洪偉彬，黃炳熾，徐振娜，黃育浩，袁鏡樂(lè)，潘 杰

（東莞市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，廣東東莞 523086）

廣東東莞市屠宰場(chǎng)及豬體內(nèi)沙門氏菌的分離與鑒定

洪偉彬，黃炳熾，徐振娜，黃育浩，袁鏡樂(lè)，潘 杰

（東莞市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，廣東東莞 523086）

[目的]為了解東莞市屠宰場(chǎng)場(chǎng)地及屠宰豬的沙門氏菌污染情況。[方法]東莞市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心從東莞市各鎮(zhèn)街屠宰場(chǎng)采集豬肝樣品320份，污水水樣96份，環(huán)境空氣樣品160份，屠宰用具、工作臺(tái)、地板等涂抹拭子共96份，進(jìn)行沙門氏菌的分離與鑒定。[結(jié)果]共分離出沙門氏菌111株，檢出率為16.5%。其中從豬肝樣品中檢出沙門氏菌64株（20%）、空氣樣品中檢出15株（9%）、污水樣品中檢出22株（10.4%）、器具中檢出10株（16.5%）。其中鼠傷寒沙門氏菌31株、腸炎沙門氏菌15株、甲型副傷寒17株。[結(jié)論]東莞市屠宰豬沙門氏菌污染情況比較普遍，應(yīng)當(dāng)引起監(jiān)管部門的重視。

污水；環(huán)境；屠宰豬；分離鑒定

沙門氏菌（Salmonella）是公認(rèn)的人類食源性疾病最常見(jiàn)的細(xì)菌病原菌之一。絕大多數(shù)沙門氏菌對(duì)人和動(dòng)物具有致病性，能引起人和動(dòng)物多種不同的沙門氏菌病。人沙門氏菌食物中毒，表現(xiàn)發(fā)熱、頭痛、全身酸痛和胃腸炎，個(gè)別病人會(huì)死亡。據(jù)報(bào)道，日本、美國(guó)等發(fā)達(dá)國(guó)家食物中毒事件中，40%～80%是由沙門氏菌引起。1953年，瑞典曾發(fā)生世界上最大的一起沙門氏菌引發(fā)的食物中毒事件，是由于食用豬肉而引起的鼠傷寒沙門氏菌中毒，導(dǎo)致7717人中毒，90人死亡。美國(guó)每年有1000多人死于沙門氏菌中毒，我國(guó)每年也有數(shù)百人死于急性沙門氏菌感染。隨著中國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的迅速發(fā)展和飼養(yǎng)的高度集約化，沙門氏菌已成為危害養(yǎng)豬業(yè)的重要細(xì)菌性疾病，對(duì)其進(jìn)行防治具有十分重要的意義。

東莞市每天有1萬(wàn)多頭生豬經(jīng)屠宰場(chǎng)屠宰后進(jìn)入市場(chǎng)，肉品質(zhì)量安全是關(guān)乎人民群眾健康的事。生豬待宰和屠宰的過(guò)程是沙門氏菌污染的一個(gè)重要來(lái)源，因此有必要對(duì)屠宰場(chǎng)地及屠宰豬的沙門氏菌進(jìn)行監(jiān)測(cè)。針對(duì)東莞市32個(gè)鎮(zhèn)街生豬屠宰場(chǎng)的環(huán)境、污水和屠宰豬沙門氏菌的污染狀況的調(diào)查，是為東莞市沙門氏菌的預(yù)警預(yù)報(bào)提供科學(xué)的數(shù)據(jù)支持，從而為監(jiān)管部門制定防控措施提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

沙門氏菌顯色培養(yǎng)基、緩沖蛋白胨水、營(yíng)養(yǎng)瓊脂、亞硒酸鹽胱氨酸培養(yǎng)基（SC）、四硫磺酸鈉煌綠培養(yǎng)基（TTB）、革蘭氏染色液、沙門氏菌生化鑒定管、血平板等均購(gòu)自廣州環(huán)凱微生物科技有限公司，培養(yǎng)皿，超凈工作臺(tái)，生物安全柜，離心機(jī)，顯微鏡。

1.2 樣品

每個(gè)屠宰場(chǎng)豬肝樣品10份（共320份）；污水水樣3份（共96份）；環(huán)境空氣5份（共160份）；屠宰用具、工作臺(tái)、地板等涂抹拭子3份（共96份）。

1.3 方法

1.3.1 采樣

1.3.1.1 豬肝。無(wú)菌采集豬肝樣品100g，冷藏運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室待檢。

1.3.1.2 空氣樣品。根據(jù)現(xiàn)場(chǎng)的大小，選擇有代表性的位置作為環(huán)境空氣細(xì)菌檢測(cè)的采樣點(diǎn)。室內(nèi)面積不超過(guò)30m2，在對(duì)角線上設(shè)內(nèi)、中、外三點(diǎn)；室內(nèi)面積超過(guò)30m2，設(shè)置5個(gè)采樣點(diǎn)，即室內(nèi)墻角對(duì)角線交點(diǎn)為1個(gè)采樣點(diǎn)，該交點(diǎn)與四墻角連線的中點(diǎn)為另外4個(gè)采樣點(diǎn)。

