羅 嵐，陳 建，王廣發(fā)，胡 艷，宿 利

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一種可以預(yù)防和治療的疾病，其特點(diǎn)表現(xiàn)為持續(xù)存在的氣流受限，氣流受限通常呈進(jìn)行性發(fā)展，伴有肺部及氣道對(duì)有害氣體或有害顆粒所致慢性炎性反應(yīng)的增加，急性加重和合并癥影響患者整體疾病的嚴(yán)重程度。呼出氣冷凝液(exhaled breath condensate，EBC)是檢測(cè)呼吸道疾病炎癥狀態(tài)的方法，是評(píng)價(jià)氣道炎癥和氧化應(yīng)激程度的一種無(wú)創(chuàng)手段,具有簡(jiǎn)便、易行、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，適用于病情嚴(yán)重患者和兒童，包括嬰兒在內(nèi)[1]。白介素9(IL-9)是近年來(lái)受到關(guān)注的細(xì)胞因子。IL-9是由T細(xì)胞激酶誘導(dǎo)的T細(xì)胞及肥大細(xì)胞的生長(zhǎng)因子，與不同種族的小鼠氣道高反應(yīng)性相關(guān)，其基因定位于人染色體5q31-32，這個(gè)區(qū)域有與人變應(yīng)性氣道炎癥相關(guān)的Th2細(xì)胞因子基因簇[2-7]，與哮喘的發(fā)病有密切聯(lián)系。但有研究表明，在COPD患者的肺組織及支氣管肺泡灌洗液(BALF)中也發(fā)現(xiàn)了IL-9[8-9]，國(guó)內(nèi)研究顯示煙熏COPD大鼠模型組血清、BALF、肺組織中IL-9水平與正常對(duì)照組比較均顯著升高[10]，提示吸煙不僅導(dǎo)致支氣管肺局部表達(dá)IL-9增高，而且全身表達(dá)IL-9也增加。因此，IL-9可作為COPD氣道炎癥的檢測(cè)指標(biāo)之一。本研究的目的是查看IL-9能否在EBC中被檢測(cè)出，同時(shí)探討IL-9在EBC中的水平能否反映吸煙及COPD患者氣道炎性水平。

1 資料與方法

1.1 病例納入和排除標(biāo)準(zhǔn) 入選標(biāo)準(zhǔn)：(1)COPD患者既往均有吸煙病史，累計(jì)吸煙量>10包年，穩(wěn)定期和急性加重期患者符合2006版慢性阻塞性肺疾病全球倡議(GOLD)標(biāo)準(zhǔn)[11]。(2)健康吸煙組：累計(jì)吸煙量>10包年。(3)健康非吸煙組：完全不吸煙或累計(jì)吸煙量<0.2包年，且近3個(gè)月不吸煙。(4)至少6個(gè)月無(wú)吸入、口服及靜脈注射激素，急性加重期患者除外。(5)6個(gè)月內(nèi)無(wú)口服茶堿、N-乙酰半胱氨酸、吸入長(zhǎng)效β受體激動(dòng)劑，急性加重期患者除外。排除標(biāo)準(zhǔn)：符合以下之一者排除，(1)兩周內(nèi)有呼吸道炎癥者(鼻炎、咽炎、急性支氣管炎、肺炎)，急性加重期患者除外。(2)患有明確支氣管哮喘、肺間質(zhì)纖維化、過(guò)敏性鼻炎、鼻竇炎、咽炎、扁桃體炎、消化性潰瘍、活動(dòng)性肝炎、小血管炎、類風(fēng)濕、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、發(fā)作充血性心力衰竭、急性心肌梗死者。(3)近3個(gè)月居住地或工作環(huán)境裝修者。(4)不吸煙者3個(gè)月內(nèi)有規(guī)律被動(dòng)吸煙。(5)咳嗽、咳痰、氣短嚴(yán)重，不能耐受試驗(yàn)者。(6)不能遵從研究方案者。(7)留取標(biāo)本前1 h吸煙者。

