劉艷華綜述,王小中審校

(南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科,江西南昌330046)

.綜述.

外泌體在疾病診療中的研究進(jìn)展

劉艷華綜述,王小中審校

(南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科,江西南昌330046)

外泌體是多種細(xì)胞主動分泌的直徑為40~100 nm的囊泡,這些成分可以從多種體液中分離.外泌體含有蛋白質(zhì), mRNA,miRNAs等信號分子,它們反映分泌細(xì)胞的生理狀態(tài)和功能狀態(tài),從而提供了豐富的潛在的生物標(biāo)志物分子源.除了用于疾病診斷外,外泌體還具有抗腫瘤免疫,誘導(dǎo)腫瘤免疫逃逸、促進(jìn)腫瘤血管新生和腫瘤轉(zhuǎn)移等生理功能.本文主要對外泌體在疾病診療中的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述.

外泌體;生物標(biāo)志物;MicroRNA;診斷;治療

外泌體(Exosomes)是一種細(xì)胞主動分泌的大小均一,直徑為40~100nm的脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)囊泡,可由樹突細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、血小板、肥大細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞等不同細(xì)胞類型脫落釋放,在大多數(shù)體液如外周血、尿液、唾液、腹水、羊水、乳汁、腦脊液、關(guān)節(jié)液、支氣管肺泡灌洗液等體液中可檢測到[1].透射電子顯微鏡下外泌體觀察常為杯狀,但是在體液中通常為球形結(jié)構(gòu),在蔗糖溶液中的密度為1.13~ 1.19g/ml,其密度與細(xì)胞來源相關(guān),并隨蛋白含量而改變[2].不少實(shí)驗(yàn)證明外泌體可攜帶多種蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、mRNA、miRNA,參與細(xì)胞通訊、細(xì)胞遷移、血管新生、免疫反應(yīng)和腫瘤細(xì)胞生長等過程.然而,外泌體的發(fā)現(xiàn)雖有30多年歷史,但其在疾病診療方面的研究還處在初級階段.

1 外泌體的起源、結(jié)構(gòu)及其生物學(xué)特性

1985年P(guān)an等[3]通過電鏡發(fā)現(xiàn),在網(wǎng)織紅細(xì)胞向成熟紅細(xì)胞發(fā)育過程中,晚期胞內(nèi)體可與細(xì)胞膜相融合釋放其中大量的亞細(xì)胞囊泡結(jié)構(gòu),由于外泌體含有大量特異性的蛋白質(zhì)及功能性的mRNAs、miRNAs,是細(xì)胞積極分泌的結(jié)構(gòu),與凋亡細(xì)胞分泌的小泡有著本質(zhì)區(qū)別.外泌體的質(zhì)膜含有豐富的膽固醇、鞘磷脂、神經(jīng)酰胺、脂筏及磷脂酰絲氨酸.外泌體也含有與其來源細(xì)胞相類似的細(xì)胞因子、生長因子等蛋白質(zhì),以及脂質(zhì)、編碼或非編碼RNA等生物活性物質(zhì),在細(xì)胞之間物質(zhì)交換過程中具有重要作用.

