吳 鵬，朱筧青，鄭智國

卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)常見的腫瘤之一，其死亡率居婦科腫瘤之首。據(jù)報道Ⅲ期卵巢癌患者的5年生存率僅為29.0%，近幾十年來，其總生存率未得到明顯改善[1]。高級別漿液性卵巢癌在上皮性卵巢癌中占大多數(shù)，超過2/3[2]。越來越多的證據(jù)表明高級別漿液性卵巢癌有別于其他卵巢癌亞型，幾乎所有高級別漿液性卵巢癌均有P53突變，其他常見突變基因見于控制DNA雙鏈斷裂同源重組修復(fù)途徑，如BRCA1/2、PALB2、RAD51、RAD50、BARD1、CHK2和BRIP1等[3]。因而，近年來高級別漿液性卵巢癌受到越來越多科學(xué)家的關(guān)注。治療后復(fù)發(fā)是影響高級別漿液性卵巢癌患者存活率的重要因素，大多數(shù)進(jìn)展期高級別漿液性卵巢癌患者在標(biāo)準(zhǔn)治療(減瘤術(shù)+化療)后幾個月或幾年內(nèi)復(fù)發(fā)。其復(fù)發(fā)風(fēng)險明顯受病理分期和術(shù)后殘留灶大小影響，但目前的研究還不足以準(zhǔn)確地預(yù)測患者復(fù)發(fā)風(fēng)險，因而還需要尋找更多的復(fù)發(fā)預(yù)測分子標(biāo)志物，以便更好地指導(dǎo)卵巢癌患者個性化治療[4]。P53、人表皮生長因子受體2(CerbB-2)、雌激素受體(ER)和孕激素受體(PR)的表達(dá)情況在卵巢癌患者中的預(yù)后價值已有研究[5-6]，而其在高級別漿液性卵巢癌復(fù)發(fā)的預(yù)測價值研究較少。CerbB-2、ER和PR共表達(dá)對高級別漿液性卵巢癌中的復(fù)發(fā)預(yù)測價值鮮見報道。本研究應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測高級別漿液性卵巢癌中P53、CerbB-2、ER和PR的表達(dá)情況，探討其與患者無復(fù)發(fā)生存時間(RFS)的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 入選標(biāo)準(zhǔn)：(1)Ⅲ～Ⅳ期高級別漿液性卵巢癌；(2)本院首診并接受手術(shù)和鉑類藥物為基礎(chǔ)的化療；(3)標(biāo)準(zhǔn)治療后已治愈且復(fù)發(fā)后來本院接受后續(xù)治療。根據(jù)以上標(biāo)準(zhǔn)，選取2002年9月—2011年2月入住本院的高級別漿液性卵巢癌患者32例。患者年齡39～69歲，平均(51.8±7.6)歲；宮頸癌國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)分期Ⅲ期30例、Ⅳ期2例，且所有標(biāo)本均經(jīng)本院病理科確診。高級別漿液性卵巢癌患者RFS≥12個月為預(yù)后良好，RFS<12個月為預(yù)后差；以12個月為界，將患者分為RFS≥12個月組(18例)和RFS<12個月組(14例)，兩組的平均年齡分別為(51.0±8.1)和(52.8±7.1)歲，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=-0.654，P=0.518)。所有患者或家屬對研究知情同意。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本的處理 組織標(biāo)本用10%中性甲酫溶液及時固定，后經(jīng)梯度乙醇(75%、85%、95%、100%)脫水，二甲苯透明，浸蠟后石蠟包埋。

1.2.2 免疫組化實驗 采用超敏試劑盒(均購自正規(guī)試劑公司)檢測P53、CerbB-2、ER和PR抗體。按試劑盒說明書步驟進(jìn)行染色，檸檬酸高溫修復(fù)，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色，將已知陽性片作為陽性對照。實驗結(jié)果判斷：以CerbB-2陽性表達(dá)位于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)，P53、ER和PR陽性表達(dá)位于細(xì)胞核，呈棕黃色顆粒狀為陽性表達(dá)。免疫組化定量分析(半定量)根據(jù)細(xì)胞著色深度及陽性細(xì)胞數(shù)分別記分為0～3分，著色深度以多數(shù)細(xì)胞呈色程度為準(zhǔn)。凡細(xì)胞核或細(xì)胞膜內(nèi)著淺棕色者為1分、棕色者為2分、深棕色者為3分、不著色為0分；鏡下視野中陽性細(xì)胞占所有細(xì)胞的比例<10%為1分、10%～50%為2分、>50%為3分。根據(jù)上述兩項指標(biāo)的積分?jǐn)?shù)分為4級，0分為陰性(-)、2～3分為弱陽性(+)低表達(dá)、4分為陽性(++)中表達(dá)、5～6分為強(qiáng)陽性(+++)高表達(dá)[7]。