1.2 臨床資料 選取2006年9—12月北京大學(xué)第一醫(yī)院診治的COPD穩(wěn)定期患者20例為COPD穩(wěn)定期組，其中男18例，女2例；年齡55～88歲；COPD病程2～40年；累計(jì)吸煙量10～74包年。同時(shí)期收入病房的COPD急性加重期患者9例為COPD急性加重期組，其中男6例，女3例；年齡53～82歲；COPD病程4～45年；累計(jì)吸煙量10～50包年。另選擇同時(shí)期在北京大學(xué)第一醫(yī)院體檢中心體檢的健康非吸煙人群14例為健康非吸煙組，其中男11例、女3例，年齡40～77歲；健康吸煙者10例為健康吸煙組，其中男8例、女2例，年齡43～67歲，累計(jì)吸煙量10～40包年。4組性別、年齡比較，COPD穩(wěn)定期組與COPD急性加重期組COPD病程比較，健康吸煙組、COPD穩(wěn)定期組與COPD急性加重期組累計(jì)吸煙量比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，見(jiàn)表1)。受試者均知情同意。

本研究創(chuàng)新點(diǎn)：

以往文獻(xiàn)的研究多針對(duì)于肺泡灌洗液、誘導(dǎo)痰、肺組織活檢等進(jìn)行慢性阻塞性肺疾病(COPD)氣道炎性反應(yīng)研究，如COPD患者支氣管黏膜下白介素9(IL-9)免疫反應(yīng)的細(xì)胞數(shù)量增加,支氣管上皮中白介素9受體(IL-9R)、鈣激活氯離子通道(hCLCA1)的表達(dá)也顯著增加。在COPD患者的肺泡灌洗液中，氣道上皮細(xì)胞有IL-9的表達(dá)。而有研究表明，IL-9與肺泡巨噬細(xì)胞有著密切的關(guān)系，通過(guò)巨噬細(xì)胞直接參與COPD的發(fā)病過(guò)程，或通過(guò)與巨噬細(xì)胞膜表面的IL-9R結(jié)合參與炎性反應(yīng)和氣道損傷。因此，本研究設(shè)想IL-9可作為COPD氣道炎癥的檢測(cè)指標(biāo)之一，而呼出氣冷凝液(EBC)相對(duì)于肺泡灌洗液、肺組織活檢、誘導(dǎo)痰等檢查更加無(wú)創(chuàng)傷性、重復(fù)性高，是較好的檢測(cè)氣道炎癥的方法之一。檢測(cè)EBC中IL-9水平相關(guān)報(bào)道罕見(jiàn)，本研究旨在探討是否能通過(guò)EBC檢測(cè)到IL-9，且在COPD患者中其水平是否會(huì)有明顯升高，從而確定IL-9是否可作為通過(guò)EBC檢測(cè)COPD患者氣道炎性反應(yīng)的手段之一。本研究證實(shí)了EBC中可以檢測(cè)到IL-9，但卻并未進(jìn)一步證明其在COPD患者、健康吸煙者及健康非吸煙者之間的區(qū)別?？蛇M(jìn)一步改進(jìn)收集方法及檢測(cè)方法并擴(kuò)大樣本量，以期待有更好的結(jié)果出現(xiàn)。

1.3 肺功能測(cè)定 受試者在收集EBC前使用Jaeger肺功能儀測(cè)定吸入支氣管擴(kuò)張劑后第1秒用力呼氣末容積占預(yù)計(jì)值的百分比(FEV1%)和第1秒用力呼氣末容積/用力肺活量(FEV1/FVC)。

表1 4組一般資料比較Table 1 Comparison of general information among the four groups

注：COPD=慢性阻塞性肺疾??；*為χ2值，△為t值，余檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)量值為F值；-為無(wú)此項(xiàng)

1.4 EBC收集 所有門診受試者在同一檢查室中留取標(biāo)本，COPD急性加重期患者在病房留取標(biāo)本。兩處室內(nèi)溫度及濕度均保持恒定。EBC留取裝置參照文獻(xiàn)[12]自行設(shè)計(jì)，留取標(biāo)本前需用蒸餾水漱口，戴鼻夾，坐位以平靜呼吸方式(呼吸頻率12～18次/min)通過(guò)浸在冰水混合物中的收集管呼出氣體，15 min，收集完畢后測(cè)量EBC的量，收集1～4 ml液體，并迅速分裝入4～5個(gè)EP管中編號(hào)，置入-70 ℃冰箱中存放。

1.5 IL-9水平測(cè)定 應(yīng)用雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定EBC中IL-9水平。試劑盒購(gòu)自R&B公司。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)樣品測(cè)定出的吸光度(A)值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并采用曲線擬合法求出直線回歸方程；再根據(jù)各待測(cè)樣本的A值計(jì)算出相應(yīng)標(biāo)本的IL-9水平。

