章小雨綜述,戴曉愛(ài)審校

(縉云縣疾病預(yù)防控制中心檢驗(yàn)科,浙江縉云321400)

免疫膠體金技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用與進(jìn)展

章小雨綜述,戴曉愛(ài)審校

(縉云縣疾病預(yù)防控制中心檢驗(yàn)科,浙江縉云321400)

免疫膠體金技術(shù)是一種以膠體金作為示蹤標(biāo)志物的固相標(biāo)記新型免疫檢測(cè)技術(shù),因其具有快速、簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn),在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)的定性或定量檢測(cè)中得到了日益廣泛的應(yīng)用.本文從免疫膠體金檢測(cè)技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用進(jìn)展作一簡(jiǎn)要綜述.

免疫膠體金;檢測(cè)技術(shù);醫(yī)學(xué)檢驗(yàn);應(yīng)用進(jìn)展

膠體金也稱(chēng)金溶膠,是由氯金酸在還原劑的作用下,形成的金顆粒懸液,具有膠體性、光吸收性及呈色性.免疫膠體金技術(shù)是一種以膠體金為示蹤標(biāo)記物,以硝酸纖維素膜為固相載體,利用濾膜的微孔濾過(guò)性,通過(guò)毛細(xì)管作用使含金標(biāo)記的抗原或抗體與特異性配體在膜上形成結(jié)合物,得到呈色的陽(yáng)性信號(hào),因而可用于抗原、抗體的定性、定量測(cè)定.膠體金最早由法拉第發(fā)現(xiàn)于1857年,直到上世紀(jì)七十年代才開(kāi)始將膠體金引入免疫化學(xué)領(lǐng)域,建立起一種抗原抗體檢測(cè)方法.目前,在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域中,免疫膠體金定性檢測(cè)技術(shù)得到快速發(fā)展,半定量、定量方法也已日趨成熟.現(xiàn)就免疫膠體金檢測(cè)技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用進(jìn)展作一簡(jiǎn)要綜述.

1 定性檢測(cè)法

免疫膠體金定性檢測(cè)法主要有斑點(diǎn)免疫金滲濾法(DIGFA)和膠體金免疫層析法(GICA).二種方法都具有檢測(cè)快速、簡(jiǎn)單、特異性強(qiáng)、靈敏度高、抗基質(zhì)干擾強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn),因此是一種適合基層現(xiàn)場(chǎng)篩查的快速檢測(cè)方法[1].

1.1 斑點(diǎn)免疫金滲濾法免疫金滲濾技術(shù)在上世紀(jì)80年代中期從固相酶免疫檢定技術(shù)上發(fā)展出來(lái)的.斑點(diǎn)免疫金滲濾法作為一種初篩試驗(yàn)手段,體現(xiàn)了較高的早期診斷價(jià)值,有著很好的實(shí)用前景.李春暉等人[2]認(rèn)為在糞便隱血檢測(cè)中,膠體金滲濾法的靈敏度、抗干擾能力均優(yōu)于鄰甲苯胺法.李如林等[3]利用ELISA、流式微球載體技術(shù)(FMA)和膠體金滲濾三種不同方法進(jìn)行血清梅毒抗體檢測(cè),結(jié)果顯示ELISA、FMA和DIGFA的三種方法靈敏度分別為96.00%、100%和94.00%,三種方法的特異性均為100%,提示三種方法的檢測(cè)結(jié)果具有極強(qiáng)的一致性.

