李峰 袁哲凡

(武漢大學(xué)化學(xué)與分子科學(xué)學(xué)院生物醫(yī)用高分子教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 湖北武漢430072)

腫瘤組織的結(jié)構(gòu)與微環(huán)境同正常組織細(xì)胞的差異性是智能型藥物載體的設(shè)計(jì)基礎(chǔ)。固相腫瘤血管生成迅速，導(dǎo)致腫瘤管脈的分布錯(cuò)綜復(fù)雜，血管架構(gòu)存在缺陷，淋巴流向反饋機(jī)制受損。因此大尺寸的粒子或者高相對(duì)分子質(zhì)量的聚合物易穿過(guò)血管壁，在腫瘤組織內(nèi)累積，并且不易被排出，造成腫瘤特異性的生理分布。這種現(xiàn)象被稱為“增強(qiáng)滲透和滯留”效應(yīng)(EPR effect)，也就是通常所說(shuō)的“被動(dòng)靶向”［1］。此外，腫瘤細(xì)胞的分裂周期較正常細(xì)胞更短，代謝速率更快，細(xì)胞間的信號(hào)傳遞、與細(xì)胞外環(huán)境的物質(zhì)交換、細(xì)胞運(yùn)動(dòng)和遷移等細(xì)胞群體的“社會(huì)行為”也更為頻繁。這些生命活動(dòng)與細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)及功能密切相關(guān)。在腫瘤的細(xì)胞膜上，存在著某些過(guò)度表達(dá)的特異性抗原和受體，比如人類內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體，葉酸受體，血管活性腸肽受體等。這些特異性的受體與抗原成為了藥物傳輸?shù)闹匾悬c(diǎn)。將與之對(duì)應(yīng)的抗體或者配體修飾到載體的表面，可以有效地提高載體穿越細(xì)胞膜障礙的能力，這種方式被稱為“主動(dòng)”靶向藥物傳遞［2］。

除了組織、細(xì)胞結(jié)構(gòu)的不同，腫瘤細(xì)胞的微環(huán)境也表現(xiàn)出與正常細(xì)胞不同的特別性質(zhì)。例如，腫瘤細(xì)胞的糖酵解(glycolysis)與質(zhì)膜的“質(zhì)子泵”(plasma membrane proton-pump)活性強(qiáng)于正常細(xì)胞，因此產(chǎn)生了更多的乳酸分布在細(xì)胞間質(zhì)中，這使得腫瘤組織的細(xì)胞外環(huán)境呈弱酸性［3］;由于大量谷胱甘肽(GSH)和還原性生物酶(比如硫氧還蛋白)的存在，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核空間中出現(xiàn)了高濃度的還原環(huán)境［4］;腫瘤細(xì)胞基于增殖、擴(kuò)散的需要，往往還過(guò)度表達(dá)了許多生物酶，其中以基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)最為常見(jiàn)。MMP對(duì)于腫瘤的血管生成和轉(zhuǎn)移、擴(kuò)散非常重要，因此MMP也成為腫瘤特異性的刺激信號(hào)，并被應(yīng)用到藥物載體的設(shè)計(jì)中［5］。另外，應(yīng)用遠(yuǎn)程控制信號(hào)，如光、磁場(chǎng)和超聲波等，將外部刺激直接聚焦腫瘤部位，或者轉(zhuǎn)化成其他信號(hào)作用于腫瘤組織，目前也成為腫瘤治療研究中的一種新思路。

根據(jù)腫瘤細(xì)胞、組織同正常細(xì)胞、組織的差別，設(shè)計(jì)腫瘤特異型藥物傳遞是藥物載體設(shè)計(jì)研究的主要方向。其中的設(shè)計(jì)思路主要由兩個(gè)方面組成:靶向傳遞的行為控制與藥物釋放的行為控制。靶向傳遞的行為控制是指調(diào)控載體在釋放藥物前生理分布，達(dá)到腫瘤部位的特異性累積，避免對(duì)正常組織的傷害。藥物釋放的行為控制是在調(diào)控藥物離開(kāi)載體、作用于目標(biāo)部位的方式和速率。以下將從這兩個(gè)方面對(duì)智能型藥物載體設(shè)計(jì)的研究現(xiàn)狀進(jìn)行介紹。

