楊新周，楊子仙，郝志云

（德宏師范高等專(zhuān)科學(xué)校理工系，云南德宏 678400）

臭菜抗氧化活性研究

楊新周，楊子仙，郝志云

（德宏師范高等專(zhuān)科學(xué)校理工系，云南德宏 678400）

為了研究臭菜提取物體外抗氧化活性，考察其對(duì)DPPH自由基和羥自由基活性的清除能力，并且與多種抗氧化劑進(jìn)行對(duì)照研究。通過(guò)實(shí)驗(yàn)得出，臭菜提取物清除DPPH自由基活性的能力優(yōu)于對(duì)香豆酸。結(jié)果表明，臭菜提取物具有很好的清除DPPH自由基和羥自由基活性的能力，是一種良好的天然抗氧化劑。

臭菜；DPPH自由基；羥自由基；抗氧化活性

羽葉金合歡［Acacia pennata（Linn.）Wind］又名臭菜，傣族稱(chēng)為“帕哈”，隸屬于豆科（Leguminosae）金合歡屬（Acacia Miller）。分布于廣東、福建、廣西及印度東部、中南半島、非洲和云南的西雙版納、思茅、德宏等地區(qū)。羽葉金合歡是種食療皆宜的植物，其根、樹(shù)皮及嫩葉均具有藥用價(jià)值，莖可作木材［1，2］。另外臭菜營(yíng)養(yǎng)價(jià)值豐富，具有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，且價(jià)格昂貴，是西雙版納、德宏、文山等地區(qū)最具特色的野生木本蔬菜［3］。目前對(duì)臭菜的研究主要包括人工種植［4］、民族植物學(xué)、營(yíng)養(yǎng)成分分析［5］、其遺傳多樣性［1，3］等方面，而對(duì)臭菜的抗氧化活性研究鮮見(jiàn)報(bào)道。本文采用傳統(tǒng)方法-分光光度法進(jìn)行定量分析［6］。通過(guò)對(duì)臭菜乙醇提取物進(jìn)行清除DPPH自由基和羥自由基（·OH）的能力測(cè)定，希望能為臭菜的綜合利用提供理論依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1．1 主要儀器和試劑

V-1100型可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海美譜達(dá)儀器有限公司），超聲波（SK2200H），電子天平（AR224CN）；數(shù)字顯示恒溫水浴鍋（HH-S24S，上海君竺儀器制造有限公司）；電熱真空干燥箱（ZK 82J型）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（EYELA N-1100）。

DPPH（1，1-二苯基-2-三硝基苯肼），質(zhì)量分?jǐn)?shù)＞99.0%，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；臭菜（嫩莖葉，采于云南德宏州，烘干，粉碎，過(guò)篩），槲皮素、山奈酚、咖啡酸、蘆丁、沒(méi)食子酸、對(duì)香豆酸（購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)浙江華東醫(yī)藥有限公司，質(zhì)量分?jǐn)?shù)＞98%）；番紅花紅、EDTA-Fe2＋（現(xiàn)配現(xiàn)用）、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、雙氧水（現(xiàn)配現(xiàn)用）、乙醇等試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水為二次蒸餾水。

1．2 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及方法

1．2．1 DPPH儲(chǔ)備液的制備

準(zhǔn)確稱(chēng)取10mgDPPH，用無(wú)水乙醇溶解定容至100 mL容量瓶中，得質(zhì)量濃度為0.1mg／mL的儲(chǔ)備溶液。然后稀釋成質(zhì)量濃度為0.024mg／mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.2.2 臭菜提取物的制備

準(zhǔn)確稱(chēng)取2.000 0 g樣品于100mL的錐形瓶中，加入20 mL的乙醇溶液，封口，超聲提取3次，每次45min，合并3次濾液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中濃縮，轉(zhuǎn)移到25mL的容量瓶中，乙醇定容，備用。

1．2．3 清除DPPH自由基能力的測(cè)定

準(zhǔn)確移取4.5 mL DPPH標(biāo)準(zhǔn)溶液液，依次加入一定體積的提取物稀釋液于10 mL比色管中，定容至5m L，置于暗處30 min，在波長(zhǎng)517 nm下測(cè)定空白DPPH溶液的吸光度值（A空白）和加入提取物后DPPH溶液的吸光度值（A樣品），按下式計(jì)算自由基清除率［6］。