1.2 膠體金免疫層析法上世紀(jì)90年代初,在免疫金滲濾技術(shù)的基礎(chǔ)上又建立了一種更為簡(jiǎn)易快速的免疫層析檢測(cè)技術(shù).Marot-Leblond等[4]采用GICA法進(jìn)行陰道念珠菌檢測(cè),結(jié)果敏感性為100%,特異性為82%,優(yōu)于傳統(tǒng)革蘭染色鏡檢和微生物培養(yǎng).方春元等[5]用膠體金早早孕定性檢測(cè)試驗(yàn)和化學(xué)發(fā)光免疫法進(jìn)行比較:2.0IU以下與陰性的符合率為100%、2.0~1000.0IU與弱陽(yáng)性的符合率為97.2%、1000.0IU以上與強(qiáng)陽(yáng)性的符合率為97.5%,二者結(jié)果有著較好的一致性.王玉金等[6]建立了一種霍亂弧菌O139膠體金免疫層析快速檢測(cè)法,檢測(cè)霍亂弧菌O139群的最低檢出濃度為1X 105CFU/ml;與細(xì)菌培養(yǎng)法對(duì)比檢測(cè)184份臨床標(biāo)本,特異性和靈敏度均達(dá)100%.Brunt等采用GICA技術(shù)檢測(cè)大腸桿菌O157,檢測(cè)限為500個(gè)細(xì)菌[7].梁秋光等[8]用GICA檢測(cè)含鼠疫陽(yáng)性參考血清的鼠型動(dòng)物溶血血清45份,結(jié)果全部陽(yáng)性,而間接血凝微量法的對(duì)照結(jié)果則無(wú)法判斷,表明GICA法在應(yīng)對(duì)溶血血清方面有著很大的優(yōu)越性.孟芳等[9]對(duì)心臟疾病患者進(jìn)行心肌三聯(lián)測(cè)試,其靈敏度肌紅蛋白為100%、肌酸肌酶同工酶為96.3%和肌鈣蛋白為85.2%;結(jié)果表明膠體金法心肌三聯(lián)檢測(cè)卡,對(duì)診斷急性心肌梗死具有較好的臨床診斷價(jià)值.

2 半定量、定量檢測(cè)

膠體金本身具有明顯的紅色或粉紅色,可用肉眼與光學(xué)傳感器判斷檢測(cè)線(T)的顏色深淺,進(jìn)行半定量、定量分析.

2.1 半定量檢測(cè)法早期就有人提出硝酸纖維素膜上的顯色面積與抗體濃度呈正相關(guān)[10],從而建立了半定量測(cè)定方法;曹丹如等[11]建立一種伴有定量質(zhì)控點(diǎn)的斑點(diǎn)免疫金滲濾法,可半定量檢測(cè)人尿中的微量白蛋白.該立法與散射免疫濁度法的結(jié)果符合性良好,已經(jīng)達(dá)到了對(duì)尿微量白蛋白篩查試驗(yàn)的臨床要求.

2.2 定量檢測(cè)法隨著膠體金免疫定量檢測(cè)儀的出現(xiàn),開(kāi)創(chuàng)了一種新型的快速定量分析方法.定量分析方法的原理是基于硝酸纖維素膜上檢測(cè)線(T)的顏色深淺與待測(cè)物濃度呈現(xiàn)一定的比例關(guān)系[12];利用光學(xué)傳感器對(duì)試劑條進(jìn)行掃描,與事先制定的標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)比,從而得出定量分析的結(jié)果.由于膠體金試紙條檢測(cè)線顯色是一個(gè)動(dòng)態(tài)過(guò)程,試紙條的生產(chǎn)工藝、檢測(cè)時(shí)的工作環(huán)境以及待測(cè)樣本的差異性等因素都會(huì)影響到這一動(dòng)態(tài)顯色的結(jié)果[13].因此有人提出了一種檢測(cè)線(T)/質(zhì)控線(C)比值定量法.T/C比值法是依據(jù)硝酸纖維素膜上的T、C線顯色反應(yīng)的影響因素基本一致,通過(guò)T、C線吸光值的比值,在一定程度上可以消除時(shí)間、溫度和待測(cè)樣本等因素對(duì)試紙條顯色過(guò)程的影響[14],是一種較為合理的定量檢測(cè)方法.謝士嘉等[15]建立的膠體金免疫層析定量方法,能準(zhǔn)確地檢測(cè)樣品中的金黃色葡萄球菌腸毒素B,其檢出限為8ng/ml,線性范圍為8~1000ng/ml.聶聰?shù)萚16]所建立的基于T/C比值的膠體金免疫層析方法,對(duì)相思子毒素檢測(cè)的靈敏度已達(dá)到為30ng/ml,線性范圍30~ 600ng/ml,敏感性與ELISA法相近,已達(dá)到臨床檢測(cè)范圍.