1 靶向傳遞行為控制

靶向藥物傳遞可以根據(jù)目標(biāo)部位的不同分為以下3個(gè)方面:組織器官層面的靶向傳遞;細(xì)胞層面的靶向傳遞(細(xì)胞膜靶向);亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的靶向傳遞(靶向細(xì)胞器)。

組織器官層面的靶向傳遞可以通過(guò)EPR效應(yīng)來(lái)實(shí)現(xiàn)。設(shè)計(jì)控制載體尺寸，使之介于10～500nm，可以實(shí)現(xiàn)在腫瘤組織間隙處累積。Chilkoti教授課題組調(diào)控了彈性蛋白基的聚合物多肽(ELP)的最低臨界轉(zhuǎn)變溫度(LCST)，使其在正常體溫37℃時(shí)處于單分子游離狀態(tài)，在接近42℃時(shí)實(shí)現(xiàn)分子間聚集，形成符合EPR效應(yīng)尺寸的納米聚集體，實(shí)現(xiàn)組織層面的載體累積［6］。

癌癥化療的治療效果在很大程度上取決于藥物在病灶部位的累積量，通過(guò)EPR效應(yīng)累積于腫瘤組織間隙的載藥粒子需要實(shí)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)的傳遞來(lái)發(fā)揮療效。影響“被動(dòng)”靶向能力的主要因素是載體粒子尺寸，使用納米技術(shù)傳遞藥物即可獲得“被動(dòng)”靶向的功能。而亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)傳遞的前提是成功地跨越細(xì)胞膜的障礙，所以在靶向傳遞的行為控制中，最為關(guān)鍵的就是從組織到細(xì)胞的傳遞過(guò)程，下面將主要對(duì)這方面的研究進(jìn)行介紹。

1.1 電荷轉(zhuǎn)換型靶向傳遞體系

Kataoka課題組在2007年首先提出了電荷轉(zhuǎn)換型聚合物的概念。他們將富含伯胺基團(tuán)的陽(yáng)離子聚合物通過(guò)化學(xué)修飾馬來(lái)酸酐衍生物轉(zhuǎn)化成負(fù)電性的陰離子聚合物，并以此包載正電性的蛋白制劑。由于靜電排斥作用，陰離子聚合物能減小與血清的相互作用，增加了包載物的血清穩(wěn)定性。但當(dāng)馬來(lái)酸酐衍生物受到弱酸刺激水解離去時(shí)，陰離子聚合物還原成正電性，釋放出同樣帶正電荷的蛋白藥物［7］。王均課題組通過(guò)調(diào)整馬來(lái)酸酐衍生物的結(jié)構(gòu)，將電荷轉(zhuǎn)換的響應(yīng)能力擴(kuò)展到腫瘤細(xì)胞間質(zhì)的pH范圍，并最終通過(guò)電荷轉(zhuǎn)變后的正電性載體與負(fù)電性細(xì)胞膜的靜電相互作用，實(shí)現(xiàn)了對(duì)靶向傳遞的智能調(diào)控［8］。

1.2 應(yīng)用光籠(photo-caging)技術(shù)的靶向傳遞

光籠技術(shù)的主要思路是將光可離去基團(tuán)修飾在功能分子的某些反應(yīng)位點(diǎn)上，以此實(shí)現(xiàn)對(duì)分子功能的抑制，而后又通過(guò)光刺激恢復(fù)原有的功能。光籠技術(shù)的應(yīng)用非常廣泛，但直到2009年，這一技術(shù)才被運(yùn)用到調(diào)控細(xì)胞外靶向行為上來(lái)。

Kohane等人利用光籠技術(shù)制備了光控靶向的納米粒子。他們將具有靶向功能的細(xì)胞黏附肽——YIGSR修飾到聚苯乙烯納米球的表面，并在多肽鏈中的酪氨酸上化學(xué)結(jié)合了4，5-二甲氧基-2-硝基苯基衍生物，從而抑制了YIGSR的細(xì)胞黏附能力。當(dāng)修飾后的聚苯乙烯納米球受到紫外光照射時(shí)，DMNB基團(tuán)離去，YIGSR的靶向功能重新恢復(fù)，介導(dǎo)納米球進(jìn)入目標(biāo)細(xì)胞內(nèi)［9］。此外，Yeh等人也分別利用光可離去基團(tuán)修飾了葉酸和最短鏈長(zhǎng)的細(xì)胞穿膜肽——RRMKWKK來(lái)制備光驅(qū)動(dòng)的靶向藥物傳遞系統(tǒng)［10］。

