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        正交試驗(yàn)優(yōu)選地榆總鞣質(zhì)提取工藝?

        2014-02-09 06:28:32許建勇姜曉燕
        關(guān)鍵詞:鞣質(zhì)棕色溶劑

        嚴(yán) 瑋,許建勇,姜曉燕,繆 婧

        (1.南通市中醫(yī)院,南通 226001;2.蘇州大學(xué),蘇州 215000)

        地榆(Sanguisorba officinalis L.)為多年生薔薇科(Rosaceae)地榆屬(Sanguisorba L.)植物的草本植物,以根入藥。地榆中的鞣質(zhì)具有抑菌、抗腫瘤、抗氧化、降血糖、降血脂、免疫、抗腹瀉、抗病毒和降低尿毒癥毒素等多種藥理活性[1-3],因此考察如何快速有效地提取地榆中鞣質(zhì)具有現(xiàn)實(shí)意義。

        1 試藥與儀器

        1.1 工藝研究用藥材

        地榆(批號(hào)120501)購(gòu)于南通三越中藥飲片有限公司。

        1.2 儀器設(shè)備

        T6 型新世紀(jì)紫外-可見分光光度計(jì),北京普析通用儀器有限責(zé)任公司生產(chǎn);1001 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,上海愛朗儀器有限公司生產(chǎn);AL104 型電子分析天平,梅特勒-托利多上海有限公司生產(chǎn);沒食子酸對(duì)照品(批號(hào)110831-201204),購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所,其他試藥均為分析純。

        2 方法與結(jié)果

        2.1 總鞣質(zhì)的含量測(cè)定[4-5]

        2.1.1 對(duì)照品溶液制備 精密稱取沒食子酸對(duì)照品50 mg,置于100 mL棕色容量瓶中,加水溶解稀釋至刻度,精密量取5 mL,置50 mL 棕色容量瓶中,加水稀釋至刻度搖勻即得。

        2.1.2 供試品溶液的制備 稱取地榆10 g粉碎,過(guò) 60目篩置于容器中,采用不同方法、按不同溶劑濃度、料液比、時(shí)間、溫度進(jìn)行提取、抽濾,合并濾液置于 250 mL 棕色容量瓶中,加水 150 mL放置過(guò)夜,超聲處理 10 min,放冷至室溫,加水至刻度、搖勻,靜置過(guò)夜,棄去初濾液 50 mL,精密量取續(xù)濾液 10 mL,置于 100 mL 棕色容量瓶中,用水稀釋至刻度搖勻即得。加水定容至 200 mL 量瓶中即得。

        2.1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密吸取沒食子酸對(duì)照品溶液 0.5、1.0、2.0、3.0、4.0和5.0 mL,分別置于25 mL棕色量瓶中,分別加磷鉬鎢酸試液1 mL,依次精密加入12 mL 20%碳酸鈉溶液,加水稀釋至刻度搖勻,以水為空白,760 nm 處測(cè)定吸光度(Y),以Y為縱坐標(biāo),質(zhì)量濃度X為橫坐標(biāo),得回歸方程Y=47.65X-0.085(r=0. 9994),提示沒食子酸在1~10 μg/mL與Y呈良好線性關(guān)系。

        2.1.4 樣品測(cè)定 按《中國(guó)藥典》2010 版附錄XB 鞣質(zhì)含量測(cè)定方法測(cè)定。①總酚含量:精密量取供試品溶液0.2 mL,置25 mL 棕色量瓶中,按 2. 1. 3 項(xiàng)下方法測(cè)定Y,計(jì)算總酚質(zhì)量濃度;②不被吸附的多酚含量:精密量取供試品溶液25 mL,加至已有干酪素0. 6 g 的100 mL具塞錐形瓶中,密塞置30 ℃水浴中保溫1 h,振搖取出放冷、搖勻,過(guò)濾棄初濾液,取續(xù)濾液0.2 mL置于25 mL 棕色量瓶,按2.1.3項(xiàng)下方法測(cè)定Y,計(jì)算不被吸附的多酚質(zhì)量濃度。根據(jù)公式計(jì)算:鞣質(zhì)含量=總酚量-不被吸附多酚含量。