幾乎所有的外泌體都有微管蛋白、肌動蛋白結(jié)合蛋白、四跨膜蛋白.不同細(xì)胞來源的外泌體蛋白組成存在差異,但它們有著共同的蛋白質(zhì)組分,包括膜轉(zhuǎn)運(yùn)和融合相關(guān)蛋白(Rab GTPases,Annexins,Flotillin等)、多囊泡胞內(nèi)體產(chǎn)生相關(guān)蛋白(Alix, TSG101等)、分子伴侶(HSP70,HSP90)、整合素和四跨膜蛋白超家族(CD63,CD9,CD81,CD82等),這些成分反映了其生物起源[4,5].外泌體可通過受體依賴性調(diào)控機(jī)制直接刺激受體細(xì)胞,也可通過轉(zhuǎn)運(yùn)質(zhì)膜受體、功能性蛋白、mRNA、miRNA和細(xì)胞器調(diào)控受體細(xì)胞[6].同時,外泌體可攜帶多種反映細(xì)胞來源的組織/細(xì)胞類型特異性蛋白,其蛋白成分也隨來源細(xì)胞的不同而存在差異,如抗原提呈細(xì)胞分泌的外泌體質(zhì)膜上含有MHC-I和MHC-Π共刺激蛋白CD80和CD86;來源于血小板的外泌體質(zhì)膜上有血管性血友病因子和整合蛋白CD41a;T淋巴細(xì)胞分泌的外泌體表面含有穿孔蛋白和顆粒酶.外泌體中含有各種mRNA、miRNA及siRNA等,mRNA可以在受體細(xì)胞中翻譯出相應(yīng)的蛋白質(zhì),miRNA通過降解或者抑制mRNA的翻譯來調(diào)控蛋白質(zhì)在目標(biāo)細(xì)胞中的表達(dá),siRNA可以敲除受體細(xì)胞中的目標(biāo)基因達(dá)到基因沉默的作用[7].

微泡(Microvesicles)是廣泛存在于正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的胞外細(xì)胞器樣結(jié)構(gòu),能運(yùn)載多種特異性蛋白、微小RNA及DNA片段,在細(xì)胞間物質(zhì)和信息轉(zhuǎn)導(dǎo)中起重要作用.微泡可能含有多種亞型,包括外泌體、脫落小泡(shedding vesicles,SV)、分泌性微泡、膜顆粒及外泌體樣小泡等,這些命名是否存在概念的重合尚不明確.外泌體是細(xì)胞經(jīng)過"內(nèi)吞-融合-外排"等一系列調(diào)控過程而形成的細(xì)胞外納米級小囊泡,其膜上含有GPI鉚定蛋白、CD63、TNFR1,其分泌主要依靠轉(zhuǎn)運(yùn)必需內(nèi)吞體分選復(fù)合物,多數(shù)為持續(xù)性釋放.然而,SV一般大于200nm,甚至超過1μm,無規(guī)則形狀,含有收縮蛋白、金屬蛋白酶及整合素,脂類成分以膽固醇為主,一般不會持續(xù)釋放[8].

2 外泌體的提取和鑒定

外泌體提取的方法有離心法、過濾離心法、密度梯度離心法、免疫磁珠法和色譜法等[9],但沒有一種方法能同時保證外泌體的含量、純度、生物活性.離心法是外泌體提取常用的方法,得到的外泌體量多,但是純度不足,而且這種物理作用可導(dǎo)致外泌體結(jié)構(gòu)及大小的改變.過濾離心法是利用不同截留相對分子質(zhì)量(MWCO)的超濾膜離心分離外泌體,這種操作簡單、省時,不影響外泌體的生物活性,但分離的外泌體純度也不足.外泌體目前廣泛應(yīng)用的提取方法是蔗糖密度梯度超速離心法,通過逐步去除細(xì)胞、細(xì)胞碎片,在高達(dá)100 000g離心力的情況下得到富含外泌體的沉積物,在蔗糖梯度液中將其中含有與外泌體非特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)聚集物等雜質(zhì)超速離心進(jìn)行進(jìn)一步的純化.此種方法分離得到的外泌體純度高,但前期準(zhǔn)備工作繁雜,耗時,量少.免疫磁珠法是利用包被有單克隆抗體的球型磁性微粒特異性結(jié)合靶物質(zhì)得以分離外泌體,這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整,特異性高、操作簡單、不需要昂貴的儀器設(shè)備,但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體的生物活性,不便進(jìn)行下一步的實(shí)驗(yàn).另外,根據(jù)凝膠孔隙的孔徑大小與樣品分子尺寸的相對關(guān)系,利用色譜法也可對外泌體進(jìn)行分離,此法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,純度高,但需要特殊的設(shè)備,應(yīng)用不廣泛.

