李雪萍，李建宏，孟憲剛，鄭 楠，謝佳佳

（蘭州交通大學(xué)化學(xué)與生物工程學(xué)院，甘肅 蘭州 730070）

漿水中微生物的分離與鑒定

李雪萍，李建宏，孟憲剛*，鄭 楠，謝佳佳

（蘭州交通大學(xué)化學(xué)與生物工程學(xué)院，甘肅 蘭州 730070）

以漿水為實(shí)驗(yàn)材料，在多種培養(yǎng)基平板上分離純化其中的微生物，共得到24 株菌，其中細(xì)菌20 株，絲狀真菌3 株，酵母菌1 株。對(duì)純化后的各菌株進(jìn)行菌落形態(tài)觀察、革蘭氏染色、生化特性研究以及分子生物學(xué)鑒定，結(jié)果表明：漿水中存在多種微生物，其細(xì)菌以乳桿菌屬或雙歧桿菌屬等益生菌為主，酵母菌為釀酒酵母，絲狀真菌為變灰青霉和橘青霉。結(jié)果說(shuō)明漿水微生物組成優(yōu)良，具有開(kāi)發(fā)利用潛力，但其中還存在雜菌和有害菌，應(yīng)在生產(chǎn)中引起進(jìn)一步重視。

漿水；微生物；分離；鑒定

近30年來(lái)，我國(guó)國(guó)民經(jīng)濟(jì)實(shí)現(xiàn)了飛躍式發(fā)展，人民生活水平得到了極大的提高，飲食結(jié)構(gòu)也相應(yīng)發(fā)生了變化，富含脂肪、膽固醇等物質(zhì)高營(yíng)養(yǎng)、高熱量的食物越來(lái)越多的被人們食用，與之相隨，動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓、冠心病等心血管疾病的發(fā)病率也在逐年增高，有統(tǒng)計(jì)顯示其已成為我國(guó)引起死亡的主要疾病。而有研究發(fā)現(xiàn)[1]，發(fā)酵蔬菜制品在降低膽固醇，預(yù)防心腦血管疾病方面有卓越的性能。因此，傳統(tǒng)發(fā)酵蔬菜受到了人們的重視，其中一些種類實(shí)現(xiàn)了工業(yè)化、標(biāo)準(zhǔn)化的生產(chǎn)，如韓國(guó)泡菜、日本泡菜等。近年來(lái)，我國(guó)在這一領(lǐng)域也有了突飛猛進(jìn)的發(fā)展，據(jù)中國(guó)調(diào)味品協(xié)會(huì)的統(tǒng)計(jì)，目前我國(guó)發(fā)酵蔬菜的年產(chǎn)值已超過(guò)150億元，且連續(xù)三年保持了20%～30%的增長(zhǎng)率[2]。在此趨勢(shì)帶動(dòng)之下，一些富于我國(guó)地方特色的發(fā)酵蔬菜被越來(lái)越多的學(xué)者所關(guān)注，如在西北地區(qū)的廣受歡迎的發(fā)酵食品漿水，近年來(lái)就有學(xué)者對(duì)其進(jìn)行了研究，呂嘉櫪等[3]研究了漿水的發(fā)酵工藝，張培等[4]研究了漿水中有機(jī)酸的含量，這些研究為漿水的進(jìn)一步深入研究乃至實(shí)現(xiàn)工業(yè)化的生產(chǎn)奠定了理論基礎(chǔ)。但是，相對(duì)于其他發(fā)酵蔬菜，漿水的研究及開(kāi)發(fā)仍顯落后，尤其作為基礎(chǔ)性的微生物分離鑒定工作，前人研究的較少且較粗造，成為了漿水研究工作中的薄弱環(huán)節(jié)，也是實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)進(jìn)程中的瓶頸因素。因此，對(duì)漿水中可培養(yǎng)微生物進(jìn)行分離鑒定就是一項(xiàng)非常必要而迫切的工作，其不僅對(duì)于漿水的開(kāi)發(fā)有重要作用，而且對(duì)豐富我國(guó)發(fā)酵蔬菜種類、豐富人民餐桌具有積極意義。