2 結(jié)果

2.1 4組FEV1%、FEV1/FVC、IL-9水平比較 4組FEV1%、FEV1/FVC比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；其中健康吸煙組、COPD穩(wěn)定期組、COPD急性加重期組FEV1%較健康非吸煙組降低，COPD穩(wěn)定期組、COPD急性加重期組較健康吸煙組降低，COPD急性加重期組較COPD穩(wěn)定期組降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；COPD穩(wěn)定期組、COPD急性加重期組FEV1/FVC較健康非吸煙組和健康吸煙組降低，COPD急性加重期組較COPD穩(wěn)定期組降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。4組IL-9水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，見(jiàn)表2)。

表2 4組FEV1%、FEV1/FVC、IL-9水平比較Table 2 Comparison of FEV1%,FEV1/FVC and IL-9 among the four groups

注：FEV1%=第1秒用力呼氣末容積占預(yù)計(jì)值的百分比，F(xiàn)EV1/FVC=第1秒用力呼氣末容積/用力肺活量，IL-9=白介素9；與健康非吸煙組比較，*P<0.05；與健康吸煙組比較，△P<0.05;與COPD穩(wěn)定期組比較，▲P<0.05

2.2 COPD患者IL-9水平與年齡、累計(jì)吸煙量、FEV1%、FEV1/FVC相關(guān)性分析 COPD穩(wěn)定期患者IL-9水平與年齡、累計(jì)吸煙量、FEV1%、FEV1/FVC均無(wú)直線相關(guān)關(guān)系(r=0.119，P=0.372；r=0.880，P=0.382；r=0.210，P=0.825；r=-0.100，P=0.918，見(jiàn)圖1～4)。COPD急性加重期患者IL-9水平與年齡、累計(jì)吸煙量、FEV1%、FEV1/FVC均無(wú)直線相關(guān)關(guān)系(r=0.322，P=0.398；r=0.598，P=0.089；r=-0.480，P=0.902；r=-0.279，P=0.467，見(jiàn)圖5～8)。

3 討論

COPD由于其患病人數(shù)多、病死率高、社會(huì)經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)重,已成為一個(gè)重要的公共衛(wèi)生問(wèn)題?，F(xiàn)有的臨床技術(shù)如肺功能在診斷COPD中是以FEV1/FVC<70%作為標(biāo)準(zhǔn)，而這種診斷方式存在的問(wèn)題是，常會(huì)在老年人中診斷較多的COPD，而在年齡小于45歲的人群中診斷不足[11]，可見(jiàn)很多COPD患者在出現(xiàn)氣流受限前氣道內(nèi)的炎性反應(yīng)早已經(jīng)存在，因此早期監(jiān)測(cè)氣道炎性反應(yīng)，預(yù)測(cè)哪些人群可能進(jìn)一步出現(xiàn)氣道結(jié)構(gòu)改變，從而早期干預(yù)、延緩疾病進(jìn)展，對(duì)于診斷治療COPD具有重大意義。目前監(jiān)測(cè)手段有多種，但多為有創(chuàng)傷性操作，推廣范圍較窄。

注：IL-9=白介素9
圖1 COPD穩(wěn)定期患者IL-9水平與年齡相關(guān)性分析散點(diǎn)圖
Figure1 Scatter plot of correlation between IL-9 level and age among stable COPD patients

圖2 COPD穩(wěn)定期患者IL-9水平與累計(jì)吸煙量相關(guān)性分析散點(diǎn)圖Figure 2 Scatter plot of correlation between IL-9 level and accumulative cigarettes consumption among stable COPD patients

注：FEV1%=第1秒用力呼氣末容積占預(yù)計(jì)值的百分比
圖3 COPD穩(wěn)定期患者IL-9水平與FEV1%相關(guān)性分析散點(diǎn)圖
Figure3 Scatter plot of correlation between IL-9 level and FEV1% among stable COPD patients

注：FEV1/FVC=第1秒用力呼氣末容積/用力肺活量
圖4 COPD穩(wěn)定期患者IL-9水平與FEV1/FVC相關(guān)性分析散點(diǎn)圖
Figure4 Scatter plot of correlation between IL-9 level and FEV1/FVC among stable COPD patients

圖5 COPD急性加重期患者IL-9水平與年齡相關(guān)性分析散點(diǎn)圖Figure 5 Scatter plot of correlation between IL-9 level and age among acute COPD patients