        2.1.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取供試品溶液0. 2 mL,置 25 mL 棕色量瓶中,按2.1.3項(xiàng)下方法測(cè)定X,重復(fù)5次,RSD為0.10%,提示儀器精密度良好,操作平行穩(wěn)定。

        2.1.6 加樣回收率試驗(yàn) 精密吸取3份供試品溶液0.2 mL,分別準(zhǔn)確加入高、中、低3個(gè)劑量組的對(duì)照品,按 2.1.3項(xiàng)下方法測(cè)定X,計(jì)算加樣回收率96.62%,RSD為0.97%。

        2.2 提取

        2.2.1 正交試驗(yàn)[6-7]表2、3顯示,地榆的鞣質(zhì)在乙醇的水溶液中具有較好的溶解性,試驗(yàn)乙醇濃度、加溶劑倍數(shù)、回流時(shí)間和提取次數(shù)設(shè)計(jì)為4因素3水平,稱取地榆10 g,粉碎過(guò)60目篩,緊密稱定,按表1進(jìn)行提取,以總鞣質(zhì)含量為指標(biāo)進(jìn)行考察。

        表1 因素水平表

        表2 正交試驗(yàn)結(jié)果(L9(34))

        表3 方差分析表(SAS)

        注:F臨界值F0.01(1,2)=99,F(xiàn)0.05(1,2)=19,*顯著

        表2、3顯示,乙醇濃度為影響總鞣質(zhì)的主要因素,而回流時(shí)間、溶劑倍數(shù)和提取次數(shù)為次要因素,搭配A3C1B2D3。影響總鞣質(zhì)含量的主要因素排列為:乙醇濃度>回流時(shí)間>溶劑倍數(shù)>提取次數(shù),即藥材加80%乙醇、溶劑10倍、回流2次,每次回流1 h。

        2.2.2 驗(yàn)證試驗(yàn) 表4顯示,稱取10 g地榆4份,分別加80%乙醇回流1 h,溶劑10倍,回流2次,減壓回收溶劑。

        表4 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

        表5顯示,2批樣品中總鞣質(zhì)含量相近,略高于正交表中的最高含量,提示按正交試驗(yàn)篩選的最優(yōu)提取工藝基本穩(wěn)定、可行。

        3 討論

        本課題以地榆所含總鞣質(zhì)為指標(biāo)進(jìn)行正交試驗(yàn)篩選,參考2010 年版《中國(guó)藥典》1部附錄干酪素法,以沒食子酸做對(duì)照品制定標(biāo)準(zhǔn)曲線并測(cè)定鞣質(zhì)含量[2]。本課題中測(cè)得地榆所含鞣質(zhì)7.2%,與文獻(xiàn)結(jié)果相似[8-9]。

        預(yù)試驗(yàn)結(jié)果顯示,溫度對(duì)提取鞣質(zhì)的工藝影響并不大,因此未納入溫度的研究,與文獻(xiàn)結(jié)論相似[10]。相對(duì)乙醇,甲醇的溶解性較好[11],純甲醇的提取效率最高,可能與甲醇穿透細(xì)胞能力較強(qiáng)有關(guān)。但考慮甲醇的安全性和大生產(chǎn)的可行性,鞣質(zhì)的極性較大,也可以溶解在水中,因此本課題針對(duì)不同濃度的乙醇水溶液作為受試溶劑進(jìn)行考察。

        經(jīng)過(guò)正交設(shè)計(jì)得到地榆總鞣質(zhì)提取的最佳工藝,藥材加80%乙醇回流1 h,溶劑10倍,回流2次。按最佳工藝進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)驗(yàn)證,結(jié)果顯示總鞣質(zhì)的提取穩(wěn)定,溶劑采用乙醇溶液,此工藝適合于大生產(chǎn)提取地榆總鞣質(zhì)。

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