本研究選擇以甘肅慶陽(yáng)環(huán)縣為采樣地點(diǎn)，該地區(qū)食用漿水的歷史悠久，制作工藝較為成熟，且該地區(qū)氣候特征為西北典型的溫帶大陸性半干旱氣候，因此，采樣地點(diǎn)具有代表性。分離純化漿水中的微生物，并結(jié)合生理生化法和分子生物學(xué)方法鑒定其種屬，旨在為進(jìn)一步選育優(yōu)良益生菌奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

漿水：采自甘肅省慶陽(yáng)市環(huán)縣木缽鎮(zhèn)吳家墩村，取樣時(shí)參考當(dāng)?shù)厥秤昧?xí)慣，在芹菜漿水處于風(fēng)味最佳的階段（無(wú)泡沫、味酸、漿水清澈、口感清爽[5]）時(shí)取樣，取得樣品后，貯存于無(wú)菌容器，低溫運(yùn)輸至實(shí)驗(yàn)室，立即分離。

細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒（離心柱型） 北京百泰克生物技術(shù)有限公司；HP Fungal DNA Kit（離心柱型） 美國(guó)Omega公司；2 000 bp DNA Ladder 美國(guó)Biomiga公司；十二烷基硫酸鈉（sodium dodecyl dulfate，SDS）、十六烷基三甲基溴化銨（hexadecyl trimethyl ammonium bromide，CTAB）、乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA）、Tris-飽和酚美國(guó)Sigma公司；瓊脂糖、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）擴(kuò)增試劑 生工生物工程（上海）股份有限公司；β-巰基乙醇（分析純） 天津市精細(xì)化工研究所；異戊醇（分析純） 上海中秦化學(xué)試劑有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

Nano Drop 2000紫外分光光度計(jì) 美國(guó)賽默飛世爾科技公司；2500凝膠成像儀、HE-120電泳儀 上海天能科技有限公司；Sorvall legend RT離心機(jī) 美國(guó)Kendro公司；MyCycler PCR儀 美國(guó)伯樂(lè)公司；Centrifuge 5418R臺(tái)式離心機(jī)、各型加樣槍 德國(guó)艾本德公司。

1.3 培養(yǎng)基

牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、YPD培養(yǎng)基、醋酸菌篩選培養(yǎng)基、查氏培養(yǎng)基、MRS培養(yǎng)基、M17培養(yǎng)基、TYC培養(yǎng)基。

1.4 方法

1.4.1 菌株分離

將漿水在無(wú)菌條件下分別稀釋至合適濃度（稀釋度以平板表面出現(xiàn)單菌落為度），在1.3節(jié)所示7 種培養(yǎng)基上用平板涂布法分離單菌落，恒溫培養(yǎng)（細(xì)菌37 ℃培養(yǎng)，酵母菌30 ℃培養(yǎng)，絲狀真菌25 ℃培養(yǎng)），細(xì)菌和酵母菌用平板劃線法純化，絲狀真菌用單孢子分離法純化。鏡檢，挑選在平板上菌落形態(tài)一致、在顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)一致的菌株作為實(shí)驗(yàn)菌株；兼性厭氧菌采用改良的焦性沒(méi)食子酸法培養(yǎng)[6]。

1.4.2 菌落形態(tài)及細(xì)胞形態(tài)的觀察

將已純化的菌株活化后，接種在相應(yīng)的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)至24～48 h時(shí)觀察并記錄菌落形狀、色澤、隆起、表面平整度、邊緣形狀等；細(xì)菌采用涂片法，培養(yǎng)至24～36 h時(shí)取樣涂片，用三步法做革蘭氏染色，并在油鏡下觀察菌體形狀和顏色（分別用Staphyloccocus aureus和Escherichia coli做陽(yáng)性和陰性對(duì)照）；酵母菌用水浸片法觀察；絲狀真菌采用插片法在40 倍顯微鏡下取樣觀察，并根據(jù)《真菌鑒定手冊(cè)》[7]、《常見(jiàn)與常用真菌》[8]、《酵母菌的特征與鑒定手冊(cè)》[9]查詢各真菌的分類地位。

