陳肇臻，劉小剛

（龍巖市產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)所，福建 龍巖364000）

油炸小食品中乙二胺四乙酸二鈉的高效液相色譜法測(cè)定

陳肇臻，劉小剛

（龍巖市產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)所，福建 龍巖364000）

目的 文中建立一種測(cè)定油炸食品中乙二胺四乙酸二鈉的液相色譜檢測(cè)方法。方法 油炸小食品經(jīng)無(wú)水乙醚除油并揮去乙醚，水萃取，加入氯化銅溶液及抗壞血酸溶液形成Cu-EDTA絡(luò)合物。色譜分離時(shí)使用C18分析柱，甲醇、四正丁基溴化銨緩沖液為流動(dòng)相，梯度洗脫，245nm波長(zhǎng)檢測(cè)。結(jié)果 該方法線性范圍20.00μg?ml-1～ 400.00μg?ml-1，相關(guān)系數(shù)r：0.9999,檢出限6.5mg?kg-1，定量限21mg?kg-1?；厥章剩?3.7～100.7%；精密度: RSD60.2%。結(jié)論 該方法的準(zhǔn)確性和精密度滿(mǎn)足檢測(cè)要求需要。

油炸小食品；乙二胺四乙酸二鈉；梯度洗脫；反相高效液相色譜法

1 引言

乙二胺四乙酸二鈉，GB2760-2011食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)[1]定義其功能類(lèi)別為鰲合劑、防腐劑、抗氧化劑、加工助劑，易溶于水，不溶于乙醚。EDTA是含有羧基（硬堿）和氨基（中間堿）的螯合劑，其分子中兩個(gè)羧基上的H+轉(zhuǎn)移到N原子上，形成雙極離子。由于它的分子中含有兩個(gè)氨氮與四個(gè)羧氧基，具有氨氮與羧氧的絡(luò)合能力，若溶液的酸度很高，它的兩個(gè)羧基可再接受H+，形成H6Y2-，這樣EDTA就相當(dāng)于六元酸，有六級(jí)離解平衡，幾乎能與所有的金屬離子絡(luò)合，具有廣泛的配位性能，與金屬離子形成穩(wěn)定的螯合物，具防腐護(hù)色作用。油炸小食品中微量的鐵、銅等會(huì)促進(jìn)油脂氧化、變色，添加乙二胺四乙酸二鈉可提高油炸小食品抗氧化及防止油炸食品氧化變色。目前，國(guó)內(nèi)檢測(cè)乙二胺四乙酸二鈉的方法主要有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)[2]、高效及超高效液相色譜法[3-8]和離子色譜法[9-10]等，而GB2760-2011食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)[1]未許可油炸小食品添加乙二胺四乙酸二鈉，特建立本測(cè)定方法利用保留時(shí)間定性,外標(biāo)峰面積法定量檢測(cè)油炸小食品中乙二胺四乙酸二鈉含量。

2 材料與方法

2.1試劑

乙二胺四乙酸二鈉標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（純度99.96%）；無(wú)水乙醚；乙酸；0.5%氯化銅；5%抗壞血酸；磷酸；四正丁基溴化銨；無(wú)水乙酸鈉；甲醇（色譜純）；除另有規(guī)定外，試劑均為分析純，水為超純水。

2.2儀器

Waters e2695高效液相色譜儀（2998二極管陣列檢測(cè)器）梅特勒-托利多XS205DU分析天平、萊馳GM200搗磨機(jī)；漩渦混合器；湘儀TGL-20M高速冷凍離心機(jī)；超聲波清洗器SK5200H；101-1E烘箱；pHS-3C酸度計(jì)；SHB-B95A循環(huán)水式真空泵。

2.3色譜條件

檢測(cè)器：二極管陣列檢測(cè)器，波長(zhǎng)245nm，保留時(shí)間及光譜圖定性，外標(biāo)峰面積法定量。

色譜柱：Waters Funfire C18 250×4.6mm 5μm不銹鋼柱，柱溫32℃。

流動(dòng)相：A:甲醇，B：緩沖鹽［（6.45g四正丁基溴化銨+2.46g無(wú)水乙酸鈉）/L］。

流速：變流速梯度洗脫；進(jìn)樣量：10μl。

時(shí)間程序如表1所示

表1 梯度洗脫的時(shí)間程序

2.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

乙二胺四乙酸二鈉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：精確稱(chēng)取1.0004g預(yù)先于85℃烘箱中烘至恒重的乙二胺四乙酸二鈉于100.0ml容量瓶中超純水定容搖勻，濃度為10.00mg?ml-1。