外泌體是細(xì)胞內(nèi)內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成多囊泡體,并在刺激作用下多囊泡體與細(xì)胞膜融合向胞外分泌的大小均一,直徑為40~100nm的囊泡,可以通過電鏡進(jìn)行觀察;外泌體的特異性蛋白包括Alix、Flotillin-1、Lamp-1、Lamp-2、CD63和CD9等[10],可通過免疫印跡分析以及流式細(xì)胞儀進(jìn)行鑒定.目前的實(shí)驗(yàn)技術(shù)主要依靠離心速率法來分離各類微泡,但物理作用能導(dǎo)致微泡結(jié)構(gòu)及大小的改變,流式細(xì)胞儀可以同時檢測物質(zhì)的大小和密度,但300nm以下的囊泡無法被測到.微泡沒有獨(dú)特的表面標(biāo)志物,其膜脂質(zhì)成分、蛋白組成、密度也還需進(jìn)一步檢測.

3 外泌體在疾病診斷的研究進(jìn)展

在疾病診斷方面,外泌體含有蛋白質(zhì),mRNA, miRNAs等信號分子,它們反映分泌細(xì)胞的生理狀態(tài)和功能狀態(tài),甚至還會包含細(xì)胞病態(tài)相關(guān)的分子信息,從而提供了豐富的潛在的生物標(biāo)志物分子源.臨床研究已發(fā)現(xiàn),不同疾病的不同類型細(xì)胞都能分泌含有RNAs的外泌體,這使得從人體體液中純化外泌體,再對其RNA成分及序列分析成為可能,有望用于疾病診斷及監(jiān)測,尤其在腫瘤標(biāo)志物檢測方面.外泌體作為生物標(biāo)志物雖然還處于起步階段,但隨著進(jìn)一步的研究,外泌體的臨床應(yīng)用可能會有良好的前景.

3.1 外泌體在腫瘤疾病診斷中的應(yīng)用腫瘤是威脅人類健康和生存最主要的疾病之一,惡性腫瘤發(fā)病率和死亡率日趨增高,給社會和家庭帶來沉重的經(jīng)濟(jì)和疾病負(fù)擔(dān).腫瘤在生長過程中會不斷地將外泌體釋放到周圍環(huán)境中,外泌體含有miRNA,因此檢測體液中的外泌體及外泌體RNA有助于腫瘤診斷和預(yù)后判斷,Rosell等[11]對非小細(xì)胞肺癌的相關(guān)研究得出了相似的結(jié)果.miRNA不僅是遺傳信息的內(nèi)源性調(diào)控者,也是調(diào)節(jié)細(xì)胞通訊的分泌因子及疾病的生物標(biāo)志物.miRNA作為一種在某些腫瘤中可能出現(xiàn)異常表達(dá)的非編碼的RNAs,可以作為腫瘤診斷和預(yù)后判斷的生物標(biāo)志物[12].Taylor等[13]發(fā)現(xiàn)卵巢癌患者與正常人血液中外泌體的miRNA圖譜有明顯的差異,說明外泌體有助于卵巢癌的診斷;并且還發(fā)現(xiàn)從血清中分離出的腫瘤來源外泌體中的miRNA與卵巢癌組織中提取出的miRNA具有很好的相關(guān)性,以及患者組與正常對照組的miRNA圖譜分析結(jié)果也顯示出明顯的差異.卵巢癌患者血清中的外泌體有8種miRNA顯著增加[13],另外,也有研究[14]發(fā)現(xiàn)卵巢癌患者的腹水和血清中可檢測到蛋白CD24和EpCAM的表達(dá).

2008年Mitchell等[15]發(fā)現(xiàn)miR-141是前列腺癌的一個可靠的診斷標(biāo)志物,且有研究[16]證明血清miR-141與miR-375水平與前列腺癌的腫瘤進(jìn)展相關(guān).Nilsson等[17]發(fā)現(xiàn)在前列腺癌患者尿中的外泌體有蛋白標(biāo)記物5T4,前列腺癌基因-3(PCA-3)和mRNA(TMPRSS2-ERG)的表達(dá)存在,在前列腺癌患者尿外泌體中也檢測到PSA和PSMA的表達(dá),但它們在尿中表現(xiàn)出了極大的變異.另外,前列腺癌患者的尿中也有miR-107和miR-574-3p上調(diào)的實(shí)驗(yàn)研究[18],血漿中的外泌體均有存活素(Survivin),前列腺癌存活素的表達(dá)與健康者和良性前列腺增生相比上調(diào)了.經(jīng)免疫印跡法和流式細(xì)胞儀分析[19],膀胱腫瘤細(xì)胞來源的外泌體在膀胱腫瘤中可能檢測到蛋白質(zhì)的陽性表達(dá),其中重要的有外泌體中CD36,CD44的表達(dá)在健康和疾病狀態(tài)有明顯的差別.