1.4.3 生化特性的研究

將已純化的各細(xì)菌活化后分別進(jìn)行如下實(shí)驗(yàn)：接觸酶反應(yīng)實(shí)驗(yàn)、淀粉水解實(shí)驗(yàn)、明膠液化實(shí)驗(yàn)、石蕊牛奶實(shí)驗(yàn)、糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)、硫化氫產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)、吲哚產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)、乙酰甲基甲醇（V-P）實(shí)驗(yàn)，準(zhǔn)確觀察并記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。根據(jù)菌落形態(tài)、革蘭氏染色結(jié)果及生化特性研究結(jié)果，參照《伯杰細(xì)菌鑒定手冊(cè)》[10]、《常見(jiàn)細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)》[11]查詢各細(xì)菌的分類地位。

1.4.4 細(xì)菌及酵母的分子鑒定

1.4.4.1 DNA的提取

細(xì)菌用細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒（離心柱型）提取；酵母菌的基因組DNA用HP Fungal DNA Kit提取。

1.4.4.2 DNA純度及濃度檢測(cè)

采用瓊脂糖凝膠電泳法和紫外分光光度法檢測(cè)。

1.4.4.3 引物設(shè)計(jì)與合成

細(xì)菌：擴(kuò)增引物為細(xì)菌16S rDNA擴(kuò)增通用引物27F-1492R，序列分別為：27F：5’-AGAGTTT GATCCTGGCTCAG-3’，1492R：5’-GGTTACCTTGTT ACGACTT-3’，由北京華大基因研究中心合成。

酵母菌：擴(kuò)增引物為真核生物18S rDNA擴(kuò)增通用引物NS7和NS8，引物序列分別為：NS7：5’-GCAATAACAGGTCTGTGATGC-3’，NS8：5’-TCCGCAGGTTCACCTACGGA-3’，由北京華大基因研究中心合成。

1.4.5 擴(kuò)增反應(yīng)

擴(kuò)增反應(yīng)在梯度PCR儀上進(jìn)行PCR反應(yīng)，細(xì)菌PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系為（25 μL）：10×Buffer緩沖液2.5 μL，10 mmol/L Mg2+1.5 μL，25 mmol/L dNTP 0.5 μL，20 μmol/L PCR引物各0.5 μL，5 U/μL的Taq DNA聚合酶0.25 μL，25 ng/μL的模板DNA各2 μL，無(wú)菌雙蒸水稀釋至25 μL。PCR反應(yīng)條件：94 ℃預(yù)變性5 min，94 ℃變性30 s、55 ℃退火60 s、72 ℃延伸30 s，重復(fù)擴(kuò)增40 個(gè)循環(huán)，72 ℃延伸10 min，4 ℃保存。

酵母菌PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系（20 μL）：超純水13.4 μL，10×PCR緩沖液2 μL，dNTP 0.3 μL，引物各1 μL，Taq酶0.3 μL，模板DNA 2 μL。反應(yīng)條件分別為94 ℃預(yù)變性5 min，94 ℃變性45 s、51 ℃退火1 min、72 ℃延伸2 min，共30 個(gè)循環(huán)，最后72 ℃延伸10 min；4 ℃保存。

1.4.6 擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測(cè)與測(cè)序

反應(yīng)產(chǎn)物檢測(cè)通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳法完成，DNA Marker為2 000 bp DNA Ladder，將擴(kuò)增出的產(chǎn)物的測(cè)序直接交華大基因公司完成。

1.4.7 序列分析

使用軟件D N A M A N 4.0進(jìn)行序列分析；利用CLUSTALX（1.83）對(duì)序列分別進(jìn)行比對(duì)；在CLUSTAL中實(shí)現(xiàn)“掐頭去尾”；在BLAST獲得相似序列。

1.4.8 系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)的構(gòu)建

在GenBank獲得與實(shí)驗(yàn)菌株親緣較近的菌株16S rDNA序列作為參比，用Clustalx1.83進(jìn)行序列比對(duì)，使用MEGA 5.1.2構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌株分離

從漿水中共分離出24 株菌，其中細(xì)菌20 株，真菌4 株。

2.2 各菌株菌落形態(tài)及顯微形態(tài)

表1 細(xì)菌菌落形態(tài)及革蘭氏染色結(jié)果Table1 Colonial morphology and results of Gram staining of the bacteria

細(xì)菌菌落形態(tài)觀察結(jié)果（表1）顯示，本研究所分離的細(xì)菌菌落均為圓形，白色至淡黃色，大多表面光滑，呈現(xiàn)典型的細(xì)菌菌落特征。革蘭氏染色顯微觀察結(jié)果顯示所分離菌大多為桿菌，少數(shù)為球菌。