1.3 基于聚合物保護(hù)層脫離的靶向抑制與活化

這一類載體具有親水長(zhǎng)鏈聚合物外層，以空間位阻隔斷配體與受體間的接觸，達(dá)到抑制靶向功能的目的;并能在外加刺激下剝離親水聚合物，恢復(fù)靶向功能。張先正課題組將聚乙二醇鏈通過(guò)苯甲基亞胺鍵修飾在膠束載體的表面，屏蔽了多肽序列RGD的靶向功能。苯甲基亞胺鍵能在pH＜6.8的條件下水解，使得載體在腫瘤細(xì)胞外露出RGD序列，完成腫瘤識(shí)別的細(xì)胞內(nèi)吞［11］。此外，他們還利用可被基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)降解的多肽序列將聚天冬氨酸鏈修飾在載藥多孔硅球的表面，以抑制硅球表面RGD序列的細(xì)胞靶向能力。由于腫瘤組織過(guò)度表達(dá)MMP，連接聚天冬氨酸保護(hù)層的多肽序列在酶的催化下水解脫離，實(shí)現(xiàn)了酶敏感的腫瘤靶向藥物傳遞［12］。

1.4 其他類型的智能腫瘤靶向傳遞體統(tǒng)

Chilkoti等人設(shè)計(jì)了一種溫度控制的智能腫瘤靶向傳遞體統(tǒng)。高精氨酸密度的細(xì)胞穿膜肽(CPPs)能有效介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)吞，反之則不然。他們利用彈性蛋白基的聚合物多肽膠束在不同溫度下可逆的自組裝與解離，調(diào)控鏈端的短鏈(CPPs)中精氨酸的聚集密度，以此實(shí)現(xiàn)溫度響應(yīng)的腫瘤靶向傳遞［13］。

2 藥物釋放行為控制

根據(jù)包載藥物的方式，我們從化學(xué)鍵合型藥物載體與物理包封型藥物載體兩大方面介紹“智能型”藥物釋放行為控制。

2.1 釋放化學(xué)鍵合型藥物

化學(xué)鍵合型藥物載體通常由通過(guò)可降解的基團(tuán)相連的載藥基質(zhì)與藥物共同組成。載藥基質(zhì)可為高度生物相容的惰性材料，如聚乙二醇、聚羥丙基甲基丙烯酰胺、二氧化硅、金納米粒子等;也可為生物可降解的材料，如聚乳酸-羥基乙酸共聚物、聚氨基酸等。與之鍵合的藥物因此獲得了更佳的溶解性和生理穩(wěn)定性，并在載體的保護(hù)下避免了體內(nèi)的快速清除。鏈接基團(tuán)的選擇是決定藥物最終效能的關(guān)鍵因素。智能型的藥物釋放行為控制即為選擇合適的鏈接基團(tuán)，使之在特定的條件下快速降解，釋放出藥物，并且不會(huì)對(duì)藥物的結(jié)構(gòu)和功能產(chǎn)生任何影響。表1中例舉了部分化學(xué)鍵合型藥物載體的鏈接基團(tuán)及響應(yīng)的刺激信號(hào)。

表1 部分刺激敏感性基團(tuán)

2.2 釋放物理包封型藥物

物理包封型的藥物沒(méi)有經(jīng)過(guò)化學(xué)反應(yīng)處理，完全保持藥物原本的結(jié)構(gòu)和效用。但是，正因?yàn)槿绱?，傳統(tǒng)的物理包封型藥物載體僅能通過(guò)其自身結(jié)構(gòu)與藥物的相互作用力影響藥物在水相中的擴(kuò)散速度。藥物的釋放行為控制是被動(dòng)的，也是低效的。在腫瘤的化療中，往往要求藥物在病灶部位集中并快速釋放。因此載體需要依據(jù)刺激信號(hào)發(fā)生結(jié)構(gòu)變化，以此調(diào)控藥物的釋放行為。比如含縮醛、縮酮結(jié)構(gòu)的交聯(lián)位點(diǎn)的載藥微凝膠可以在內(nèi)涵體的酸環(huán)境下解離釋放藥物［20］;以二硫鍵連接親憎水嵌段的載藥膠束響應(yīng)于細(xì)胞內(nèi)還原環(huán)境快速降解，釋放藥物［21］。近年來(lái)，還新出現(xiàn)以下幾種物理包封型“智能”藥物釋放系統(tǒng)。