CA19-9仍然是胰腺癌最可靠的診斷血清標(biāo)記物,但可結(jié)合其他診斷工具,如胰腺癌患者血清miRNA可鑒別疾病是良惡性腫瘤還是炎癥[14], Wang等研究[20]證實(shí)了胰腺癌血清中外泌體攜帶胰腺癌干細(xì)胞標(biāo)記物.另外,外泌體miRNA也可作為肺癌的診斷標(biāo)志物[21].Logozzi等[22]發(fā)現(xiàn)血漿外泌體中CD63+可作為黑色素瘤的蛋白標(biāo)志物.膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者血清中可檢測到腫瘤特異性的表皮生長因子受體(EGFRⅧ)[23],血清miR-21在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤體中增加了40倍.

可見,臨床分析證明外泌體對實(shí)體腫瘤如卵巢癌、前列腺癌、膀胱癌、胰腺癌、肺癌等有一定的作用,外泌體miRNA的數(shù)量可能與腫瘤的大小變化有關(guān),腫瘤患者血清的外泌體數(shù)量可能也與腫瘤的分期、分級相關(guān).靶向癌癥的外泌體的標(biāo)志物可能為腫瘤疾病的診斷和治療提供新的指標(biāo)和途徑,對腫瘤高危人群早期診斷和早期治療以降低或減緩腫瘤病例的發(fā)生發(fā)揮重要的作用.

3.2 外泌體在非腫瘤疾病診斷中的應(yīng)用在過去幾年,外泌體在腎臟疾病的研究越來越受到關(guān)注.尿中發(fā)現(xiàn)外泌體意義很大,尿樣標(biāo)本外泌體蛋白圖譜分析可能具有相當(dāng)重要的診斷提示作用.尿蛋白組學(xué)檢查,包括游離蛋白和外泌體蛋白圖譜檢查,可以為多種疾病的診斷和鑒定提供了尿樣標(biāo)本生物標(biāo)志物.研究人員發(fā)現(xiàn)[24]尿外泌體中的胎球蛋白-A在嚙齒類動物的腎毒性暴露后幾個小時內(nèi)就升高了50倍,且在觀察尿肌酐的變化之前胎球蛋白-A在急性腎損傷患者已明顯升高.最近的一項(xiàng)研究[25]顯示,相比局灶節(jié)段性腎小球硬化患者,微小腎臟病變患者糖蛋白B7-1在尿沉渣中mRNA比值增加了.也有研究[26]發(fā)現(xiàn)尿顆粒酶mRNA水平可能區(qū)分細(xì)胞排斥反應(yīng)與急性腎損傷患者.

外泌體的分離可能會提高尿mRNA分析的靈敏度和精確度.研究發(fā)現(xiàn)[27]IgA腎病患者尿中幾種miRNAs(miR-200a,miR-200b和miR-429)豐度的減少了,并且其減少的程度與疾病的嚴(yán)重程度相關(guān).尿中外泌體和外泌體miRNA以及其定量PCR準(zhǔn)確檢測的穩(wěn)定性,進(jìn)一步支持其成為在腎臟病中潛在的非侵入性的生物標(biāo)志物.分析尿樣本中外泌體的蛋白圖譜還可能協(xié)助腎臟疾病的診斷(表1)[28].