2.3 生化特性研究

表2 細(xì)菌及酵母菌的生化特性Table2 Biochemical characteristics of the bacteria and the yeast

由表2可知，以接觸酶反應(yīng)，淀粉水解反應(yīng)等10 項(xiàng)指標(biāo)對(duì)所分離微生物進(jìn)行鑒定，其結(jié)果和《伯杰細(xì)菌鑒定手冊(cè)》、《常見(jiàn)細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)》及《酵母菌的特征與鑒定手冊(cè)》中的描述符合性良好，說(shuō)明了本研究實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確，從而保證了鑒定結(jié)果的可靠性。

2.4 基因組DNA濃度和純度分析

圖1 供試細(xì)菌（A）和酵母菌（B）菌株基因組DNA瓊脂糖凝膠電泳圖Fig.1 Electrophoresis of genomic DNA from the experimented strains of bacteria (A) and yeast (B)

如圖1所示，所提取的基因組DNA經(jīng)0.8%的瓊脂糖電泳、凝膠成像系統(tǒng)下觀察，可以清晰地看到基因組DNA大小約為23 kb，且加樣口無(wú)亮光，帶型完整，無(wú)拖尾現(xiàn)象。通過(guò)紫外分光光度計(jì)測(cè)定OD260nm、OD280nm并計(jì)算出OD260nm/OD280nm的值在1.8～2.0，計(jì)算得DNA質(zhì)量濃度為在40～80 ng/L，并結(jié)合電泳圖譜得出所提DNA純度較高，RNA和蛋白質(zhì)含量較少，無(wú)降解。綜上，表明所提DNA完整性好，純度高，符合后續(xù)研究要求。

2.5 擴(kuò)增產(chǎn)物電泳檢測(cè)

圖2 供試細(xì)菌（A）和酵母菌（B）16S rDNA/18S rDNA區(qū)擴(kuò)增產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳圖Fig.2 Electrophoresis of PCR amplified 16S rDNA/18S rDNA of the experimented strains of bacteria (A) and yeast (B)

由圖2可知，通過(guò)選用原核生物通用引物進(jìn)行各細(xì)菌DNA PCR擴(kuò)增反應(yīng)，擴(kuò)增出了菌株的16S rDNA區(qū)序列，目的片段在1 000～2 000 bp之間，與預(yù)期在1 400 bp左右相一致；用真核生物通用引物進(jìn)行酵母DNA PCR擴(kuò)增反應(yīng)，擴(kuò)增出了菌株的18S rDNA區(qū)序列，目的片段在250～500 bp之間，與預(yù)期在350 bp左右相一致；條帶清晰明亮，沒(méi)有出現(xiàn)彌散帶和其他雜帶，完整性較好。

2.6 各菌株的鑒定結(jié)果

2.6.1 絲狀真菌的鑒定結(jié)果

表3 真菌的形態(tài)特征及鑒定結(jié)果Table3 Morphological characteristics and identifications of the fungi

如表3所示，本研究分離出的絲狀真菌種類較少，只有橘青霉和變灰青霉兩種，這兩種菌都常見(jiàn)于一些腐爛的食品，如糧食、肉類、水果、蔬菜等，另外也是紡織物和皮革霉?fàn)€的主要微生物，是工業(yè)、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的主要病害真菌。但近些年來(lái)，這兩種菌也逐漸成為工業(yè)生產(chǎn)中的重要菌種，例如用于核酸酶P1[12]、醛酮氧合酶[13]、脂肪酶[14]、果糖氧化酶[15]的生產(chǎn)等。然而在漿水中出現(xiàn)這兩種菌，會(huì)加速漿水的腐敗變質(zhì)，是一種有害菌，分析其原因可能是菜品選擇不嚴(yán)格造成的，從一個(gè)側(cè)面反映了作坊式生產(chǎn)方式的弊端。