乙二胺四乙酸二鈉工作標(biāo)準(zhǔn)使用液：移取5.00ml乙二胺四乙酸二鈉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液于50.0ml容量瓶中超純水定容搖勻，濃度為1.0mg/ml, 再 稀 釋 成 20.00、40.00、100.00、200.00、400.00μg?ml-1。

2.5 樣品的前處理方法

樣品用GM200搗磨機(jī)粉磨，裝瓶待用。試樣提?。壕_稱(chēng)取2g樣品于50ml離心管中，105℃烘干，加15ml無(wú)水乙醚漩渦混合2min，超聲10min，8000rpm離心5min，去有機(jī)相，再用無(wú)水乙醚除油兩次，試樣常溫?fù)]干后經(jīng)65℃烘箱除乙醚，除油后的樣品加30ml超純水搖勻后超聲20min，加2.5ml0.5%CuCl2及0.5ml5%抗壞血酸，超純水定容50.0ml搖勻，8℃10000rpm離心8min，上清液用0.45μm一次性尼龍過(guò)濾器過(guò)濾于樣品瓶中備用。

加 標(biāo) 回 收： 移 0.2ml，0.5ml、1.0ml、1.5ml200.00μg?ml-1乙二胺四乙酸二鈉工作標(biāo)準(zhǔn)使用液于事先稱(chēng)有樣品離心管中，后同試樣提取。

3 結(jié)果與討論

3.1 色譜條件的選擇

3.1.1流動(dòng)相

甲醇比例影響保留時(shí)間，比例高時(shí)保留時(shí)間短。目標(biāo)物出峰后提高總流速及甲醇比例，使樣品中強(qiáng)保留物盡快流出從而避免干擾下一樣品。流動(dòng)相緩沖鹽未調(diào)pH目標(biāo)物保留時(shí)間較磷酸調(diào)緩沖鹽pH4.0提前出峰約1min，拖尾因子0.99，色譜峰未見(jiàn)異常，本方法流動(dòng)相緩沖鹽未調(diào)pH。

3.1.2檢測(cè)波長(zhǎng)

EDTA-2Na的紫外響應(yīng)非常弱，波長(zhǎng)掃描無(wú)特征吸收峰。通過(guò)轉(zhuǎn)化為Cu-EDTA，最大特征吸收峰為242nm。本方法采用245nm波長(zhǎng)檢測(cè)，光譜圖匹配輔助定性。

3.1.3樣品pH值

當(dāng)pH3.8-4.0時(shí)EDTA與Cu生成比較穩(wěn)定的絡(luò)合物，EDTACu可穩(wěn)定3h，EDTA與Fe在pH在小于1.5形成穩(wěn)定絡(luò)合物；EDTA與AL形成穩(wěn)定絡(luò)合物pH在2-3，EDTA與Ca在堿性條件下形成穩(wěn)定的絡(luò)合物，在酸性條件下Ca難于被EDTA絡(luò)合，本方法樣品中的鈣、鐵、鋁不干擾EDTA-2Na的檢測(cè)。

3.1.4當(dāng)樣品中EDTA2Na濃度超過(guò)1g/ml時(shí)所加的氯化銅不足以完全轉(zhuǎn)化EDTA2Na，檢測(cè)結(jié)果偏低。

3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

乙二胺四乙酸二鈉保留時(shí)間23.7min左右,基線分離。以濃度為X軸，峰面積為Y軸建立校正曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程ρ(μg?ml-1)=-0.02450+2.0046×10-6S,相關(guān)系數(shù)r=0.99989線性范圍：20.0～400.0μg/ml，相關(guān)系數(shù)0.9998。樣品加標(biāo)回收率93.7～100.7%。以3倍噪聲作為方法的檢出限（噪聲0.0153mV），檢出限為6.5mg/kg(2g樣品，定容50.0ml計(jì))；定量限21mg/kg（10倍噪聲計(jì)）。