1．2．4 羥自由基（·OH）的清除活性測(cè)定

1）調(diào)零管：準(zhǔn)確移取1.00mLPBS于10m L比色管中，加入3.5 mL的水，37℃水浴中恒溫30 min室溫下冷卻，調(diào)零。

2）對(duì)照組：依次加入1.00 mL PBS、1.50 mL 40 μg／mL番紅花紅、1.00mL EDTA-Fe（Ⅱ）、1.00mL蒸餾水于10mL比色管中，37℃水浴中恒溫30min室溫下冷卻，測(cè)定吸光度A（λ＝520 nm），V總＝4.50mL。

3）空白組：依次加入1.00mLPBS、1.50m L 40 μg／mL番紅花紅、1.00mLEDTA-Fe（Ⅱ）、1.00mL 3%H2O2于10 mL比色管中，37℃水浴中恒溫30 min室溫下冷卻，測(cè)定吸光度A0（λ＝520 nm），V總＝4.50mL。

4）樣品組：依次加入1.00mLPBS、1.50mL40 μg／mL番紅花紅、1.00m LEDTA-Fe（Ⅱ）、10.0μL不同濃度的樣品溶液，1.00mL 3%H2O2于10mL比色管中，37℃水浴中恒溫30 min室溫下冷卻，測(cè)定吸光度As（λ＝520 nm），V總＝4.50mL［7］。

清除率＝［As－A0］／［A－A0］×100%

2 結(jié)果與討論

2．1 臭菜清除DPPH自由基活性能力

按照1.2.3的方法測(cè)定臭菜提取物清除DPPH自由基活性的能力，以清除率對(duì)總固形物濃度作圖，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 臭菜提取物對(duì)DPPH自由基的清除曲線(xiàn)Figure 1 DPPH radical scavenging curve of Acacia pennata extracts

從圖1中看出，清除率隨著樣品質(zhì)量濃度的增加而增大，當(dāng)樣品質(zhì)量濃度達(dá)到一定量時(shí)，清除率增加緩慢。從圖1看出當(dāng)臭菜總固形物質(zhì)量濃度為0.08～1.6mg／mL之間，DPPH清除率與濃度呈線(xiàn)性關(guān)系，線(xiàn)性方程為y＝40.407x＋15.152，R2＝0.9933，計(jì)算出總固形物IC50＝0.86 mg／mL。實(shí)驗(yàn)中同樣的方法，測(cè)定對(duì)香豆酸、沒(méi)食子酸、香草酸、咖啡酸、蘆丁對(duì)DPPH自由基的清除率，計(jì)算出IC50。各抗氧化劑質(zhì)量濃度與清除率之間線(xiàn)性方程分別表示如下，咖啡酸：y＝15246x－1.0143，R2＝0.9933，IC50＝0.0033 mg／mL；沒(méi)食子酸：y＝49340x＋4.5849，R2＝0.9775，IC50＝0.000 92mg／mL；香草酸：y＝74.736x＋9.116，R2＝0.9282，IC50＝0.5471 mg／mL；對(duì)香豆酸：y＝17.437x＋10.388，R2＝0.9565，IC50＝2.27 mg／mL。蘆?。簓＝8238x＋14.592，R2＝0.9457，IC50＝0.0043 mg／mL；自由基清除作用以IC50值來(lái)計(jì)算，IC50值越小，表示抗氧化活性越好，蘆丁、咖啡酸、臭菜提取物、沒(méi)食子酸、香草酸、對(duì)香豆酸清除DPPH自由基能力順序?yàn)閷?duì)香豆酸＜臭菜提取物＜香草酸＜蘆?。伎Х人幔紱](méi)食子酸。

2.2臭菜清除羥自由基活性能力

按照1.2.4的方法測(cè)定了臭菜提取物清除羥自由基活性的能力，以清除率對(duì)總固形物濃度作圖，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖2。

圖2 臭菜提取物對(duì)羥由基的清除曲線(xiàn)Figure 2 Hydroxyl radical scavenging curve of Acacia pennata extracts