2.6.2 酵母菌的鑒定結(jié)果

結(jié)合形態(tài)鑒定、生理生化鑒定以及分子生物學(xué)鑒定等結(jié)果，菌株FQ4鑒定為釀酒酵母Saccharomyces cerevisiae，和前人研究得出的結(jié)果類似[5,16-17]。釀酒酵母是人類應(yīng)用最早的微生物資源，安全性和其他優(yōu)良特性得到了充分的驗(yàn)證和肯定[18]。漿水中的釀酒酵母可以起到改善漿水風(fēng)味的作用。

2.6.3 細(xì)菌的鑒定結(jié)果

細(xì)菌的生理生化和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)鑒定結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 細(xì)菌的生理生化和分子生物學(xué)鑒定結(jié)果Table4 Identification of the bacteria

圖3 細(xì)菌系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)Fig.3 Phylogenetic tree of the bacteria

由鑒定結(jié)果（表4）可知，本研究所采用的兩種鑒定方法其鑒定結(jié)果吻合良好，二者互相印證，說(shuō)明了鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確。如圖3所示，從系統(tǒng)發(fā)育學(xué)的角度，本研究分離出的16株細(xì)菌的16S rDNA序列與GenBank中序列的自展支持率在98%以上，可以確定為10個(gè)屬。分離到的微生物中，大多都是乳酸菌，如乳酸乳球菌、嗜酸乳桿菌、明串珠菌屬、戊糖乳桿菌、馬里乳桿菌、德氏乳桿菌、發(fā)酵乳桿菌、植物乳桿菌、消化乳桿菌等，大量的研究證據(jù)都顯示這些菌的某些株系在發(fā)酵蔬菜中具有兩個(gè)方面的優(yōu)良性能，一是具有益生功效[19]，如促進(jìn)胃腸道健康、促進(jìn)膽固醇降解、增強(qiáng)免疫力延緩衰老等。二是改善了蔬菜品質(zhì)，如改善蔬菜風(fēng)味[20]、提高蔬菜安全[21-22]、提高蔬菜營(yíng)養(yǎng)價(jià)值[23]等。另一方面，例如戊糖乳桿菌等除了上述兩個(gè)方面的作用外，在一定條件下更能產(chǎn)生戊糖乳桿菌素等細(xì)菌素是良好的生物保鮮劑，其具有抗菌保鮮作用且對(duì)人體無(wú)毒副作用，可以防止?jié){水的霉變腐敗，可改善食品質(zhì)量和食品安全的天然化合物，具有作為食品生物防腐劑的潛在應(yīng)用價(jià)值[24-25]。綜上，由鑒定結(jié)果可以從微生物學(xué)的角度說(shuō)明漿水確實(shí)是一種非常具有開(kāi)發(fā)利用前景的優(yōu)良發(fā)酵蔬菜類食品。

但同時(shí)，由鑒定結(jié)果還可以發(fā)現(xiàn)除益生菌外，漿水中還含有一些有害菌，如霉菌、大腸彎曲桿菌等，這些菌或者影響漿水的貯存，或者危害人類的健康，因此，本課題組應(yīng)該努力避免雜菌的存在。另外，還說(shuō)明漿水在生產(chǎn)過(guò)程中還存在比較嚴(yán)重的問(wèn)題，也反映出傳統(tǒng)的生產(chǎn)方式不利于漿水的產(chǎn)業(yè)化。

3 討 論

本研究的結(jié)果在說(shuō)明漿水具有巨大開(kāi)發(fā)利用前景的同時(shí)，也從一個(gè)側(cè)面反應(yīng)了漿水生產(chǎn)過(guò)程中存在許多問(wèn)題，而這些問(wèn)題歸結(jié)起來(lái)就是生產(chǎn)方式粗放、管理模式落后造成的，而要將漿水做成一個(gè)產(chǎn)業(yè)，則必須要很好的解決這些問(wèn)題，這就要求科研工作者認(rèn)真探索漿水生產(chǎn)的每一個(gè)環(huán)節(jié)，例如優(yōu)良菌種、最佳菜品、最佳工藝等，以菜品選擇為例，傳統(tǒng)漿水發(fā)酵的主要蔬菜是芹菜和圓根菜，然而有研究表明，這兩種菜品并不利于乳桿菌等一些益生菌的生長(zhǎng)，而白蘿卜、黃瓜、山藥、胡蘿卜等一些蔬菜對(duì)益生菌的生長(zhǎng)卻有很好的促進(jìn)作用[26-27]。因此，這就要求在研究是要革新傳統(tǒng)生產(chǎn)方式，這樣才能真正將漿水做大做強(qiáng)。