表1 與腎疾病相關(guān)的尿液外泌體蛋白質(zhì)

目前研究發(fā)現(xiàn)羊水和乳汁等體液中檢測到的外泌體也發(fā)揮一定的作用.Ke11er等[29]通過RTPCR分析羊水中的外泌體,發(fā)現(xiàn)外泌體存在編碼ZFY(人類Y染色體的性別決定區(qū)編碼一種鋅指蛋白)的mRNA,可用于胎兒性別的判斷.人乳汁提取的外泌體中含有59種與免疫功能相關(guān)的microRNA,占已經(jīng)確定的免疫功能相關(guān)microRNA總量的67%[30].Welker等[31]研究表明血清外泌體中CD81在慢性丙型肝炎患者中表達(dá)升高,并且其與炎癥纖維化的嚴(yán)重程度相關(guān),提示外泌體CD81可能是丙型肝炎診斷一個潛在的蛋白標(biāo)志物.外泌體還可以運(yùn)載很多與神經(jīng)系統(tǒng)疾病相關(guān)的microRNA成分(表2)[32].

表2 神經(jīng)系統(tǒng)疾病相關(guān)microRNA在外泌體中的分布

總之,外泌體可以作為蛋白質(zhì)和RNA的生物標(biāo)志物的來源.外泌體存在于許多體液中,如血清、尿液、唾液、腹水、羊水、乳汁等,獲取方便,由于其標(biāo)記蛋白以及miRNA的選擇性富集,使外泌體成為一種非常有吸引力的非侵入性的疾病診斷手段.

4 外泌體在疾病治療的研究進(jìn)展

4.1 外泌體在腫瘤疾病治療中的研究進(jìn)展外泌體作為一種新型的非細(xì)胞腫瘤疫苗,國內(nèi)外學(xué)者進(jìn)行了大量的相關(guān)研究.自從1998年Ziwogel等[33]首先使用樹突狀細(xì)胞來源的外泌體(Dexo)作為腫瘤疫苗,在動物模型中應(yīng)用負(fù)載腫瘤抗原的Dexo使荷瘤小鼠腫瘤得以消退后,樹突狀細(xì)胞來源的外泌體(Dexo)和腫瘤細(xì)胞來源的外泌體(Texo)的抗腫瘤免疫作用得到了深入的研究,其中部分研究已進(jìn)入I期臨床試驗(yàn)階段.前者主要通過刺激T細(xì)胞的體外增殖分化來誘導(dǎo)體內(nèi)的抗腫瘤免疫效應(yīng),后者通過抗原提呈細(xì)胞交叉呈遞給細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL),使其產(chǎn)生腫瘤殺傷作用.研究[34]顯示,從骨髓瘤細(xì)胞系J558分離的Texo表達(dá)P1A腫瘤抗原,能夠誘導(dǎo)抗J558腫瘤作用,使得80%的免疫小鼠獲得抗腫瘤免疫保護(hù),同樣自體及異基因含有MUC1腫瘤抗原的Texo,能誘導(dǎo)CTL效應(yīng)并能抑制表達(dá)MUC1腫瘤細(xì)胞的生長.王麗英等[35]利用負(fù)載乳腺癌抗原臍血Dexo,促進(jìn)同種異體T細(xì)胞增殖,并能誘導(dǎo)特異性抗乳腺癌的免疫效應(yīng).陳紹倩等[36]研究表明人白血病細(xì)胞株K562細(xì)胞分泌的外泌體及K562細(xì)胞總RNA刺激人Dexo能夠誘導(dǎo)出K562細(xì)胞特異性CTL效應(yīng),發(fā)揮特異性抗白血病細(xì)胞的免疫反應(yīng).

目前有大量研究表明外泌體具有抗腫瘤免疫的作用,但外泌體在腫瘤免疫逃逸中作用的研究也比較多.有研究報(bào)道,腫瘤細(xì)胞來源的外泌體可以通過表達(dá)FasL來誘導(dǎo)CD8+T細(xì)胞凋亡,導(dǎo)致腫瘤的免疫逃逸.Clayton等[37]的一項(xiàng)研究表明,外泌體可以選擇性地抑制白細(xì)胞介素-2(IL-2)的功能,使其只發(fā)揮促進(jìn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的作用,而不表現(xiàn)其促進(jìn)CTL的增殖和分化的功能.外泌體也可能誘導(dǎo)腫瘤血管新生并促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移.有研究[38]顯示,腫瘤實(shí)體來源的外泌體在中低劑量時表現(xiàn)出對腫瘤細(xì)胞的促增殖作用,在高劑量時則表現(xiàn)為抑制增殖作用.