由圖2可知，清除率隨著樣品濃度的增加而增大，根據(jù)所測(cè)定清除率及臭菜提取物總固形物濃度的關(guān)系，得出清除率及臭菜提取物濃度的線(xiàn)性方程為y＝126.11x＋17.353，R2＝0.951 8，IC50＝0.258 9mg／mL。實(shí)驗(yàn)中同樣的方法，測(cè)定山奈酚、槲皮素、咖啡酸、蘆丁對(duì)羥自由基活性的清除率，計(jì)算出IC50。各抗氧化劑濃度與清除率之間線(xiàn)性方程分別表示如下，槲皮素：y＝6694.5x＋31.077，R2＝0.994 7，IC50＝0.003mg／mL；蘆丁：y＝1996.5x＋3.0273，R2＝0.995，IC50＝0.023mg／mL；咖啡酸：y＝1252.3x＋27.674，R2＝0.990 6，IC50＝0.018mg／mL；山奈酚：y＝7735.3x＋7.982，R2＝0.999 8，IC50＝0.005mg／mL。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，臭菜提取物、山奈酚、蘆丁、槲皮素、咖啡酸清除羥自由基活性能力順序?yàn)椋撼舨颂崛∥铮继J?。伎Х人幔忌侥畏樱奸纹に?。

3 結(jié)論

臭菜提取物對(duì)DPPH自由基和·OH具有一定的清除作用，且隨著臭菜提取物濃度的提高，其清除能力也相應(yīng)地增強(qiáng)。通過(guò)試驗(yàn)得出，臭菜乙醇提取物清除DPPH自由基能力優(yōu)于對(duì)香豆酸。這一結(jié)果為開(kāi)發(fā)抗氧化劑提供了一個(gè)新的來(lái)源，為評(píng)價(jià)臭菜的價(jià)值提供一個(gè)依據(jù)。

［1］ 高潔，李巧明.羽葉金合歡的DNA提取和SSR引物篩選［J］.云南植物研究，2008，30（1）：64-68.

［2］ 施洪，李茂琳.充分發(fā)揮資源優(yōu)勢(shì)打造芒市云藥之鄉(xiāng)［J］.德宏師范高等專(zhuān)科學(xué)校學(xué)報(bào)，2012，22（2）：59-62.

［3］ 高潔，李巧明.云南西雙版納地區(qū)羽葉金合歡的遺傳多樣性研究［J］.生物多樣性2008，16（3）：271-278.

［4］ 潘奇.臭菜人工栽培技術(shù)［J］.云南農(nóng)業(yè)，2004（11）：7.

［5］ 許又凱，劉宏茂，刀祥生，等.臭菜營(yíng)養(yǎng)成分分析及作為特色蔬菜的評(píng)價(jià)［J］.廣西植物，2004，24（1）：12-16.

［6］ 穆懷雪，楊新周，姚福泉，等.不同提取方法對(duì)五味子清除DPPH自由基作用的影響研究［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2012，23（6）：1454-1455.

［7］ 劉瓊，李喬麗，放茂良，等.傣族藥竹葉蘭不同極性部位提取物的抗氧化性研究［J］.中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2011，27（14）：77-81.

Study on Antioxidative Activities of Acacia Pennata

YANG X in-zhou，YANG Zi-xian，HAO Zhi-yun

（Dehong Teachers college，Science and Engineering Department，Dehong 678400，China）

The antioxidant activities in vitro of extract from Acacia pennata were investigated，its scavenging activities for DPPH free radical（DPPH·）and hydroxyl radical（·OH）was studied，and also comparatively with othermultip le antioxidants wasmade.The results show that the order of DPPH free radical scavenging activities is Acacia pennata，p－Coumaric acid.The results show thatextracts of Acacia pennata have antioxidant activities，Acacia pennata is a good natural antioxidant.

Acacia pennata；antioxidant activities；DPPH free radical；hydroxyl radical

Q946

： A

： 1004-275X（2014）01-0015-03

12.3969／j.issn.1004-275X.2014.01.004

收稿：2013-07-10

楊新周（1986-），男，助教，碩士研究生，研究方向：分析化學(xué)。