本研究分離到的細(xì)菌中，有戊糖乳桿菌等產(chǎn)細(xì)菌素的菌株，而近些年來(lái)的研究提示，細(xì)菌素可以作為生物保鮮劑[28-29]，這一特性正好彌補(bǔ)了化學(xué)保險(xiǎn)劑會(huì)引起食品安全問(wèn)題的缺點(diǎn)。產(chǎn)細(xì)菌素的益生菌可以制成生物保鮮菌劑，將之運(yùn)用于蔬菜的加工，可以有效提高原材料、生產(chǎn)過(guò)程及產(chǎn)品的安全性，延長(zhǎng)發(fā)酵蔬菜產(chǎn)品的貨架期，同時(shí)還避免了化學(xué)添加劑。符合人民群眾對(duì)健康食品的需求。是改善發(fā)酵食品質(zhì)量、提高安全性的重要手段和研究方向[30]。

另外，在漿水生產(chǎn)工藝方面，還可以借鑒其他發(fā)酵蔬菜制品的先進(jìn)經(jīng)驗(yàn)以提高高其質(zhì)量，例如近年來(lái)發(fā)展的低溫發(fā)酵技術(shù)[31]、原材料超高壓滅菌技術(shù)[32-33]、產(chǎn)品熱處理技術(shù)[34]等，唯有廣泛吸收先進(jìn)經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，用于實(shí)踐和探索，漿水才能真正走出西北、走向全國(guó)乃至全世界，形成產(chǎn)業(yè)優(yōu)勢(shì)。

4 結(jié) 論

由研究結(jié)果可以看出，實(shí)驗(yàn)所用漿水樣本中存在多種微生物，囊括細(xì)菌、酵母以及絲狀真菌，相對(duì)而言以細(xì)菌為主體，且其大多為乳桿菌屬或乳球菌屬，另外還含有能改善發(fā)酵風(fēng)味的釀酒酵母。從微生物學(xué)的角度是一種非常具有開(kāi)發(fā)利用潛力的優(yōu)良發(fā)酵蔬菜類食品；但另一方面，研究發(fā)現(xiàn)漿水中還存在霉菌和腸道菌等有害菌的污染，不利于漿水的發(fā)酵和保存，分析其原因主要是由漿水制作中的不規(guī)范造成的，也說(shuō)明進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化生產(chǎn)的必要性。

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Isolation and Identification of Microorganisms from Jiangshui, a Traditional Chinese Fermented Vegetable Product

LI Xue-ping, LI Jian-hong, MENG Xian-gang*, ZHENG Nan, XIE Jia-jia
(School of Chemical and Biological Engineering, Lanzhou Jiaotong University, Lanzhou 730070, China)

In this study, 24 strains were isolated from Jiangshui, a traditional Chinese fermented celery product, and purified by various culture medium plates, including 20 strains of bacteria, 3 strains of filamentous fungi, and 1 strain of yeast. The purified strains were analyzed through morphological, Gram staining, biochemical characteristics and molecular biology identification. The results showed that various microorganisms existed in Jiangshui, and the bacteria mainly belonged to the genera Lactobacillus or Bifidobacterium. The yeast was Saccharomyces cerevisiae, and the filamentous fungi were Penicillium canescens and Penicillium citrinum. These results illustrate that the composition of microorganisms is excellent, with a good potential for development and utilization. But there are also some miscellaneous bacteria and harmful bacteria, which should be taken seriously in production.

Jiangshui; microorganism; isolation; identification

TS201.3

A

1002-6630（2014）23-0204-06

10.7506/spkx1002-6630-201423040

2014-01-05

2012甘肅省財(cái)政廳生物專項(xiàng)（213001）；2011甘肅省財(cái)政廳高等學(xué)?；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)項(xiàng)目（211135）

李雪萍（1989—），女，碩士研究生，研究方向?yàn)槭称肺⑸飳W(xué)。E-mail：lixueping0322@126.com

*通信作者：孟憲剛（1974—），男，教授，博士，研究方向?yàn)槭称钒l(fā)酵工程 。E-mail：mengxg@mail.lzjtu.cn