1.2.3 RFS判斷標(biāo)準(zhǔn) 患者接受標(biāo)準(zhǔn)治療后獲得臨床治愈，RFS為從末次化療到復(fù)發(fā)時間，復(fù)發(fā)標(biāo)準(zhǔn)為臨床復(fù)發(fā)證據(jù)(婦科檢查或影像學(xué)檢查提示腫塊)出現(xiàn)或血清糖類抗原125(CA125)持續(xù)升高。

2 結(jié)果

2.1 P53、CerbB-2、ER和PR在高級別漿液性卵巢癌患者中的表達(dá)情況 P53蛋白主要定位于細(xì)胞核,陽性細(xì)胞核被染成棕黃色,胞膜、胞質(zhì)均無著色；CerbB-2主要表達(dá)于細(xì)胞膜,細(xì)胞膜染成棕黃色，鏡下見陽性細(xì)胞呈片狀表達(dá)；ER免疫組化染色切片中,可見棕黃色或橘黃色顆粒位于細(xì)胞核內(nèi)，胞質(zhì)和胞膜未見染色顆粒；PR陽性表達(dá)情況與ER類似(見圖1)。32例高級別漿液性卵巢癌患者中，P53、CerbB-2、ER和PR的陽性表達(dá)率見表1。

注：CerbB-2=人表皮生長因子受體2，ER=雌激素受體，PR=孕激素受體

圖1 組織切片中P53、CerbB-2、ER和PR表達(dá)情況(×400)

Figure1 Expression of P53,CerbB-2,ER and PR in tissue sections

2.2 不同RFS的高級別漿液性卵巢癌患者中P53、CerbB-2、ER和PR陽性表達(dá)率的比較 不同RFS的高級別漿液性卵巢癌患者P53、ER和PR的陽性表達(dá)率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；RFS<12個月組CerbB-2的陽性表達(dá)率高于RFS≥12個月組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05，見表2)。

2.3 不同RFS的高級別漿液性卵巢癌患者CerbB-2、ER和PR共表達(dá)情況 進(jìn)一步對CerbB-2、ER和PR的共表達(dá)情況進(jìn)行分析。以CerbB-2陰性、ER陽性或PR陰性為標(biāo)準(zhǔn)，同一個患者只要符合2個及以上標(biāo)準(zhǔn)即為共表達(dá)陽性(表明患者復(fù)發(fā)風(fēng)險低)，其余情況為陰性。RFS≥12個月組CerbB-2、ER和PR共表達(dá)陽性率高于RFS<12個月組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=7.619，P=0.008，見表3)。

表1 P53、CerbB-2、ER和PR在高級別漿液性卵巢癌患者中的表達(dá)情況

Table1 Expression of P53,CerbB-2,ER and PR in high-level serous ovarian cancer patients

抗體例數(shù)陽性例數(shù)高表達(dá) 中表達(dá) 低表達(dá)陽性總例數(shù)陽性率(%)P533214332062.5CerbB-2320681443.8ER3261062268.8PR322181134.4

表3 不同RFS的高級別漿液性卵巢癌患者CerbB-2、ER和PR共表達(dá)陽性率的比較〔n(%)〕

Table3 Comparison of the positive co-expression rates of CerbB-2,ER and PR in high-level serous ovarian cancer patients with different RFSs

組別例數(shù)CerbB-2、ER、PR共表達(dá)為陽性CerbB-2、ER、PR共表達(dá)為陰性RFS≥12個月組1815(83.3)3(16.7)RFS<12個月組145(35.7)9(64.3)