4.2 外泌體在非腫瘤疾病應(yīng)用的研究進(jìn)展外泌體在自身免疫性疾病和缺血性疾病治療方面,都取得一定的研究進(jìn)展.未成熟的樹突細(xì)胞通過免疫抑制因子修飾后,可以分泌具有抑制自身免疫的外泌體,機(jī)體注射外泌體后可減輕炎癥性腸病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等疾病[39].研究[40]發(fā)現(xiàn)人CD34+造血干細(xì)胞可以分泌具有促血管形成作用的外泌體,對缺血性疾病具有改善作用.2011年Alvarez等[41]首次成功利用外泌體治療了鼠的阿爾茨海默病模型,顯著下調(diào)了阿爾茨海默病相關(guān)蛋白的表達(dá)(蛋白下降62%),減少了B淀粉的沉積.相關(guān)研究[42]已證實(shí)來源于胚胎干細(xì)胞(ESCs)和某些成體干細(xì)胞的外泌體可以改變受體細(xì)胞的生理功能,從而保護(hù)急性損傷的心臟、肝臟和腎臟;與干細(xì)胞的移植治療相比,外泌體可以避免細(xì)胞移植引起的長期異常分化和腫瘤形成,因此通過干細(xì)胞來源的外泌體進(jìn)行調(diào)控血管生成和促進(jìn)損傷細(xì)胞修復(fù)有望成為組織損傷修復(fù)的治療新策略.外泌體包含多種蛋白質(zhì)和遺傳物質(zhì),表明蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)可以裝載到外泌體上.外泌體可穿透細(xì)胞膜釋放mRNA到靶細(xì)胞,使受體細(xì)胞翻譯轉(zhuǎn)染mRNA,并且外泌體廣泛分布于不同體液,在體內(nèi)有較長的半衰期,因此,利用電穿孔或脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的方式直接把藥物轉(zhuǎn)入外泌體或者將編碼興趣蛋白質(zhì)的基因轉(zhuǎn)入分泌外泌體的細(xì)胞,外泌體也可能成為一種理想的藥物載體[43].

5 展望

長期以來,針對外泌體的研究大多集中于研制安全而有效的非細(xì)胞腫瘤疫苗.該疫苗表達(dá)特異的腫瘤抗體能刺激免疫系統(tǒng)抑制腫瘤生長,但該疫苗發(fā)展的瓶頸在于制備時必須使用已接受過治療的患者的DC細(xì)胞,同時外泌體所負(fù)載的抗原大量變異,廣譜性不高.然而,外泌體作為疾病診斷的生物標(biāo)志物,目前的研究還不多.外泌體包含多種蛋白質(zhì)和遺傳物質(zhì),并且廣泛分布于不同體液中,在體內(nèi)有較長的半衰期,所以,外泌體可作為一種無創(chuàng)或微創(chuàng)的非侵入疾病診斷手段,一定條件下能夠代替組織活檢減輕患者的痛苦,提高疾病早期診斷率.因此,如何在各種體液中檢測到針對疾病特異性的外泌體生物標(biāo)志物將是值得努力探索的目標(biāo)之一.

[1]Simons M,Rapose G.Exosmes-vesicular carriers for intercellular communication[J].Curr Opin Cell Biol,2009,21(4):575-581.

[2]Mathivanan S,Simpson RJ.ExoCarta:A compendium of exosomal proteins and RNA[J].Proteomics,2009,9(21):4997-5000.

[3]Pan BT,Teng K,Wu C,et al.Electron microscopic evidence for externalization of the transferring receptor in vesicular form in sheep reticulocytes[J].J Cell Biol,1985,101(3):942-948.

[4]Aliotta JM.Tumor exosomes:a novel biomarker?[J].J Gastrointest Oneol,2011,2(4):203-205.