圖6 COPD急性加重期患者IL-9水平與累計(jì)吸煙量相關(guān)性分析散點(diǎn)圖Figure 6 Scatter plot of correlation between IL-9 level and accumulative cigarettes consumption among acute COPD patients

圖7 COPD急性加重期患者IL-9水平與FEV1%相關(guān)性分析散點(diǎn)圖Figure 7 Scatter plot of correlation between IL-9 level and FEV1% among acute COPD patients

圖8 COPD急性加重期患者IL-9水平與FEV1/FVC相關(guān)性分析散點(diǎn)圖Figure 8 Scatter plot of correlation between IL-9 level and FEV1/FVC among acute COPD patients

EBC 檢測(cè)作為一種完全無(wú)創(chuàng)的檢測(cè)技術(shù),對(duì)了解氣道炎癥,具有安全、可靠、簡(jiǎn)便等特點(diǎn),并能連續(xù)收集氣道EBC,反映肺部動(dòng)力學(xué)變化,對(duì)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)氣道炎癥,評(píng)估藥物療效,無(wú)疑具有重要的實(shí)用價(jià)值。但EBC檢測(cè)仍處于科研階段,與BALF的對(duì)照研究較少,缺乏循證醫(yī)學(xué)的全面論證[13]。由于各個(gè)實(shí)驗(yàn)室使用不同的收集方法和不同的檢測(cè)方法其檢測(cè)結(jié)果各異,原因可能有以下幾方面:(1)影響EBC收集的因素很多,目前尚無(wú)規(guī)范的收集方法,標(biāo)準(zhǔn)的收集方法至關(guān)重要。因?yàn)椴煌奈镔|(zhì)保存需要不同的溫度,所以冷卻和儲(chǔ)存標(biāo)本的溫度需要標(biāo)準(zhǔn)化。物質(zhì)的黏附程度因收集容器的不同而不同,所以收集的容器也應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)化；(2)EBC中物質(zhì)含量很低,檢測(cè)方法靈敏度低,導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不穩(wěn)定；(3)EBC中成分復(fù)雜,可檢測(cè)上千種物質(zhì),但這些物質(zhì)之間很容易發(fā)生化學(xué)反應(yīng)、降解和生成新物質(zhì)。盡管有這些不足之處，但越來(lái)越多的研究證明EBC檢測(cè)在肺部疾病的診斷方面起著重要作用,具有廣闊的發(fā)展前景。目前，已有相當(dāng)多的文獻(xiàn)報(bào)道COPD患者EBC中各種因子的水平，研究較多的因子有過(guò)氧化氫、pH值、類花生四烯酸類〔人白三烯4(LTB4)、大鼠白三烯(LTE4)、8-異前列腺素、前列腺素E2(PGE2)、前列腺素F2α(PGF2α)〕、一氧化氮(NO)相關(guān)物(S-亞硝基硫醇、亞硝酸鹽)、醛類物質(zhì)(丙二醛、己醛、庚醛)、細(xì)胞因子(IL-6、IL-8、IL-1β、IL-10、IL-12、p70)。IL-9是新近再次被人們關(guān)注的細(xì)胞因子之一，以往其均在哮喘的發(fā)病中被提到，但新的研究表明，其可能參與了COPD的發(fā)病過(guò)程，因?yàn)閰⑴cCOPD發(fā)病的兩種細(xì)胞(中性粒細(xì)胞及巨噬細(xì)胞)表面均有數(shù)量較多的IL-9受體(IL-9R)的表達(dá)，且國(guó)外有報(bào)道，COPD患者BALF中的IL-9水平是有所升高的[9]。EBC中可以含有的最大的蛋白質(zhì)分子量應(yīng)該小于65 KD，IL-9的分子量為40 KD，因此，推測(cè)IL-9在EBC中可以被檢出，且可能與COPD的嚴(yán)重程度相關(guān)。吸煙為COPD發(fā)病的重要危險(xiǎn)因素，吸煙的患者EBC中與炎性反應(yīng)氧化應(yīng)激相關(guān)的因子會(huì)有所升高，因此本研究中也收集了一部分健康吸煙者的EBC，希望其中IL-9水平較其他幾組會(huì)有所差異。