圖1 油炸地瓜干樣品色譜圖

圖2 EDTA2Na標(biāo)樣色譜圖（200.0μ g?ml-1）

圖3 EDTA2Na標(biāo)樣吸收光譜圖

圖4 EDTA2Na工作曲線圖

3.3 加標(biāo)回收率及重復(fù)性試驗(yàn)

表2 回收試驗(yàn)

樣品提取液按1.2色譜條件連續(xù)6次進(jìn)樣，保留時(shí)間RSD6為0.15%，峰面積RSD6為0.10%。

稱(chēng)取樣品6個(gè)按2.5提取，2.3色譜條件依次進(jìn)樣，保留時(shí)間RSD6為0.20%，樣品中EDTA2Na含量RSD6為0.11%。

4 結(jié)論

該方法的靈敏度、準(zhǔn)確性、精密度、重復(fù)性完全可滿(mǎn)足檢測(cè)要求。

[1] GB2760-2011食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)[S].

[2] SN/T1018-2011出口食品罐頭中乙二胺四乙酸含量檢測(cè)方法[S].

[3] 呂曉華，文紅，許紅琴. 高效液相色譜法測(cè)定板栗罐頭中乙二胺四乙酸二鈉的含量[J]. 中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2009年，3：517-518.

[4] 施旭霞，陳笑梅, 反相高效液相色譜法測(cè)定罐頭食品中乙二胺四乙酸的殘留量[J]. 色譜, 2000，18（5）：445-448.

[5] 劉鵬春，李鴻鳴，王冰高效液相色譜法測(cè)定醬菜中EDTA-2Na的含量[J]. 中國(guó)公共衛(wèi)生，2001, 17(11)：1027-1027.

[6] 羅袆，趙永彪，李淑娟. 反相高效液相色譜法測(cè)定食品中EDTA的含量[J]. 中國(guó)食品添加劑，2006, (4)：156-159.

[7] 王清燕. 高效液相色譜法測(cè)定食品中乙二胺四乙酸二鈉[J]. 黎明職業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，1，41-43.

[8] 何樹(shù)坤. 超高效液相色譜法測(cè)定地瓜干中EDTAB的研究[J]. 福建輕紡，2009，6，31-33.

[9] 黃建，李文仙，霍軍生. 反相離子對(duì)高效液相色譜法測(cè)定果味飲料中的乙二胺四乙酸二鈉[J]. 中國(guó)食品工業(yè)，2009，6，5-56.

[10] 李琛，李迎麗，唐開(kāi)紅. 離子色譜法測(cè)定罐頭、醬菜等食品中的EDTA-2Na含量[J]. 中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2005，10，1233-1234.

Determination of Disodium EDTA in Fried Small Foods by Using HPLC Method

CHEN Zhao-zhen, LIU Xiao-gang
(Longyan Provincial Central Inspection Institute, Longyan 364000, Fujian, China)

Objective:A method of determination of disodium EDTA of fried small foods by HPLC is established in this paper. Method: Through removing oil by anhydrous ether, evaporating ether subsequently, EDTA in fried small foods is then extracted by water. Addition of CuCl2solution and ascorbic acid solution, then the Cu-EDTA complex combond can be formed. In the chromatographic separation, C18 analysis column is served as isolated column, methanol mixed with tetra-n-butylammonium bromide buffer solution(pH=4.0)is used as mobile phase, gradient elution program is made and the detection wavelength is 245 nm. Result: Linear range of the standard curve is 20.00μg ? ml-1～ 400.00μg ? ml-1with the correlation coefficient r=0.9999. The recovery rate of the method is 93.7 ～ 100.7%.The detection limit is 6.5mg?kg-1and the quantitative limit of the method is 21mg?kg-1. Conclusion Precision and accuracy of this method meets the requirements of the detection.

Fried small foods; Disodium EDTA; Gradient elution; RP-HPLC

2013-05-06

陳肇臻，男，龍巖市產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)所，光譜色譜檢驗(yàn)室主任

劉小剛，男，龍巖市產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)所，副所長(zhǎng)，工程師