[5]Petersen S H,Odintsova E,Haigh T A,et a1.The role of tetraspanin CD63 in antigen presentation via MHC class II[J].Eur J Immunol,2011,41(9):2556-2561.

[6]Tetta C,Bruno S,Fonsato V,et a1.The role of microvesieles in tissue repair[J].Organogenesis,2011,7(2):105-115.

[7]Lasser C,Eldh M,Lotvall J.Isolation and characterization of RNA-containing exsomes[J].J Vis Exp,2012,(59):e3037.

[8]Cocucci E,Racchetti G,Meldolesi J,et al.Shedding microvesicles: artefacts no more[J].Trends Cell Biol,2009,19(2):43-51.

[9]盧婉,楊人強(qiáng),王伶.外泌體的研究進(jìn)展[J].生命的化學(xué),2013,33(4): 438-442.

[10]The'ry C,Amigorena S,Raposo G,et a1.Isolation and characterization of exosomes from cell culture supernatants and biological fluids[J].Curr Proto Cell Bio1,2006,3(3):22.

[11]Rosell R,Wei J,Taron M.Circulating microRNA signatures of tumor-derived exosomes for early diagnosis of non-small-cell lung cancer[J].Clin Lung Cancer,2009,10(1):8-9.

[12]Lu J,Getz G,Miska EA,et a1.MicroRNA expression profiles cIassify human cancers[J].Nature,2005,435(7043):834-838.

[13]Taylor DD,Gercel-Taylor C.MicroRNA signatures of tumorderived exosomes as diagnostic biomarkers of ovarian cancer[J]. Gynecol Oncol,2008,110(1):13-21.

[15]Mitchell PS,Parkin RK,Kroh EM,et al.Circulating microRNAs as stable blood-based markers for cancer detection[J].Proc Natl Acad Sci USA,2008,105(30):10513-10518.

[16]Brase JC,Johannes M,Schlomm T,et al.Circulating miRNAs are correlated with tumor progression in prostate cancer[J].Int J Cancer,2011,128(3):608-616.

[17]Nilsson J,Skog J,Nordstrand A,et al.Prostate cancer-derived urine exosomes:a novel approach to biomarkers for prostate cancer [J].Br J Cancer,2009,100(10):1603-1607.

[18]Bryant RJ,Pawlowski T,Catto JW,et al.Changes in circulating microRNA levels associated with prostate cancer[J].Br J Cancer, 2012,106(4):768-774.

[19]Welton JL,Khanna S,Giles PJ,et al.Proteomics analysis of bladder cancer exosomes[J].Mol Cell Proteomics,2010,9(6):1324-1338.

[20]Wang H,Rana S,Giese N,et al.Tspan8,CD44v6 and α6β4 are biomarkers of migrating pancreatic cancer-initiating cells[J].Int J Cancer,2013,133(2):416-426.

[21]Rabinowits G,Gercel-Taylor C,Day JM,et al.Exosomal microRNA:a diagnostic marker for lung cancer[J].Clin Lung Cancer,2009 (1),10:42-46.

[22]Logozzi M,De Milito A,Lugini L,et al.High levels of exosomes expressing CD63 and caveolin-1 in plasma of melanoma patients [J].PLoS One,2009,4(4):e5219. [23]Skog JT,Van Rijn S,et al.Glioblastoma microvesicles transport RNA and Proteins that promote tumour growth and provide diagnostic biomarkers[J].Nat Cell Biol,2008,10(12):1470-1476.

[24]Zhou H,Pisitkun T,Aponte A,et al.Exosomal Fetuin-A identified by proteomics:a novel urinary biomarker for detecting acute kidney injury[J].Kidney Int,2006,70(10):1847-1857.

[25]Navarro-Munoz M,Ibernon M,Perez V,et al.Messenger RNA expression of B7-1 and NPHS1 in urinary sediment could be useful to differentiate between minimal change disease and focal segmental glomerulosclerosis in adult patients[J].Nephrol Dial Transplant,2011,26(12):3914-23.