本研究結(jié)果顯示，EBC中IL-9水平COPD穩(wěn)定期組為(0.52±0.49)ng/L、COPD急性加重期組為(0.32±0.07)ng/L、健康吸煙組為(0.42±0.18)ng/L、健康非吸煙組為(0.43±0.20)ng/L，4組間無(wú)差異，同時(shí)COPD穩(wěn)定期及急性加重期患者IL-9水平與年齡、累計(jì)吸煙量、FEV1%、FEV1/FVC均無(wú)直線相關(guān)關(guān)系。考慮原因如下：EBC中IL-9水平總體較低，各組間差異有可能無(wú)法正常體現(xiàn)。肺內(nèi)IL-9可以由巨噬細(xì)胞、支氣管上皮細(xì)胞分泌，有文獻(xiàn)報(bào)道誘導(dǎo)痰液IL-9水平可達(dá)(35.2±27.8)ng/L，誘導(dǎo)痰液可以良好地反映氣道的炎癥，炎性遞質(zhì)產(chǎn)生并附著于氣道上皮，在氣道上皮中高表達(dá)的蛋白在誘導(dǎo)痰液中可以有較高的濃度[14]。EBC組成成分中包括氣道內(nèi)襯液，氣道內(nèi)襯液也能一定程度上反映氣道炎癥，但I(xiàn)L-9分子量較大，可能能夠進(jìn)入EBC中并被攜帶出來(lái)的量要較那些分子量較小的蛋白少，影響了EBC中IL-9的水平。另樣本量較少，不能體現(xiàn)總體情況，也會(huì)影響結(jié)果。

本研究分析數(shù)據(jù)時(shí)發(fā)現(xiàn)3例吸煙者EBC中IL-9水平明顯升高，最高達(dá)2.10 ng/L，追問(wèn)留取前吸煙情況，3例均在留取前30 min內(nèi)吸煙，1例非吸煙者IL-9水平達(dá)3.88 ng/L，追問(wèn)病史其在留取標(biāo)本前20 min內(nèi)有被動(dòng)吸煙史。推測(cè)香煙可能會(huì)增加氣道上皮分泌IL-9的量，但這種影響可能是一過(guò)性的，在離開煙熏環(huán)境后一段時(shí)間內(nèi)IL-9水平會(huì)有所下降。巨噬細(xì)胞是參與COPD發(fā)病的主要細(xì)胞之一，而IL-9R存在于肺泡巨噬細(xì)胞表面，發(fā)現(xiàn)IL-9可抑制巨噬細(xì)胞的氧化爆發(fā)反應(yīng)，COPD患者IL-9水平與巨噬細(xì)胞呈正相關(guān)，免疫組化結(jié)果顯示IL-9主要在巨噬細(xì)胞胞質(zhì)表達(dá)[14]。IL-9與巨噬細(xì)胞關(guān)系密切，香煙可刺激巨噬細(xì)胞分泌一系列的炎性因子導(dǎo)致進(jìn)一步的炎性反應(yīng)，目前尚無(wú)證據(jù)證明巨噬細(xì)胞可以分泌IL-9，但其分泌的其他炎性因子亦有可能刺激產(chǎn)生IL-9的細(xì)胞如上皮細(xì)胞，使吸煙者氣道中IL-9水平升高。

本研究還注意到，COPD急性加重期患者IL-9均數(shù)要相對(duì)較小，這與預(yù)期的結(jié)果相悖?？紤]原因，本組患者均為住院接受治療的患者，患者1周內(nèi)均用過(guò)抗生素，3例患者應(yīng)用全身激素及吸入激素治療，IL-9水平分別為0.29、0.29、0.28 ng/L；3例患者只吸入激素治療，IL-9水平分別為0.32、0.38、0.33 ng/L。腎上腺糖皮質(zhì)激素是目前臨床上廣泛應(yīng)用的抗炎藥物，用于治療支氣管哮喘、肺纖維化及COPD等。腎上腺糖皮質(zhì)激素作用的機(jī)制之一是通過(guò)抑制核因子(NF)-κB，減少細(xì)胞因子和炎性遞質(zhì)的基因表達(dá)和分泌，是目前所知的最強(qiáng)的NF-κB抑制劑。抑制NF-κB的活化并進(jìn)一步抑制氣道的炎性反應(yīng)?？紤]應(yīng)用激素治療可能對(duì)EBC中IL-9的水平有影響，推測(cè)COPD急性加重期患者IL-9水平較穩(wěn)定期患者低，可能與應(yīng)用激素有關(guān)。但因?yàn)闃颖緮?shù)太少，本研究不能作進(jìn)一步分析。