將已制備好的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)器皿置采樣點(diǎn)，放置時(shí)需離地0.8-1.5m，遠(yuǎn)離墻壁1m以上，并避開(kāi)空調(diào)、門窗等空氣流通處。打開(kāi)培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露30min，再將培養(yǎng)皿蓋蓋上后倒置。

1.3.1.3 污水樣品。以滅菌后的10mL EP管在每個(gè)屠宰場(chǎng)分3個(gè)點(diǎn)采污水，每個(gè)點(diǎn) 10mL左右。

1.3.1.4 場(chǎng)地及器具。以高壓滅菌后的棉拭子反復(fù)在屠宰器具、工作臺(tái)、地板等表面擦拭，然后將帶菌棉簽放入裝有10mL生理鹽水的EP管中，充分振蕩后冷藏備用。

1.3.2 細(xì)菌分離

1.3.2.1 肝臟樣品。無(wú)菌取25g肝臟樣品放入盛有225mL緩沖蛋白胨水的無(wú)菌玻璃瓶瓶中，37℃培養(yǎng)18～24h。取1mL培養(yǎng)物，接種于10mL TTB培養(yǎng)基內(nèi)，于42℃培養(yǎng)18～24h。同時(shí)，另取1mL，轉(zhuǎn)種于10mL SC培養(yǎng)基內(nèi)，于37℃培養(yǎng)18～24h。用接種環(huán)取增菌液1環(huán)，劃線接種于沙門氏菌顯色培養(yǎng)基平板。37℃培養(yǎng)18～24h，觀察平板上生長(zhǎng)的菌落。

1.3.2.2 空氣樣品。在普通瓊脂平皿中選取圓形、邊緣整齊、表面光滑、半透明、隆起菌落劃線接種于沙門氏菌顯色培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)18～24 h。觀察平板上生長(zhǎng)的菌落。

1.3.2.3 水樣及器具拭子。取水樣及拭子樣品1mL加入裝有9mL增菌液的試管內(nèi)，37℃培養(yǎng)18～24h。取1mL培養(yǎng)物，接種于10mL TTB培養(yǎng)基內(nèi)，于42℃培養(yǎng)18～24h。同時(shí)，另取1mL轉(zhuǎn)種于10mL SC培養(yǎng)基內(nèi)，于37℃培養(yǎng)18～24h。用接種環(huán)取增菌液1環(huán)，劃線接種于沙門氏菌顯色培養(yǎng)基平板。37℃培養(yǎng)18～24h，觀察平板上生長(zhǎng)的菌落。

1.3.3 細(xì)菌鑒定

挑取平板上的可疑菌落進(jìn)行革蘭氏染色、鏡檢，并進(jìn)行生化鑒定。

2 鑒定結(jié)果

2.1 菌落形態(tài)及鏡檢特征

沙門氏菌在顯色平板上呈品紅色，扁平透明，邊緣光滑，直徑約2mm。經(jīng)革蘭氏染色，鏡檢可見(jiàn)兩端鈍圓、無(wú)芽孢的革蘭氏陰性短桿菌，進(jìn)行生化鑒定。

2.2 生化鑒定

根據(jù)接種硫化氫、靛基質(zhì)、pH7.2尿素、氰化鉀、賴氨酸脫羧酶、甘露醇、山梨醇、ONPG確定的沙門氏菌有111株（表1），陽(yáng)性率16.5%。同時(shí)將這株沙門氏菌再接種葡萄糖、麥芽糖、甘露糖、MR、乳糖、蔗糖、尿素、VP、H2S、枸櫞酸鹽、衛(wèi)茅醇、鼠李糖、木糖、阿拉伯糖、賴氨酸脫羧酶、鳥(niǎo)氨酸脫羧酶做進(jìn)一步生化鑒定（表2），分離出鼠傷寒沙門氏菌31株，腸炎沙門氏菌15株，甲型副傷寒17株，其他未定型的48株（表3）。

3 討論

沙門氏菌所造成的食品污染作為目前國(guó)際上極為關(guān)注的食品安全問(wèn)題，被列在人類食源性病原菌之首[1]。當(dāng)前，沙門氏菌僅有2個(gè)種被確認(rèn)，分別是腸道沙門氏菌（S.enterica）和邦戈?duì)柹抽T氏菌（S.bon-gori）。目前腸道沙門氏菌已確認(rèn)的亞種共有6個(gè)，其中跟食源性疾病密切相關(guān)的是腸道亞種[2]。此外，沙門氏菌也可以按其血清型分類，如腸道亞型就有超過(guò)1400種不同的血清型，其中常見(jiàn)的血清型有傷寒沙門氏菌、腸炎沙門氏菌、副傷寒沙門氏菌等。沙門氏菌通過(guò)食物感染人類，而豬肉則是人類餐桌上的當(dāng)家食品，因此通過(guò)調(diào)查屠宰豬的沙門氏菌污染情況極有意義。黃福標(biāo)等從131頭屠宰豬的腸道分離到45株沙門氏菌，陽(yáng)性率為34%[3]。本研究從屠宰豬體內(nèi)分離沙門氏菌，陽(yáng)性率較前者略低，為16.5%。另外本研究還采集屠宰場(chǎng)空氣、污水和場(chǎng)地器具等樣品進(jìn)行細(xì)菌分離鑒定，其陽(yáng)性率分別為以污水最高，為23.9%；其次為屠宰場(chǎng)地器具，為10.4%；空氣樣品中陽(yáng)性率最低，為9%。結(jié)果說(shuō)明東莞市屠宰場(chǎng)沙門氏菌污染普遍存在。

