郝永正 李廣香 山西省太谷縣畜牧獸醫(yī)中心 030800

雞大腸桿菌病是由大腸埃希氏桿菌引起的一類疾病的總稱。該病的感染途徑主要是消化道和呼吸道，也可通過(guò)種蛋垂直傳播，可原發(fā)、繼發(fā)或并發(fā)，不同年齡的雞都能感染。該病一年四季均有發(fā)生，但以冬季和春季多發(fā)，癥狀一般呈典型經(jīng)過(guò)：雞只精神萎頓、羽毛蓬亂、呼吸困難、食欲廢絕，黃、白、綠稀便交替出現(xiàn)。急性型常于發(fā)病一周內(nèi)死亡，亞急性或慢性型多發(fā)生于成年蛋雞，患病的雞精神不振、食欲減少、飲水量增加，逐漸消瘦和下痢，但死亡率不高。

該病的防治主要使用抗菌藥和抗生素，藥物的大量和頻繁使用造成大腸桿菌耐藥菌株不斷產(chǎn)生，致使治療效果下降，給養(yǎng)雞業(yè)造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失；同時(shí)，抗菌藥物在畜禽體內(nèi)的殘留給養(yǎng)禽業(yè)的持續(xù)發(fā)展和人類的身體健康帶來(lái)潛在危害。本試驗(yàn)，分離鑒定和了解雞大腸桿菌血清型及耐藥性現(xiàn)狀，以期為臨床防治該病提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

（1）病料來(lái)源。樣品來(lái)自太谷縣周邊幾個(gè)雞養(yǎng)殖場(chǎng)，共采樣25 份，經(jīng)臨床診斷為雞大腸桿菌病。

（2）培養(yǎng)基。營(yíng)養(yǎng)瓊脂、麥康凱瓊脂、普通肉湯、伊紅美藍(lán)瓊脂和細(xì)菌微量生化反應(yīng)管均購(gòu)于杭州天和微生物試劑公司；M.R.試劑、V-P 試劑、靛基質(zhì)試驗(yàn)用培養(yǎng)基等均按照常規(guī)方法配制。細(xì)菌生化微量鑒定管由杭州天和微生物試劑有限公司生產(chǎn)。

（3）大腸桿菌O 抗原定型血清診斷液購(gòu)于中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為體重20～25g 小白鼠20 只，購(gòu)自山西醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。

（4）藥敏試驗(yàn)。選擇硫酸阿米卡星、鹽酸左旋氧氟沙星、氟苯尼考、新霉素、卡那霉素、頭孢噻呋鈉、慶大霉素、氨芐西林、阿莫西林、恩諾沙星、環(huán)丙沙星、鏈霉素和先鋒Ⅴ號(hào)等藥物進(jìn)行。

1.2 試驗(yàn)方法

（1）細(xì)菌分離培養(yǎng)。將采集病料樣品接種于普通培養(yǎng)基上，37℃恒溫培養(yǎng)18h，觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況和菌落特征。挑取單個(gè)菌落接種于麥康凱瓊脂平板，37℃恒溫培養(yǎng)24h 后挑取可疑、紅色、中等大小和光滑的菌落進(jìn)行革蘭染色、鏡檢。將革蘭染色情況、形態(tài)和大小等均符合大腸桿菌特征的菌株初步確定為大腸桿菌，對(duì)疑似大腸桿菌進(jìn)行菌種保存。

（2）生化試驗(yàn)。將分離純化的細(xì)菌在無(wú)菌條件下進(jìn)行糖發(fā)酵試驗(yàn)、甲基紅試驗(yàn)、V-P 試驗(yàn)、吲哚試驗(yàn)、硫化氫試驗(yàn)、尿素酶試驗(yàn)和枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)檢測(cè)。

（3）致病性試驗(yàn)。將20 只小白鼠分成2 組，每組10 只。Ⅰ組為試驗(yàn)組，用雞大腸桿菌肉湯培養(yǎng)物接種，腹腔注射0.3mL/只；Ⅱ組為對(duì)照組，腹腔注射滅菌生理鹽水0.3mL/只。注射后每天觀察2 次，連續(xù)觀察7d。剖檢病死鼠，取死鼠的肝臟涂片染色鏡檢，再將其接種于麥康凱瓊脂，挑取可疑菌落分離培養(yǎng)，進(jìn)行觀察。

（4）血清型鑒定。按大腸桿菌O 抗原定型血清診斷液使用說(shuō)明書操作。首先將分離的細(xì)菌進(jìn)行玻板凝集反應(yīng)，初步篩選疑似O 血清型菌株，然后通過(guò)試管凝集反應(yīng)進(jìn)一步確定其血清型。

（5）耐藥性實(shí)驗(yàn)。采用紙片法，測(cè)量抑菌圈直徑。抑菌圈直徑大于20mm 為高度敏感、10～20mm為中度敏感、小于10mm 為耐藥。

2 結(jié)果與分析

2.1 細(xì)菌的分離培養(yǎng)