2.2.1 層層自組裝聚合物膠囊

近些年，研究者采用具有生物相容性和生物可降解的大分子為組裝單元，通過(guò)層層自組裝技術(shù)，制備出聚合物微膠囊。由于其結(jié)構(gòu)的中空性，聚合物微膠囊作為藥物載體有著特殊的優(yōu)勢(shì)，既可對(duì)藥物起保護(hù)作用，也能通過(guò)囊壁對(duì)外界環(huán)境和物質(zhì)的響應(yīng)調(diào)控藥物的釋放［22-23］。在此基礎(chǔ)上，進(jìn)而發(fā)展出名為“爆破膠囊”的藥物載體。交聯(lián)的凝膠內(nèi)核被緊緊地包裹在聚合物多層膜內(nèi)，經(jīng)刺激降解的凝膠內(nèi)核由于受到外層膜的阻滯而無(wú)法釋放增長(zhǎng)的滲透壓，當(dāng)壓力突破臨界值，整個(gè)膠囊爆破，內(nèi)容物在短時(shí)間內(nèi)噴射而出［24］。張先正課題組將爆破膠囊的應(yīng)用拓展到生理環(huán)境，實(shí)現(xiàn)了對(duì)于大分子材料與小分子藥物在腫瘤弱酸環(huán)境［25］或者細(xì)胞內(nèi)還原環(huán)境［26］的定點(diǎn)爆破釋放。

2.2.2 “自切除”聚合物納米粒子

Shabat等發(fā)明了基于醌甲基化合物的“自切除”樹(shù)形分子。對(duì)“自切除”樹(shù)形分子施以單點(diǎn)刺激，整個(gè)分子就會(huì)以“多米諾”效應(yīng)完全分解［27］。Almutairi等人用“自切除”聚合物制備了載藥納米粒子，并以DMNB結(jié)構(gòu)作為受激位點(diǎn)，實(shí)現(xiàn)了單光子紫外刺激、雙光子近紅外刺激的快速藥物釋放［28］。

2.2.3 介孔硅球藥物儲(chǔ)存器

通過(guò)香豆素分子間的光控可逆反應(yīng)，Tanaka等首次構(gòu)建了基于介孔硅球的“智能”藥物釋放系統(tǒng)［29］。此后，科學(xué)家對(duì)介孔硅球藥物儲(chǔ)存器的構(gòu)建進(jìn)行了廣泛的研究。封堵介孔硅球孔道的材料除了可逆交聯(lián)的香豆素，還包括CdSe、Fe3O4、Au等無(wú)機(jī)納米粒子，胰島素、抗體等生物大分子以及聚乙二醇、聚烯丙基胺-聚苯乙烯磺酸鈉多層膜等合成高分子材料;解封手段包括pH、還原環(huán)境、酶、光等刺激來(lái)實(shí)現(xiàn)封堵材料降解與脫離［30］。

3 結(jié)語(yǔ)

近年來(lái)對(duì)于癌癥化療的基礎(chǔ)研究主要集中在應(yīng)用納米尺寸的藥物載體替代傳統(tǒng)的給藥方式。為保證納米載藥粒子安全、穩(wěn)定地傳送藥物到腫瘤部位，并能以精確的方式實(shí)現(xiàn)藥物在目標(biāo)部位的定點(diǎn)、定量的累積與釋放，就需要藥物載體可以根據(jù)病灶部位特別的刺激信號(hào)相應(yīng)地調(diào)整藥物傳輸方式與釋放的劑量，并同腫瘤建立耦合-反饋的機(jī)制。雖然目前的相關(guān)研究主要為基礎(chǔ)研究，但是我們相信，隨著人們對(duì)腫瘤組織、細(xì)胞的結(jié)構(gòu)與環(huán)境進(jìn)一步深入認(rèn)識(shí)，終將設(shè)計(jì)出能廣泛應(yīng)用于人類重大疾病治療、診斷與預(yù)防的智能型納米藥物載體。

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