表1沙門氏菌生化反應(yīng)初步鑒別

表2幾種主要沙門氏菌生化反應(yīng)

表3不同樣品沙門氏菌分離鑒定結(jié)果

我們?cè)?jīng)對(duì)2009至2011年本單位的熒光PCR監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，發(fā)現(xiàn)其平均陽(yáng)性率僅為8.11%[4]。由于熒光PCR的高度敏感性，實(shí)際的分離鑒定陽(yáng)性率可能更低。這說(shuō)明近幾年來(lái)，東莞市屠宰豬沙門氏菌的污染程度有所增加。這與東莞市的生豬屠宰方式有關(guān)。東莞市所有的生豬都在屠宰場(chǎng)統(tǒng)一屠宰檢疫，在屠宰的過(guò)程中，由于空間狹小，所有生豬均使用同一套屠宰器具，這種流水線作業(yè)的方式根本來(lái)不及消毒屠宰用具或消毒不徹底，導(dǎo)致污染。另外據(jù)監(jiān)測(cè)結(jié)果來(lái)看，屠宰場(chǎng)的環(huán)境也受到了污染，如何防止通過(guò)環(huán)境傳播疾病就顯的十分重要。在白天不屠宰的時(shí)候，應(yīng)當(dāng)徹底打掃屠宰場(chǎng)地，加強(qiáng)環(huán)境消毒。屠宰時(shí)產(chǎn)生的污水應(yīng)當(dāng)收集起來(lái)，消毒以后再向外排放，這樣可以降低散毒的風(fēng)險(xiǎn)。

調(diào)查結(jié)果結(jié)果表明在正常的豬體內(nèi)及屠宰場(chǎng)的外環(huán)境，沙門氏菌的感染率都相當(dāng)高，這些污染了的豬肉或內(nèi)臟，不僅可能感染從業(yè)人員，而且當(dāng)它們流向市民的餐桌時(shí)，廣大市民中毒的幾率大大提高從而嚴(yán)重危害人民群眾的健康。這種情況對(duì)公共衛(wèi)生及食品安全構(gòu)成了極大的威脅，應(yīng)當(dāng)引起相關(guān)監(jiān)管部門的重視。

[1]王紅寧，劉書亮，陶勇，等．規(guī)?；i場(chǎng)致病性大腸桿菌、沙門氏菌藥敏區(qū)系調(diào)查[J]．西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2000，13（S1）：84-90.

[2]翁善鋼.從農(nóng)場(chǎng)到餐桌：沙門氏菌的流行與控制[J].養(yǎng)豬，2014（1）：126-127.

[3]黃福標(biāo)，盧冰霞，劉磊，等. 屠宰豬腸道沙門氏菌的分離鑒定、耐藥性分析及致病性試驗(yàn)[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī).2012，39（1）：172-177.

[4]洪偉彬，李永福，張險(xiǎn)朋，等.東莞市畜禽肉制品大腸桿菌O157：H7和沙門菌監(jiān)測(cè)結(jié)果分析[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志，2013，49（9）：69-71.

Isolation and Identifcation of Salmonella Isolates in Abattoir Environment and the Slaughtered Pigs

Hong Weibin，Huang Bingchi，Xu Zhenna，Huang Yuhao，Yuan Jingle，Pan Jie

（Dongguan Animal Disease Prevention and Control Center，Dongguan，Guangdong 523086）

To investigate the Salmonella contamination in abattoir environment and slaughtered pigs，672 samples were collected from the livers of slaughtered pigs，air，sewage，foor and slaughtering instruments in 32 abattoirs in Dongguan City，Guangdong Province. And 111 Salmonella strains（16.5% positive）were isolated and characterized by differential medium and biochemical identifcation including 31 Salmonella typhimurium isolates，17 Salmonella paratyphoid A isolates and 15 Salmonella enteritidis isolates. 64，15，22 and 10 Salmonella strains were detected respectively in livers，air，sewage and various slaughtering instruments. The results indicated that the Salmonella contamination in abattoir environment and slaughtered pigs was very serious in Dongguan. The supervision departments should pay close attention to it.

abattoir；Salmonella contamination；sewage；environment；slaughtered pigs；isolation and identifcation

TS207.4

：C

：1005-944X（2014）09-0045-03

東莞市科技計(jì)劃項(xiàng)目（項(xiàng)目編號(hào)：2012108102053）