)中,超高分辨率成像和單分子技術(shù)也都位列榜中。

        跨界諾貝爾獎

        就像利用哈勃天文望遠(yuǎn)鏡認(rèn)識宇宙,人類對微觀世界的了解極大地依賴于光學(xué)顯微技術(shù)。今年諾貝爾化學(xué)獎三位獲獎人打破了光學(xué)成像中長期存在的衍射極限,將熒光顯微成像的分辨率帶入到“納米時代”,讓我們能更精確地窺探微觀世界,這將為疾病研究和藥物研發(fā)帶來革命性的變化,也將為世界上方興未艾的腦計劃提供關(guān)鍵支持。

        有趣的是,這次的三位諾貝爾化學(xué)獎得主都是物理學(xué)博士,而這次獲獎的成果也是典型的跨界研究,結(jié)合物理思想、光學(xué)技術(shù)和化學(xué)探針,為生物學(xué)研究提供了前所未有的強大工具,是一個典型的技術(shù)諾貝爾獎。

        事實上,生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域大量的懸疑正持續(xù)吸引具有不同背景的專業(yè)人才加入到研究隊伍中來,這種交叉融合的方式將會大大促進(jìn)生物醫(yī)學(xué)研究的進(jìn)步。毋庸置疑,未來我們還將看到更多像這樣的跨界諾貝爾獎!

        常規(guī)的共聚焦顯微鏡(左)與STED顯微鏡(右)效果對比圖

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