從25 份病料中分離出大腸桿菌11 株，分離率為44%。分離菌在營(yíng)養(yǎng)瓊脂上生長(zhǎng)24h 后，形成圓形、邊緣整齊、隆起、光滑、濕潤(rùn)和灰白色的菌落，直徑為2～3mm；在麥康凱瓊脂上形成紅色、圓形隆起、光滑濕潤(rùn)和邊緣整齊的小菌落；在伊紅美藍(lán)瓊脂上形成紫黑色、具有金屬光澤的小菌落；在普通肉湯中呈均勻渾濁，管底有灰白色沉淀，振蕩呈云霧狀散開。革蘭染色鏡檢可見革蘭陰性、無(wú)芽孢、短小和兩端鈍圓的短桿菌。

2.2 生化試驗(yàn)

11 株分離菌對(duì)葡萄糖、麥芽糖、乳糖和甘露醇產(chǎn)酸產(chǎn)氣，M.R 和吲哚實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性，枸櫞酸鹽、明膠和V-P 反應(yīng)呈陰性，符合大腸桿菌的生化特性。

2.3 致病性試驗(yàn)

Ⅰ組2只小鼠5h 內(nèi)死亡，5只24h內(nèi)死亡，3只36h 內(nèi)死亡。病理剖檢可見肝臟腫大，有壞死灶及出血點(diǎn)；腸嚴(yán)重臌氣，心包淤血，肺出血，脾臟淤血。采取死亡小鼠的肝和脾接種于麥康凱瓊脂平板及普通肉湯，37℃培養(yǎng)24h，有細(xì)菌生長(zhǎng)。革蘭氏染色及生化鑒定表明，此菌與接種細(xì)菌為同種細(xì)菌。說(shuō)明該菌對(duì)小鼠具有較強(qiáng)的致病力。Ⅱ組飼養(yǎng)7d后全部存活，剖檢未見明顯病變。

2.4 血清型鑒定

11 株大腸桿菌主要血清型是O157。

2.5 藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表1 大腸桿菌分離株藥敏試驗(yàn)結(jié)果

18 株大腸桿菌對(duì)14 種抗生素有不同程度的耐藥。具體結(jié)果見表1。

3 結(jié)論與討論

3.1 分離株鑒定及發(fā)生感染的原因

經(jīng)過(guò)細(xì)菌分離培養(yǎng)和生物學(xué)特性鑒定，得知引發(fā)該地區(qū)肉雞發(fā)病死亡的致病菌為致病性大腸桿菌，血清型為O157。大腸桿菌為條件致病菌，而現(xiàn)代規(guī)?；曫B(yǎng)場(chǎng)的肉雞飼養(yǎng)主要采用網(wǎng)上平養(yǎng)方式，飼養(yǎng)密度大、雞舍空氣污濁、通風(fēng)不良、光照不足、肉雞生長(zhǎng)速度快、耗氧量大以及環(huán)境衛(wèi)生和飼養(yǎng)管理不善等因素導(dǎo)致機(jī)體抵抗力下降，腸道正常菌群的微生態(tài)平衡被破壞，細(xì)菌大量繁殖而發(fā)病。因此，平時(shí)應(yīng)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，搞好雞舍及周圍環(huán)境衛(wèi)生，發(fā)病時(shí)及時(shí)采取隔離措施，并對(duì)雞舍及污染場(chǎng)地清理消毒。

3.2 耐藥菌株產(chǎn)生的原因

從藥敏試驗(yàn)結(jié)果看，該地區(qū)的大腸桿菌對(duì)氨芐西林、阿莫西林、恩諾沙星、環(huán)丙沙星、磷霉素和先鋒Ⅴ號(hào)有耐藥性，對(duì)鹽酸左旋氧氟沙星、頭孢曲松鈉、頭孢噻呋鈉、卡那霉素和慶大霉素中度敏感，對(duì)氟苯尼考、新霉素和硫酸阿米卡星高度敏感。臨床上長(zhǎng)期、大量和不規(guī)范地使用抗菌藥物，致使大腸桿菌耐藥菌株不斷產(chǎn)生，耐藥譜也越來(lái)越廣泛。很多養(yǎng)殖戶為了達(dá)到治療效果，盲目加大用藥劑量，不僅破壞了雞腸道的正常菌群，而且間接地影響了人體健康，最后導(dǎo)致藥物殘留。因此，最好采取聯(lián)合用藥、交叉用藥和輪換用藥的方式，一方面充分發(fā)揮抗菌藥物之間的協(xié)同作用、增加療效，另一方面避免因細(xì)菌長(zhǎng)期與某一種藥物接觸而增強(qiáng)耐藥性。大腸桿菌耐藥性的出現(xiàn)可能與菌株長(zhǎng)期處于多種抗生素選擇的環(huán)境中，其耐藥基因通過(guò)染色體或耐藥質(zhì)粒在菌群間廣泛傳播或擴(kuò)散有關(guān)。選擇有效的抗生素，才是控制大腸桿菌最經(jīng)濟(jì)有效的方法。

雞大腸桿菌病的流行病學(xué)具有極其復(fù)雜的特征，這也是雞大腸桿菌病難以根除的關(guān)鍵所在。只有定期對(duì)本地區(qū)雞場(chǎng)的大腸桿菌進(jìn)行分離鑒定，配以藥敏試驗(yàn)用藥、加強(qiáng)管理等綜合措施，才能收到良好的防控效果。