3 膠體金技術(shù)的其他應(yīng)用

3.1 在免疫電鏡上的應(yīng)用隨著膠體金技術(shù)的不斷發(fā)展,人們將其與電鏡技術(shù)相結(jié)合,逐步形成了膠體金免疫電鏡技術(shù).它具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、定位精確等優(yōu)點(diǎn).吳淑燕等[17]建立膠體金標(biāo)記血小板膜糖蛋白的免疫電鏡技術(shù),結(jié)果表明利用膠體金技術(shù)可以顯著的提高樣品的檢出率,為開(kāi)展血小板功能研究奠定基礎(chǔ).

3.2 在納米磁與核酸適配體上的應(yīng)用納米磁分離-膠體金與核酸適配體-膠體金為當(dāng)前二種新型的膠體金技術(shù).納米磁性微粒和核酸適配體作為特異性識(shí)別元件,能夠?qū)蟹肿訌某煞謴?fù)雜的生物體系中分離出來(lái),起到樣品的濃縮作用,從而提高檢測(cè)的靈敏度和檢出率[18].

3.3 在多項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)技術(shù)上的應(yīng)用多項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)技術(shù)可以同時(shí)檢測(cè)多種成分,能節(jié)省大量的檢測(cè)時(shí)間和成本,具有很大的應(yīng)用價(jià)值,是未來(lái)的發(fā)展方向.吳堅(jiān)美等[19]建立了一種新型膠體金免疫層析試紙條,可同時(shí)檢測(cè)巨細(xì)胞病毒、風(fēng)疹病毒、弓形蟲(chóng)和單純皰疹病毒的4種抗體;與ELISA法對(duì)比,其符合率為97.90%~100%.吳文曄等[20]建立了一種能同時(shí)檢測(cè)檢測(cè)黃曲霉毒素B1和赭曲霉毒素A兩種真菌毒素的膠體金試紙條,二種毒素的靈敏度均可達(dá)到2.5μg/L,且二者之間互不干擾,重復(fù)性、穩(wěn)定性均良好.

4 結(jié)語(yǔ)

作為一種新的免疫學(xué)方法,免疫膠體金技術(shù)是繼免疫酶標(biāo)技術(shù)、免疫熒光技術(shù)、放射免疫技術(shù)之后的第四大免疫標(biāo)記技術(shù)[21].與其他方法比較,具有快捷方便等優(yōu)勢(shì),但也存在著檢測(cè)結(jié)果易受到試驗(yàn)環(huán)境因素的影響等不足.如血、尿等標(biāo)本形成的試紙條背景噪聲,對(duì)儀器定量分析有明顯的干擾作用[22].另外,免疫膠體金與其他傳統(tǒng)檢測(cè)方法相比,在檢出率、靈敏度方面都還存在一定的差異.有報(bào)道以ELISA法為標(biāo)準(zhǔn)時(shí),免疫膠體金法測(cè)定HBsAg的檢出率為56.76%(105/185)[23];以電化學(xué)發(fā)光免疫分析法為標(biāo)準(zhǔn)時(shí),檢出率只有為32.00%(16/50)[24].穆煜等[25]將膠體金免疫層析法甲型/乙型流感快速檢測(cè)試劑用于H1N1型流感病毒的篩查,其陽(yáng)性預(yù)示值為40.0%,陰性預(yù)示值為95.8%;實(shí)驗(yàn)靈敏度為66.7%,診斷特異性是88.5%.認(rèn)為此法作為初步篩查實(shí)驗(yàn)時(shí)還具有一定的局限性.

由此可見(jiàn),有必要建立一套膠體金制備的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系,以保證試劑質(zhì)量,提高檢測(cè)穩(wěn)定性.同時(shí)將免疫膠體金與其他不同平臺(tái)相結(jié)合,可使其檢測(cè)技術(shù)再上一個(gè)新的臺(tái)階,在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用也會(huì)更為廣泛,對(duì)于急診標(biāo)本或疫情現(xiàn)場(chǎng)的快速檢測(cè)都有著重大意義.

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2013-12-13;

2014-01-07)

章小雨,女,1990年出生,檢驗(yàn)師,研究方向?yàn)槲⑸餀z驗(yàn).

戴曉愛(ài),女,1968年出生,副主任技師,研究方向?yàn)槲⑸餀z驗(yàn).