3 討論

高級別漿液性卵巢癌是卵巢癌中最常見的一個亞型，臨床診斷時往往為晚期。雖然經(jīng)過標(biāo)準(zhǔn)治療后大多數(shù)患者能夠獲得臨床治愈，但由于其易復(fù)發(fā)和耐藥等原因，患者的5年生存率僅為35.0%～40.0%[4]。

P53基因是一個經(jīng)典的抑癌基因，幾乎所有高級別漿液性卵巢癌患者均存在P53突變[3]。K?bel等[8]通過對502例位于骨盆的高級別漿液性卵巢癌患者分析發(fā)現(xiàn)P53過表達(dá)預(yù)示著復(fù)發(fā)風(fēng)險小。本研究顯示，不同RFS的高級別漿液性卵巢癌患者P53陽性表達(dá)率間無明顯差異，提示P53表達(dá)情況與RFS無關(guān)，這可能與本研究納入分析樣本數(shù)量少和病理分期晚等因素有關(guān)。

CerbB-2是一個癌基因，多數(shù)研究認(rèn)為CerbB-2表達(dá)陽性的卵巢癌患者預(yù)后差[9]。Sueblinvong等[10]研究發(fā)現(xiàn)早期上皮性卵巢癌患者CerbB-2過表達(dá)與患者預(yù)后無關(guān)?？梢娪捎诩{入研究患者的分期不同，即使同一個分子標(biāo)志物的臨床價值也有差異。本研究結(jié)果表明RFS<12個月組CerbB-2的陽性表達(dá)率高于RFS≥12個月組，提示CerbB-2陽性患者預(yù)后差。結(jié)合文獻(xiàn)報道可以推測CerbB-2在晚期卵巢癌細(xì)胞中起著重要的生物學(xué)功能，其過表達(dá)時癌細(xì)胞惡性程度更高。

有研究通過對106例卵巢癌患者進(jìn)行分析，ER和PR陽性表達(dá)率分別為39.6%和33.0%，ER陽性表達(dá)率在高級別卵巢癌中明顯增加，但ER表達(dá)與預(yù)后沒有密切關(guān)系，而PR與RFS和總生存期(OS)有一定關(guān)系(基于單變量分析)[6]。本研究發(fā)現(xiàn)ER和PR的陽性表達(dá)率分別為68.8%和34.4%，ER陽性表達(dá)率明顯高于文獻(xiàn)報道，可能與本研究對象均為高級別漿液性卵巢癌患者有關(guān)。但不同RFS的高級別漿液性卵巢癌患者ER和PR的陽性表達(dá)率間無明顯差異，提示ER和PR的表達(dá)情況與RFS無關(guān)。

本研究進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)CerbB-2陰性、ER陽性或PR陰性(其中符合2個及以上標(biāo)準(zhǔn))的患者復(fù)發(fā)風(fēng)險低，但還需要更多的病例研究來驗證。另外，CerbB-2、ER和PR的共表達(dá)是否有明確的生物學(xué)功能也還需要進(jìn)一步研究。

有研究表明，對于完成手術(shù)和化療后臨床已完全緩解的卵巢癌患者，隨訪監(jiān)測發(fā)現(xiàn)無癥狀復(fù)發(fā)患者治療后的總生存率(71.9%)明顯高于有癥狀復(fù)發(fā)患者(50.7%)[11]。近年各國科學(xué)家也致力于卵巢癌首次治療后復(fù)發(fā)控制的藥物研究，如帕唑帕尼(pazopanib)[12]。然而在實施復(fù)發(fā)控制前最好能明確哪些卵巢癌患者能從中受益，因此，首次治療后對復(fù)發(fā)風(fēng)險的有效預(yù)測和復(fù)發(fā)的早期診斷已經(jīng)成為業(yè)內(nèi)關(guān)注的熱點。本研究提示聯(lián)合檢測CerbB-2、ER和PR可作為預(yù)測高級別漿液性卵巢癌患者復(fù)發(fā)風(fēng)險的潛在標(biāo)志物，但還需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量來驗證。

表2 不同RFS的高級別漿液性卵巢癌患者P53、CerbB-2、ER、PR陽性表達(dá)率的比較〔n(%)〕

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