由于目前關(guān)于EBC中IL-9的相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道較少，本研究結(jié)果顯示，IL-9在EBC中是可以被測(cè)出的，但由于影響EBC中炎性因子水平的因素較多，如吸煙、藥物等，盡管已經(jīng)將末次吸煙時(shí)間定在1 h以上，但有些患者并不能正確反映真實(shí)吸煙情況，推測(cè)IL-9水平可能與末次吸煙時(shí)間存在相關(guān)性。藥物治療如激素也可能對(duì)其濃度有所影響。另外，改進(jìn)檢測(cè)IL-9水平方法，增加檢測(cè)的靈敏度，亦可增加結(jié)果的陽(yáng)性率。

EBC有著越來(lái)越廣闊的研究前景，今后的研究方向?yàn)橐?guī)范操作技術(shù),重點(diǎn)解決檢測(cè)方法的問(wèn)題,尋找一種操作流程簡(jiǎn)便、價(jià)格合理的檢測(cè)方法,以適于醫(yī)院和家庭監(jiān)測(cè)疾病,不久的將來(lái)此方法將代替支氣管肺泡灌洗在臨床上廣泛應(yīng)用,最終為呼吸系統(tǒng)疾病患者提供一種方便、小型、家用型氣道炎癥監(jiān)測(cè)儀。

1 Kharitonov SA,Barnes PL.Biomarkers of some pulmonary diseases in exhaled breath[J].Biomarkers,2002,7(1):1-32.

2 Kelleher K,Bean K,Clark SC,et al.Human interleukin-9:genomic sequence,chromosomal lacation，and sequences essential for its expression in human T-cell leukemia virus(HTLV)-1-transformaed human T cells[J].Blood,1991,77(7):1436-1441.

3 Doull IJ,Lawrence S,Watso M,et al.Alletic association of gene markers on chromosomes 5q and 11q with atopy and bronchial hyperresponsiveness[J].Am J Respir Crit Care Med,1996,153(4 Pt 1):1280-1284.

4 Demolin JB,Renauld JC.Interleukin-9 and its receptor:an overview of structure and function[J].Int Rev Immunol,1998,16(3/4):354-364.

5 Van Snick J,Croethals A,Renauld JC,et al.Cloning and characterization of a cDNA for a new mouse T cell growth factor(P40) [J].J Exp Med,1989,169(1):363-368.

6 Schmitt E,van Brandwijk R,Van Snick J,et al.TCGFⅢ/P40 is produced by native murine CD4+T cell but is not a general T cell growth factor[J].Eur J Immunol,1989,19(11):2167-2170.

7 Hunltner L,Druec C,Moeller J,et al.Mast cell growth-enhancing activity(MEA) is structurally related and functionally indentical to the novel mouse T cell growth factor P40/TCGFⅢ[J].Eur J Immunol,1990,20(6):1413-1416.

8 Hauber HP,Bergeron C,Tsicopoulos A,et al.Increased expression of the calcium activated chloride channel in hCLCA1 in airways of patients with obstructive chronic bronchitis[J].Can Respir J,2005,12(3):143-146.

9 Vermeer PD,Harson R,Einwalter LA,et al.Interleukin-9 induces goblet cell hyperplasia during repair of human airway epithelia[J].Am J Respir Cell Mol Biol,2003,28(3):286-295.

10 楊雪梅，萬(wàn)毅新.慢性阻塞性肺疾病大鼠肺內(nèi)白細(xì)胞介素9和γ干擾素的表達(dá)[J].中國(guó)呼吸與危重監(jiān)護(hù)雜志,2006,5(4):297-300.

11 GOLD Executive Committee.Global strategy for the diagnosis,management,and prevention of chronic obstructive pulmonary disease(Revised 2011)[R].2011.

12 喬華,王廣發(fā),丁翠敏.呼出氣冷凝液收集器的設(shè)計(jì)及其臨床應(yīng)用探討[J].臨床內(nèi)科雜志,2005,22(9):625-626.

13 Freels JL,Robbins RA，Campbell SC.Exhaled breath condensate:the past,present and future[J].Clin Pulm Med,2003,10:263-268.

14 劉政,姚婉貞,陳燕,等.白細(xì)胞介素 9在慢性阻塞性肺病發(fā)病中的作用[J].北京大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版,2004,36(4):403-406.