[26]van Ham SM,Heutinck KM,Jorritsma T,et al.Urinary granzyme A mRNA is a biomarker to diagnose subclinical and acute cellular rejection in kidney transplant recipients[J].Kidney Int,2010,78(10): 1033-1040.

[27]Wang G,Kwan BC,Lai FM,et al.Expression of microRNAs in the urinary sediment of patients with IgA nephropathy[J].Dis Markers,2010,28(2):79-86.

[28]PisitkunT,JohnstoneR,KnepperMA.Discoveryofurinary biomarkers[J].Mol Cell Proteomies,2006,5(10):1760-1771.

[29]Keller S,Ridinger J,Rupp AK,et a1.Body fluid derived exosomes as a novel template for clinical diagnostics[J].Transl Med,2011,9: 86.

[30]Zhou Q,Li MZ,Wang XY,et a1.Immune-related microRNAs are abundant in breast milk exosomes[J].Int J Biol Sci,2012,8(1):118-123.

[31]Welker MW,Reichert D,Susser S,et al.Soluble serum CD81 is elevated in patients with chronic hepatitis C and correlates with alanine aminotransferase serum activity[J].PloS One,2012,7(2): e30796.

[32]Bian S,Sun T.Functions of noncoding RNAs in neural development and neurological disease[J].Mol Neurobiol,2011,44(3):359-373.

[33]Zitvogel L,Regnault A,Lozier A,et a1.Eradication of established murine tumors using a novel cell-free vaccine:dendritic cell derived exosomes[J].Nat Med,1998,4(5):594-600.

[34]Hao S,Moyana T,Xiang J.Review:cancer immunotherapy by exosome-based vaccines[J].Cancer Biother Radiopharm,2007,22(5): 692-703.

[35]王英麗,張陽,徐廣偉,等.負(fù)載乳腺癌抗原的臍血樹突細(xì)胞外泌體抗腫瘤免疫作用[J].中國婦幼保健,2013,28(17):2274-2276.

[36]陳邵倩,杜英,王鑫,等.K562細(xì)胞外泌體誘導(dǎo)特異性CTL生成的研究[J].中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志,2006,14(6):1168-1171.

[37]Clayton A,Mitchell JP,Court J,et al.Human tumor-derived exosomes selectively impair iymphocyte responses to interleukin-2[J]. Cancer Res,2007,67(15):7458-7466.

[38]楊子楠,魏繼武.外泌體在腫瘤發(fā)展中的研究進(jìn)展[J].腫瘤, 2011,31(6):565-569.

[39]Bianco NR,Kim SH,Ruffiaer MA,et a1.Therapeutic effect of exosomes from indoleamine 2,3-dioxygenase-positive dendritic cells in collagen-induced arthritis and delayed-type hypersensitivity disease models[J].Arthritis Rheum,2009,60(2):380-389.

[40]Sahoo S,Klychko E,Thome T,et al.Exosomes from human CD34+stem cells mediate their proangiogenic paracrine activity[J].Circ Res,2011,109(7):724-728.

[41]Alvarez-Erviti L,Seow Y,Yin H,et a1.Delivery of siRNA to the mouse brain by systemic injection of targeted exosomes[J].Nat Biotcchnol,2011,29(4):341-345.

[42]胡國文,汪泱,沈曉黎,等.外泌體及其在干細(xì)胞中的研究進(jìn)展[J].上海交通大學(xué)學(xué)報(bào),2013,33(6):868-873.

[43]Lai RC,Yeo RW,Tan KH,et al.Exosomes for drug delivery-a novel application for the mesenchymal stem cel1[J].Biotechnol Adv,2013,31(5):543-551.

R730.5,R730.23

A

1674-1129(2014)03-0267-05

10.3969/j.issn.1674-1129.2014.03.012

2014-02-18;

2014-04-02)

國家自然科學(xué)基金(No.81360083)

劉艷華,女,1988年出生,規(guī)范化培訓(xùn)學(xué)員,主要研究方向?yàn)?臨床檢驗(yàn)診斷.

王小中,男,出生于1973年,教授,主要研究方向?yàn)檠翰》肿訖C(jī)制及診斷.